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金属β内酰胺酶基因及其检测方法
碳青霉烯类药物是一组新型β内酰胺类抗生素(如:亚胺培南、美洛培南).此类抗生素抗菌谱广,对革兰阳性和革兰阴性菌、需氧菌、厌氧菌皆有很强抗菌活性[1].药物学研究发现,碳青霉烯类药物对大多数β内酰胺酶高度稳定(含ESBLs、Ampc酶),与青霉素结合蛋白(PBPs)亲和力强,并能够有效渗透细菌外膜进入周质间隙,具杀菌活性强大等特点.被认为是目前控制临床感染性疾病为有效药物之一.但随着广泛使用和过度使用,其耐药性也逐渐增加,在铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌中尤甚.
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家蝇抗菌肽基因Cecropin在COS-7细胞中的表达及产物活性初步研究
目的 初步研究家蝇抗菌肽Cecropin cDNA在非洲绿猴肾细胞株COS-7中的表达及其产物的抗菌作用.方法 以Cecropin基因为模板设计2条特异引物,扩增在C端含6×His标签的Cecropin开放阅读框序列,将此序列与真核表达载体pcDNA3.1(+)进行重组,构建重组质粒pcDNA3.1(+)/Cecropin-His_6.以脂质体Lipofectamine TM 2 000为载体,对COS-7细胞进行重组质粒pcDNA3.1(+)/Cecropin-His_6和空载体pcDNA3.1(+)的转染,72 h后收集细胞培养上清液,表达产物经His-Trap HP亲合层析柱分离纯化和Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定后,进行杀菌活性的初步检测.结果 转染了重组质粒pcDNA3.1(+)/Cecropin-His_6细胞培养上清液的纯化物,行Tricine-SDS-PAGE电泳得到与预期分子量大小相符的单一目的条带,该纯化物对大肠杆菌E.coli K12D31具有一定的杀菌活性.结论 家蝇抗菌肽Cecropin cDNA在COS-7中得到了正确表达.
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贝氏柯克斯体抑制单核细胞的杀菌活性
目的 比较贝氏柯克斯体感染单核细胞和非感染单核细胞的蛋白谱,发现该柯克斯体感染诱导单核细胞表达蛋白.方法 用贝氏柯克斯体I相毒株感染人单核细胞(THP-1),采用等电聚焦和SDS-PAGE双向电泳对感染单核细胞和非感染单核细胞同时做蛋白分离,用专业电泳图谱分析软件发现它们之间的差异表达蛋白,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪鉴定差异表达蛋白.结果 质谱分析鉴定97个差异表达蛋白,经蛋白氨基酸序列数据库检索和生物信息学分析发现其中15个差异表达蛋白参与调节单核细胞的吞噬、杀菌、细胞凋亡等.结论 贝氏柯克斯体侵入单核细胞诱导细胞某些蛋白分子差异表达,增强柯克斯体细胞内入侵、抑制单核细胞的杀菌活性和细胞凋亡,促进贝氏柯克斯体在细胞内生存.
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青霉素蓄积中毒过敏性休克1例报告
青霉素G是临床上常用的抗生素,因其杀菌活性强,全身分布好,毒性低,对敏感细菌感染的疗效满意等特点,受到临床上的青睐.其主要副作用为过敏反应,其发生率为1%～10%,过敏性休克发生率0.004%～0.4%,尽管青霉素皮试阴性,仍然会有少数病人发生迟缓性过敏反应甚至休克,死亡病例报告时有出现,其次为蓄积性中毒反应,因临床病例报告极少,应引起我们的注意.现将我们遇到的1例报告如下:
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二环己酮草酰二腙桥联的双核镉(Ⅱ)配合物的合成表征及杀菌活性
目的合成新的配合物,研究其结构与性质间的关系.方法以BCO为桥配体(BCO代表二环己酮草酰二腙),分别端接Mephen(Mephen代表5-甲基-1,10-邻菲咯啉)和Me2phen(Me2phen代表2,9-二甲基-1,10-1邻菲咯啉)合成两种配合物;经元素分析,摩尔电导及红外光谱手段进行表征,测试其杀菌活性.结果推定了配合物的结构,其杀菌活性优于BCO.结论配合物在空气中稳定,有较强的杀菌性,有进一步研究的价值.
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硫酸奈替米星治疗肺部感染疗效观察
硫酸奈替米星为新一代半合成氨基糖甙类抗生素,该药耐药菌产生的腺苷化酶稳定,均具有强大的杀菌活性,耳、肾毒性低.我院于2005年4月～2006年5月应用本药治疗肺部感染,效果满意.现报告如下.
