首页 > 文献资料
-
小肠粘膜下膀胱尿路上皮和平滑肌细胞联合培养：组织工程学技术的 应用
小肠粘膜下层本身含有生长因子，能够在体内促 进膀 胱的再生。用标准酶消化或外植技术建立人膀胱上皮细胞和平滑肌细胞的原代培养，将培养 的细胞以1×105/cm2的密度点状种植于小肠粘膜下层，孵育3、7、14和28 d分别收获标 本。有5种不同的培养方法：将膀胱上皮细胞单独种植于小肠粘膜下层的粘膜表面、将平滑 肌细胞单独种植于粘膜表面、将平滑肌细胞种植于粘膜表面后1 h再将膀胱上皮种植进行分 层的联合培养、将平滑肌细胞种植于浆膜表面24 h后将膀胱上皮细胞种植于粘膜表面进行三 明治样培养、将膀胱上皮和平滑肌细胞混合后种植于粘膜表面联合培养。在指定时间收获标 本后用福尔马林固定，进行常规组织学分析，包括masson染色。研究特殊的细胞生长机制， 尤其注意细胞形态、细胞增殖和分层、细胞排列、假覆层尿路上皮的存在和基质的穿透。为 区分联合培养中的平滑肌细胞和 尿路上皮细胞，应用α-平滑肌肌动蛋白抗体和细胞角蛋白AE1/AE3进行了免疫组织化学分 析。体外培养结果在小肠粘膜下层尿路上皮细胞和平滑肌细胞三维空间生长。单独尿路上皮 和平滑肌细胞培养，细胞可以生长并分层，但没有或很少基质穿透。与此相比，分层培养、 混合培养和三明治样培养中平滑肌细胞的膜穿透明显增加，分层的和三明治样培养技术导致 有序的细胞排列、有规律的假覆层尿路上皮的形成和多层的平滑肌基质穿透增加。混合细胞 培养技术虽然使平滑肌细胞基质穿透作用明显，但没有使细胞有序排列。免疫组化研究证实 尿路上皮和平滑肌细胞维持表型标记物的表达。因此小肠粘膜下层在体外支持人膀胱尿路上 皮细胞的三维空间生长，采用不同的细胞种植技术进行联合培养，对将来在组织工程学中的 应用非常重要。
-
骨髓基质干细胞复合小肠黏膜下层体外构建组织工程骨膜的实验研究
目的探讨用猪小肠粘膜下层(SIS)作支架,复合骨髓间充质干细胞(BMSC)体外构建组织工程骨膜的可行性.方法用常规方法培养BMSC,再与SIS进行体外复合培养,分别进行相差显微镜、透射电镜、扫描电镜和组织学检查.观察BMSC在SIS上的生长、分化、增殖及细胞分泌细胞外基质情况.结果 BMSC在SIS材料上粘附、增殖,分泌大量的细胞外基质成份,细胞功能活跃,在SIS上成多层生长,厚度随复合培养时间的延长而增加,类似生物骨膜.结论 SIS与BMSC在体外复合培养可以构建出类似生物骨膜的组织工程骨膜,为进一步研究体内成骨奠定基础.
-
天然生物材料支架的应用
天然生物材料支架具有与细胞外基质结构相似,生物相容性好等特点,在组织工程中作为细胞培养的支架材料具有明显的优势.羊膜取材容易,易于加工处理,无毒无刺激性,具有抗微生物的特性和促进组织修复的生物学作用;小肠粘膜下层无免疫性,含有多种生长因子,具有促进细胞黏附、增殖和分化等作用.血管、膀胱、软骨等脱细胞基质分别用于相应的组织缺损修补,易达到结构再生和功能的恢复.本文就上述支架材料在组织上程中的应用进行综述.
