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自发性高血压大鼠神经肽Y-Y1受体在脑血管平滑肌细胞增殖中的作用
目的探讨神经肽Y-Y1受体激动剂[Leu31,Pro34]-NPY对体外培养的自发性高血压大鼠(SHR)脑血管平滑肌细胞促增殖作用的影响.方法应用植块法体外培养SHR大脑动脉血管平滑肌细胞,分别用正常细胞外液、10-5或10-8NPY,10-6硝苯地平,10-6硝苯地平+10-6mol/L NPY加入培养液培养细胞.用免疫荧光法检测平滑肌培养细胞中增殖核抗原(PCNA)的表达,用流式细胞仪对平滑肌细胞的S期细胞进行检测分析.结果随着[Leu31,Pro34]-NPY浓度的增加,平滑肌细胞PCNA阳性率递增,与对照组相比其阳性率有明显差别(P＜0.001).硝苯地平明显抑制PCNA阳性率.与硝苯地平+10-6 mol/L NPY相比,PCNA阳性率有显著差异(5.1±0.5 vs 17.7±2.5,P=0.009).随着NPY浓度增加,血管平滑肌细胞S期百分数也是增加的,10-5、10-6mol/L NPY组与对照组相比有差别(P＜0.05).硝苯地平组与硝苯地平+10-6mol/L NPY比较,S期细胞百分数有显著差异(P=0.0023).结论NPY-Y1受体激动剂对血管平滑肌细胞具有浓度依赖性的PCNA表达增强作用,能够提高血管平滑肌细胞S期比例.L型钙离子拮抗剂能够减弱NPY-Y1受体激动剂的促平滑肌细胞增殖作用.
关键词： 神经肽Y 神经肽Y-Y1受体激动剂 平滑肌细胞培养 细胞增殖 L型钙离子拮抗剂 -
小肠粘膜下膀胱尿路上皮和平滑肌细胞联合培养：组织工程学技术的 应用
小肠粘膜下层本身含有生长因子，能够在体内促 进膀 胱的再生。用标准酶消化或外植技术建立人膀胱上皮细胞和平滑肌细胞的原代培养，将培养 的细胞以1×105/cm2的密度点状种植于小肠粘膜下层，孵育3、7、14和28 d分别收获标 本。有5种不同的培养方法：将膀胱上皮细胞单独种植于小肠粘膜下层的粘膜表面、将平滑 肌细胞单独种植于粘膜表面、将平滑肌细胞种植于粘膜表面后1 h再将膀胱上皮种植进行分 层的联合培养、将平滑肌细胞种植于浆膜表面24 h后将膀胱上皮细胞种植于粘膜表面进行三 明治样培养、将膀胱上皮和平滑肌细胞混合后种植于粘膜表面联合培养。在指定时间收获标 本后用福尔马林固定，进行常规组织学分析，包括masson染色。研究特殊的细胞生长机制， 尤其注意细胞形态、细胞增殖和分层、细胞排列、假覆层尿路上皮的存在和基质的穿透。为 区分联合培养中的平滑肌细胞和 尿路上皮细胞，应用α-平滑肌肌动蛋白抗体和细胞角蛋白AE1/AE3进行了免疫组织化学分 析。体外培养结果在小肠粘膜下层尿路上皮细胞和平滑肌细胞三维空间生长。单独尿路上皮 和平滑肌细胞培养，细胞可以生长并分层，但没有或很少基质穿透。与此相比，分层培养、 混合培养和三明治样培养中平滑肌细胞的膜穿透明显增加，分层的和三明治样培养技术导致 有序的细胞排列、有规律的假覆层尿路上皮的形成和多层的平滑肌基质穿透增加。混合细胞 培养技术虽然使平滑肌细胞基质穿透作用明显，但没有使细胞有序排列。免疫组化研究证实 尿路上皮和平滑肌细胞维持表型标记物的表达。因此小肠粘膜下层在体外支持人膀胱尿路上 皮细胞的三维空间生长，采用不同的细胞种植技术进行联合培养，对将来在组织工程学中的 应用非常重要。
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人气管平滑肌细胞培养
支气管平滑肌细胞的收缩、舒张、增殖和凋亡与临床许多疾病的病理生理过程有关,如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等.目前国内研究这些疾病的细胞材料多采用豚鼠和大鼠等动物的支气管平滑肌细胞,这与人气管平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)的生理病理特征有很大的差距.我们在多年的实验过程中建立了一套人ASMCs的培养方法,介绍如下.