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菌必治致迟发性过敏性休克1例
菌必治是供针剂使用的长效、广谱头孢菌素,它以二钠盐的形式存在,通过抑制细胞壁的合成而具有杀菌活性,故临床广泛应用.但临床使用中并没有像青霉素～样严格要求进行皮试操作,笔者遇1例因菌必治出现过敏性休克.报告如下:
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抗结核药物早期杀菌活性的测定
抗结核药物的早期杀菌活性(EBA)测定因受试人较少,时间亦短,有可能成为一种快速而简易的人体药效学指标而被推广应用.该文就EBA测定的目的、意义;EBA测定中的问题与改进;EBA测定在新药开发和化疗研究中的应用三方面进行了阐述.
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悬灸对小鼠巨噬细胞杀菌作用和炎症因子表达的影响
目的 观察悬灸对巨噬细胞的杀菌效果和炎症因子表达水平的影响,为悬灸法应用于感染性疾病提供实验依据.方法 采用腹腔注射大肠杆菌造成腹腔急性感染时的巨噬细胞细菌吞噬模型,用艾条对小鼠关元穴悬灸,结束后用平板计数检测悬灸后腹腔巨噬细胞胞内细菌的存活率,同时对细胞内炎性细胞因子的表达量进行荧光定量RT-PCR分析.结果 悬灸可以显著地促进巨噬细胞对细菌的杀死与清除,其作用随着艾灸时间的延长而增强;另一方面,悬灸可引起部分促炎细胞因子表达量的下调,减轻机体炎症反应.结论 悬灸可以通过温热刺激招募和刺激细胞引起巨噬细胞依赖性的抗感染、抗炎作用.
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衍生自大肠杆菌OmpA信号肽的多肽P-KKK杀菌作用研究
目的 研究和比较大肠杆菌OmpA信号肽衍生多肽P-KKK在体外对不同细菌的杀菌效应.方法 采用琼脂铺板计数法测定衍生多肽P-KKK对革兰阳性(G+)茵和革兰阴性(G-)菌的杀菌活性,将不同浓度的衍生多肽P-KKK分别与3种G+菌(金黄色葡萄球菌、屎肠球菌、枯草芽孢杆菌)和3种G-茵(大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌、绿脓杆菌)在37℃孵育2h,铺板后罩于37℃中培养18～24 h,记录每一琼脂板上茵落形成数量(CFU),计算多肽P-KKK的杀菌率.结果 衍生肽P-KKK对G+菌具有较强的杀菌活性,浓度在200 ug/mL时,能杀灭98.5％以上的G+茵,浓度为40 ug/mL时杀菌率也达80.2％以上;对G-菌也有较强的杀菌活性,浓度在200 ug/mL时,能杀灭93.8％以上的G-茵,浓度为40 ug/mL时杀菌率也达15.2％～ 99.7％.结论 大肠杆菌OmpA信号肽衍生肽P-KKK对G+茵及G-茵均具有明显的杀菌活性,进一步对其结构与功能进行研究将有助于开发出新型抗菌药物.
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将大肠杆菌OmpA信号肽改造成为抗菌肽的研究
目的 探讨将大肠杆菌OmpA信号肽改造成抗菌肽的方法以及衍生肽的杀菌活性.方法 以由21个氨基酸残基组成的大肠杆菌OmpA信号肽(P-AQA)为模板,通过改变其C末端的氨基酸组成,分别合成衍生多肽:(MKKTAIAIAVALAGFARVRQK,P-RQK)、(MKKTAIAIAVALAGFARRKKK,P-KKK)、(MKKTAIAIAVALAGFAD VDQD,P-DQD) .采用琼脂铺板计数法测定以上3条衍生多肽及肠杆菌OmpA信号肽对革兰阳性菌(G+)(金黄色葡萄球菌)和革兰阴性菌(G-)(大肠杆菌)的杀菌活性.结果 天然信号肽P-AQA不溶解水,无杀菌活性;在信号肽C末端加入酸性氨基酸的衍生肽P-DQD 对G+菌和G-菌均无杀菌作用;其余两条在末端加入碱性氨基酸的多肽对G+菌和G-菌均有较强的杀菌作用,其中末端带有5个碱性氨基酸的多肽(P-KKK)其杀菌活性强于有3个碱性氨基酸的多肽(P-RQK)5倍.结论 将大肠杆菌OmpA信号肽C末端中的中性氨基酸替换为碱性氨基酸后,具有明显的杀菌活性,其杀菌活性可能与碱性氨基酸的数量有关.