-
脱细胞小肠黏膜下层与脱细胞心包修复大鼠腹壁缺损的对比研究
目的:观察小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)和脱细胞心包(pericardium,PC)修复大鼠腹壁缺损的效果,比较两种生物材料相容性.方法:SD大鼠40只,体重200～250g,手术造成3cmx2cm全层腹壁缺损,随机分为二组(n=20),分别采用相同面积的小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)和脱细胞真皮基质(acellular dermal matr,ADM)补片进行修补.术后1、2、4和8周分批取出腹壁修复材料,行动物一般情况观察、腹腔内粘连情况评价、力学强度测定及组织学观察.结果:术后动物都成活,两种材料术后8周均无疝瘘发生,缺损得到完整修复.术后各期SIS组的腹腔粘连评分明显低于PC组.术后4、8周,SIS组力学强度强于PC组,有统计学意义;组织学观察两组未见明显免疫排斥反应,SIS组的组织再生和重塑、血管化优于PC组;术后炎症反应两组无明显差异.结论:SIS和PC均能修复大鼠腹壁全层缺损,SIS在生物相客性方面优于PC.
-
体内组织工程材料-小肠粘膜下层的力学性能
目的对体内组织工程材料-小肠粘膜下层的力学性能进行检测.方法用岛津AG20KNA材料试验机对完成所有处理的SIS进行测试.结果管壁不剖开组的屈服应力为7.72±0.70MPA,应变为42.66±14.69;剖开管壁,平行于管腔纵轴拉伸组的屈服应力为7.57±1.94MPA,应变为42.34±8.29;剖开管壁,垂直于管腔纵轴拉伸组的屈服应力为3.91±0.91MPA,应变为71.59±3.64.结论SIS 在纵轴方向(无论是否剖开管壁)的抗拉强度相当于肌腱和韧带组织的1/7到1/14.SIS具有各向异性的力学特点,无论管壁剖开与否,沿SIS管腔纵轴方向拉伸两组的屈服应力和大应力比剖开管壁,垂直于管腔纵轴拉伸组的屈服应力和大应力大两倍.而垂直管腔纵轴拉伸组的屈服应变和大应变较大,达70%以上.
-
小肠粘膜下层复合成骨诱导的骨髓基质干细胞体内成骨的实验研究
目的 探讨利用组织工程方法 ,以小肠粘膜下层为支架材料复合成骨诱导后的骨髓基质干细胞构建骨组织的可行性.方法 将取自兔骨髓中的骨髓基质干细胞经成骨诱导液诱导后,与经处理的猪小肠粘膜下层在体外共培养.1周后,将共培养的猪小肠粘膜下层埋置于无胸腺裸鼠皮下.分别在不同时间进行扫描电镜、透射电镜、组织学和免疫组织化学观察.结果 体外培养时,见细胞与材料粘附良好,且分泌大量的细胞外基质,细胞分化、增殖活跃.大体观察植入体内的细胞-材料复合物,见颜色变白,组织硬度增加,组织学和电镜观察见有大量骨组织形成.免疫组化示细胞为具有分泌特异性骨钙蛋白的成骨细胞.结论 骨髓基质干细胞经成骨诱导为成骨细胞后与小肠粘膜下层共培养,植入裸鼠体内后可形成骨组织,小肠粘膜下层是一种良好的骨组织工程支架材料.
-
小肠粘膜下层组织工程支架材料的生物相容性研究
目的 观察小肠粘膜下层(SIS)的生物相容性和作为组织工程支架材料的可行性.方法 参照国际标准ISO10993-1制定的医疗器械生物学评价的相关方法和标准,通过细胞毒性试验、热原试验、溶血试验、致敏试验、肌肉刺激试验等体内外生物学实验相结合的方法评价SIS的生物相容性及免疫原性.结果 实验证明小肠粘膜下层细胞相容性良好,不溶血,无致热、致敏反应,肌肉刺激试验的组织学检查见SIS周围无明显炎症及排斥反应,材料部分降解并见大量结缔组织生长.结论 SIS具有良好的生物相容性和免疫原性,可作为组织工程的支架材料.
-
组织工程膀胱的血管化及其策略
一些先天性的疾病(如膀胱外翻)或炎症、感染、肿瘤以及创伤等可引起膀胱结构和功能的缺失或损害.常常需要一定的组织或材料进行膀胱的修复和重建[1].在探索膀胱修复和重建的历史上,筋膜、膀胱粘膜下层、大网膜、小肠粘膜下层、合成材料等都南于生物相容性、机械力学性能以及植入物萎缩、纤维化、结石形成等并发症而宣告失败.迄今为止,利用肠道进行膀胱的修复和重建仍是进行膀胱替代的金标准[2].但是,由于肠道处在泌尿系的环境中,可能会引起代谢紊乱、感染、结石形成甚至恶变等一系列并发症[3-4].因此,探寻合理的膀胱替代物是医学界的一项挑战.而组织工程技术提供了新的思路和方法[2.5].
-
多种材料对椎板切除术后粘连干预作用的实验研究
目的:通过动物实验探索预防椎板切除术后粘连材料的效果,为临床防粘连材料的使用提供新选择.方法:新西兰兔54只,随机分成6组；行椎板切除术动物造模,6组依次设为缺损区旷置组(A组)、小肠粘膜下层覆盖组(B组)、透明质酸纳凝胶覆盖组(C组)、人工骨板覆盖组(D组)、自体脂肪层覆盖组(E组)及地塞米松组(F组).术后4w,8w,12w分批取材,4w,8w和12w的标本行大体和光镜检查及计算机图像分析；4w和12w的标本行透射电镜检查.结果:A、D、E、F组早期均见硬膜外纤维组织增生明显,B、C组早期硬膜外瘢痕形成少.后期A、C、D、E、F组硬膜外形成致密瘢痕,与硬膜难以分离,B组硬膜外轻度增厚,硬膜外腔未见明显纤维组织增生或粘连.分别按Rydell、改良Nussbaum标准分级,并进行计算机图像分析,统计分析显示B组与A、C、D、E、F组均存在显著差异(P＜0.05).结论:小肠黏膜在预防椎板切除术后硬膜外瘢痕粘连效果优于其它材料.透明质酸钠早期对预防硬膜外粘连有效,长期效果不佳.人工骨自体脂肪和地塞米松对预防椎板切除术硬膜外瘢痕粘连效果不佳.
-
空肠多发脂肪瘤伴可复发性肠套叠一例
患者男,38岁.半个月前无明显诱因出现间断性上腹剑突下疼痛不适,肌饿时明显,伴反酸、乏力.近5天来上腹疼痛消失,但乏力加重且伴心慌,解柏油样稀便而入院.体检:患者神智清醒,精神欠佳,贫血貌,心肺正常,腹平软,无压痛,肠鸣音正常,未触及包块.实验室检查:Hb 60g/L,大便潜血(++),其他无特殊. X线检查: 口服小肠低张气钡双对比造影显示:距屈氏韧带20cm及90cm处空肠内各见一约2.0cm×2.5cm的椭圆形充盈缺损,边缘光整,位置固定,加压后形态稍有改变(图1);肿瘤近端表面光滑,邻近肠粘膜皱襞显示清楚,轻度撑开,无破坏;肿瘤远端表面见直径约0.5cm龛影,俯卧位见病变区空肠套叠(图2),仰卧位自动回复(图3).拟诊:空肠多发性良性肿瘤伴溃疡及可复性空肠套叠(考虑空肠多发息肉).手术所见: 小肠距屈氏韧带约25cm及85cm处分别见一约2cm×2cm肿瘤,质软,远处肿瘤表面溃疡为1cm×1cm,有陈旧性出血,空肠呈轻度扩张状态,棱形切开肿瘤,肉眼见为黄色质软肿瘤.病理诊断: 小肠粘膜下层脂肪瘤.
-
小肠黏膜下层材料在青少年(14～18岁)腹股沟疝修补术中应用的初步探讨
目的 探讨小肠黏膜下层材料生物补片在14～18岁青少年腹股沟疝患者治疗中的应用价值.方法 采用前瞻性研究方法,将入组的47例患者分为2组:对照组与治疗组.治疗组使用小肠黏膜下层材料行腹股沟疝平片无张力修补术,对照组采用传统的疝囊高位结扎术治疗.观察并分析术后并发症及复发情况.结果 治疗组平均手术时间51.6±12.7 min,高于对照组的38.2±7.5 min(P<0.05),治疗组平均住院时间3.4±1.1 d,低于对照组5.1±1.3 d(P<0.05).术中出血量14.4±6.5 mL,与对照组13.0±5.9mL比较,无统计学差异(P>0.05).在术后的并发症的发生情况、复发率、术后疼痛评分上,两组无明显差异.结论 对于14～18岁的青少年腹股沟疝患者,使用小肠黏膜下层材料行无张力疝修补术效果良好,能够缩短住院时间,不会增加术后的疼痛不适与并发症的发生率,安全有效.