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人ⅠB型磷脂酶A2N端衍生多肽结构与杀菌活性关系的研究
目的 探讨人ⅠB型磷脂酶A2(group Ⅰ B phospholipase A2,PLA2 ⅠB)N末端衍生12肽的结构与杀菌活性的关系.方法 以人PLA2ⅠB一级结构N末端的12个氨基酸残基为模板,分别合成结构不同的多肽,采用琼脂铺板计数法,记录并计算不同浓度(1000、200、40、8μg/mL)的多肽对革兰阳性(G+)菌(金黄色葡萄球菌)和革兰阴性(G-)菌(大肠埃希菌)的杀菌率.结果 PLA2-Q4D、PLA2-C11R抗菌活性明显降低.第4位中性氨基酸Q替换为酸性氨基酸后(PLA2-Q4D),失去了杀G-菌的作用,杀G+菌的活性也明显降低;第11位C替换为精氨酸后(PLA2-C11R)也明显失去了杀G-菌的作用,杀G+菌的活性也明显降低.结论 人PLA2ⅠB衍生肽PLA2的杀菌作用与其疏水性氨基酸的比例和位置有关,也与碱性氨基酸的量和位置有关,在特定位置改变疏水性氨基酸可降低它的杀菌活性,增加碱性氨基酸的量不一定能提高它的杀菌活性.
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大鼠血小板杀菌活性研究
目的:探讨血小板在宿主防御细菌感染中的作用.方法:Wistar大鼠麻醉后腹主动脉取血,离心分离出富血小板血浆(PRP),从PRP中分离血小板,以不同的诱导剂[凝血酶、二磷酸腺苷(ADP)和肾上腺素(AD)]分别诱导血小板及PRP,观察其杀菌活性.结果:分别经ADP、AD刺激的PRP和血小板均无杀菌作用,而血小板和PRP经凝血酶刺激后,均具有较强杀灭革兰阳性(G+)细菌的作用,但对革兰阴性(G-)细菌却无杀灭作用.结论:大鼠血小板经诱导的可释放杀菌物质,在机体防御细菌感染时发挥重要的作用.
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低浓度肝素对重组人血小板型磷脂酶A2杀菌活性的抑制
目的:研究肝素对重组人血小板型磷脂酶A2(PLA2)杀菌活性的影响,探讨血小板型PLA2电荷性质在其杀菌机制中的作用.方法:将金黄色葡萄球菌与重组人血小板型PLA2共同孵育,试验组加入肝素,通过测定细菌菌落数来评价杀菌效果.结果:低浓度肝素对重组人血小板型PLA2杀菌功能有明显抑制作用,仅0.030 0 U/ml的肝素其杀菌抑制率达100%.结论:①血小板型PLA2的正电荷性在其杀菌作用中是关键因素;②肝素是血小板型PLA2一种有效的抑制剂.
关键词： 重组人血小板型PLA2 杀菌活性 肝素 抑制作用 -
哺乳生物血小板型磷脂酶A2分子的进化
目的:了解具杀菌活性的哺乳生物血小板型磷脂酶A2(PLA2)分子进化的特点.方法:将所有已知哺乳生物的血小板型和胰腺型PLA2 的cDNA和基因资料进行收集并加以统计和分析.结果:哺乳生物血小板型PLA2基因突变的频率较胰腺型PLA2高,碱基取代中非同义取代数高于同义取代数.血小板型PLA2的蛋白质结构中可形成对酸不稳定的肽键的氨基酸明显较少,而易被发酵产物乙酰基不可逆化学修饰的精氨酸明显高于胰腺型.结论:血小板型PLA2的进化速度相对较快,其进化的压力有二:①形成对酸稳定的结构;②离开了易产生乙酰基而修饰精氨酸的环境.其结果使血小板型PLA2形成带较多正电荷的碱性分子,具有了杀菌活性.