-
小肠粘膜下层与雪旺细胞生物相容性的研究
目的 研究猪小肠粘膜下层(SIS)与体外培养的鼠雪旺细胞(SCs)的生物相容性.方法 在体外将分离培养的SD乳鼠SCs接种于制备好的猪SIS上进行复合培养,通过相差显微镜和扫描电镜观察不同时间段SCs在SIS上的黏附、生长与增殖情况,用酶联免疫吸附测定和逆转录聚合酶链反应方法检测SCs分泌神经生长因子-β和脑源性神经生长因子的情况.对照组为接种于未平铺SIS的孔中正常培养的SCs.结果 培养3～5 d后,相差显微镜下见SIS边缘SCs较为密集,黏附良好,多呈长梭形生长;扫描电镜观察见SIS表面SCs增殖黏附良好,胞体突起显著,呈端对端连接或成束排列,细胞表面可见蛋白颗粒分泌.酶联免疫吸附测定和逆转录聚合酶链反应方法检测发现,SCs与SIS复合培养后,神经生长因子-β和脑源性神经生长因子分泌良好,与对照组的SCs差异无统计学意义.结论 猪SIS与鼠SCs有良好的生物相容性,有望用作支架,供SCs黏附生长,构建组织工程神经,用于修复周围神经缺损.
-
小肠粘膜下层的制备及细胞相容性的实验研究
目的了解猪小肠粘膜下层 (SIS)的细胞相容性,探讨用 SIS为生长载体复合骨髓基质干细胞(BMSCs)构筑组织工程骨的可能性. 方法用物理和化学方法处理猪小肠粘膜下层,将兔骨髓基质干细胞与 SIS进行体外复合培养,分别进行组织学、相差显微镜和扫描电镜观察. 结果经物理和化学处理的 SIS纯度高,孔隙多,胶原纤维未受损; BMSCs在 SIS材料上生长、粘附、增殖 ,并能长入材料的孔隙内 ,分泌大量的细胞外基质成分. 结论 SIS的细胞相容性良好 ,不影响 BMSCs的形态,对细胞生长和功能表达无抑制作用,可以用作骨组织工程的支架材料.
-
小肠粘膜下层表面肝素化及肝素化后其抗凝血性能的研究
目的 研究等离子体引发血管组织工程支架--小肠粘膜下层(SIS)表面肝素化及肝素化后SIS膜的抗凝血性能.方法 利用等离子体引发技术在SIS膜表面结合肝素,通过体外凝血时间检测及循环血流下观察肝素化SIS管腔的长期通畅性,以评价SIS膜的血液相容性.结果 肝素结合到低温等离子体引发的SIS膜表面,肝素化SIS膜表面水接触角降低,亲水性增强,表面自由能增大,其凝血酶原时间、部分凝血活酶时间及凝血酶时间明显延长,肝素化SIS小口径血管支架保持通畅达6周.结论 SIS膜表面通过等离子体进行肝素固化处理后具有良好而持久的抗凝血性能,表现出良好的血液相容性.