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人ⅡA型磷脂酶A2碳末端衍生多肽结构与杀菌活性关系的研究
目的:研究人ⅡA型磷脂酶A2(group ⅡA phospholipase A2,PLA2GⅡA)碳末端衍生多肽的分子结构与杀菌活性的关系.方法:以人PLA2GⅡA一级结构碳末端的26个氨基酸残基为模板,分别合成3条多肽如下:①直链肽P1-26;②将其中一半的碱性氨基酸替换成中性氨基酸的P2-26;③碱性氨基酸(组氨酸和赖氨酸)全被替换成精氨酸的P3-26.采用琼脂铺板计数法测定多肽的杀菌活性.将不同浓度的3种多肽分别与G+菌(枯草杆菌)和G-菌(大肠杆菌)在37 ℃孵育2 h,然后铺板并置于37 ℃恒温箱培养18～24 h,记录每一琼脂板上的菌落数(CFU),并计算多肽作用后的杀菌率.结果:①碱性氨基酸减少的P2-26杀G+菌活性降低,仅为P1-26的1/4,但对G-菌杀菌效应稍增高;②碱性氨基酸全为精氨酸的P3-26杀G+菌和G-菌的活性与P1-26相比均明显降低.结论:人PLA2GⅡA衍生杀菌多肽P1-26的杀菌作用与其所含有的碱性氨基酸密切相关,减少碱性氨基酸的量可以减低它杀G+菌的活性,改变碱性氨基酸的类型也可以影响它的杀菌活性.
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灵长生物抗菌蛋白ⅡA型磷脂酶A2氨基酸取代与分子进化的关系
目的:了解灵长生物的抗菌蛋白ⅡA型磷脂酶A2氨基酸取代的特点及其与分子进化的关系.方法:对人、猩猩和猴3种哺乳类灵长生物的抗菌蛋白ⅡA型磷脂酶A2的氨基酸顺序进行两两比较,分析它们之间相互取代的位点、频率和性质.结果:①人和猩猩、人和猴、猩猩和猴之间分别有4,12,12个氨基酸残基发生取代,且主要发生在带电荷的氨基酸;而在发生的氨基酸取代中,又以带正电荷的氨基酸(碱性氨基酸)为主;②氨基酸取代主要集中在有限的4个区域,且为功能重要的区域.结论:哺乳类灵长生物抗菌蛋白ⅡA型磷脂酶A2的蛋白质分子进化较快,与其所具有的较强的杀菌活性相适应.
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血小板型磷脂酶A2的研究进展
磷脂酶A2(PLA2)是一大类能水解磷脂特定酯键,结构和功能不同的酶.其中,血小板型PLA近年被发现具较强的杀灭革兰氏阳性茵的活性,在宿主防御细茵感染时扮演重要角色.本文就血小板型PLA2的杀菌作用、杀菌机制等方面的研究进展做分析和介绍.
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胸腺五肽及其衍生肽的杀菌活性研究Δ
目的：研究胸腺五肽及其衍生肽的杀菌活性。方法：采用琼脂铺板计数法测定胸腺五肽[精氨酸（R）-赖氨酸（K）-天冬氨酸（D）-缬氨酸（V）-酪氨酸（Y），RKDVY]及其衍生肽1[RKN（天冬酰胺，N）VY]、衍生肽2（RKKVY）对革兰阴性（G－）菌（变形杆菌、大肠埃希菌）和革兰阳性（G+）菌（金黄色葡萄球菌、粪肠球菌）的杀菌活性，其中五肽剂量为15.625～1000μg/ml，细菌数为102 CFU。结果：3种五肽对G－菌均有杀菌活性，且RKKVY、RKNVY杀菌活性强于RKDVY（P＜0.01），RKKVY与RKNVY间差异无统计学意义（P＞0.05）；对G+菌亦有杀菌活性，其杀菌活性由强到弱依次为RKKVY＞RKNVY＞RKDVY（P＜0.01）。结论：胸腺五肽及其衍生肽对G－菌和G+菌均有杀菌活性，具有量效关系。
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人Ⅰ型磷脂酶A2的N末端衍生多肽PLA2N1-15的杀菌活性研究
目的:观察人Ⅰ型磷脂酶A2(PLA2)的N末端衍生多肽PLA2N1-15对不同细菌的体外杀菌活性.方法:以人Ⅰ型PLA2N末端的15个氨基酸残基为模板,合成多肽PLA2N1-15.采用琼脂铺板计数法,记录并计算不同质量浓度(1 000、250、62.5、15.625 μg/ml)的PLA2N1-15对革兰阳性(G+)菌(金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、枯草芽孢杆菌)和革兰阴性(G)菌(大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌)的杀菌率.结果:15.625、62.5、250、1 000 μg/ml的PLA2N1-15对G+菌的杀菌率分别为10％～19％、36.55％～89.73％、83％～100％、96％～100％,对G菌的杀菌率分别为8.86％～22.63％、21.61％～40.55％、40％～83％、87％～93％.结论:高浓度PLA2N1-15对G+和G-均具有较强的杀菌活性,特别是对G+.