-
不同比例小肠粘膜下层复合双相磷酸钙修复骨缺损的组织学研究
目的 观察小肠粘膜下层(small intestinal submucosa,SIS)和双相磷酸钙(hydroxyapatite-tricalcium phosphate,HA-TCP)以不同比例制备的复合材料修复兔股骨髁缺损的效果,探讨复合仿生骨组分的合适比例.方法 分别以SIS和HA/TCP质量比1,0.5,0.25制备复合材料.取36只新西兰大白兔,制备双侧股骨髁直径6 mm、深10 mm的骨缺损模型,分别采用按三种比例制备的复合材料修复缺损[SIS/HA-TCP(1)、SIS/HA-TCP(0.5)及SIS/HA-TCP(0.25)组].术后2、4、8和12周观察三种材料修复骨缺损的大体情况,并采用组织学和图像分析技术评价材料的修复效果.结果 组织学观察SIS/HA-TCP(1)组在12周有少量新生骨形成,骨缺损未修复.SIS/HA-TCP(0.5)组在2周即出现新生骨,4周新生编织骨增多并形成骨小梁融合,8周出现大量小髓腔,12周骨缺损基本修复,并出现大量板层骨.SIS/HA-TCP(0.25)组成骨过程基本与SIS/HA-TCP(0.5)组相似.组织学评分,术后各时间点SIS/HA-TCP(1)组均低于另两组(P＜0.05),4、8周SIS/HA-TCP(0.5)组和SIS/HA-TCP(0.25)组差异无统计学意义(P＞0.05),2、12周SIS/HA-TCP(0.5)组优于另两组(P＜0.05).在新生骨形成及HA-TCP颗粒降解方面,术后8、12周各组之间差异均有统计学意义(P＜0.05),且SIS/HA-TCP(1)组明显差于另两组,但SIS/HA-TCP(0.5)组优于SIS/HA-TCP(0.25)组.结论 SIS与HA-TCP以质量比为0.5制备的复合材料对骨缺损具有良好的修复作用;0.5的成分比可作为构建复合仿生骨支架材料的参考指标.
-
碱性成纤维细胞生长因子缓释微球对许旺细胞在小肠粘膜下层增殖活性的影响
目的：观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)缓释微球对许旺细胞(SC)在小肠粘膜下层(SIS)上增殖影响。方法运用双酶两步消化法对 SC 进行体外分离、培养、纯化,将 bFGF-PLGA 缓释微球(bFGF-PLGA-MS)与 SC 及 SIS进行体外复合培养,并以游离 bFGF 组及单纯培养液组进行对比,观察 bFGF-PLGA 缓释微球对 SC 在 SIS 上增殖影响。结果运用双酶两步消化的体外原代培养方法获取的许旺细胞数量较多,细胞纯度可达90%以上。细胞的体外增殖活性良好,细胞增殖周期约为6~7d,培养后2~7d 为对数生长期,第7d 后进入生长平台期； bFGF 缓释微球能持续地促进许旺细胞在 SIS 上的增殖；细胞增殖周期缩短,细胞能较稳定地保持着良好的活性；提高了细胞增殖指数,并使 SIS 上的 SC持续保持较高的增殖活性；细胞数量与 bFGF 含量的相关系数为0.988(P =0.02),表明两者间有明显正相关关系。结论bFGF-PLGA 微球的药物缓释促进了SC 在SIS 上持续而稳定的增殖,为以SC 复合SIS 构建人工神经提供了有利条件。
-
碱性成纤维细胞生长因子缓释微球对许旺细胞在小肠粘膜下层细胞粘附活性的影响
目的 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)缓释微球对许旺细胞(SC)在小肠粘膜下层(SIS)上的粘附影响.方法 运用双酶两步消化法对SC进行体外分离、培养、纯化,将bFGF-PLGA缓释微球(bFGF-PLGA-MS)与SC及SIS进行体外复合培养,并以游离bFGF组及单纯培养液组进行对比,观察bFGF-PLGA缓释微球对SC在SIS上粘附影响.结果 运用双酶两步消化的体外原代培养方法获取的雪旺细胞数量较多,细胞纯度可达90％以上.细胞的体外增殖活性良好,细胞增殖周期约为6～7天,培养后2～7天为对数生长期,第7天后进入生长平台期; bFGF缓释微球能持续地促进雪旺细胞在SIS上的粘附、增殖及迁移;细胞增殖周期缩短,细胞能较稳定地保持着良好的活性；提高了细胞增殖指数,并使SIS上的SC持续保持较高的增殖活性;细胞数量与bFGF含量的相关系数为0.988(P=0.02),表明两者间有明显正相关关系.结论 bFGF-PLGA微球的药物缓释促进了SC在SIS上持续而稳定的粘附,为以SC复合SIS构建人工神经提供了有利条件.
