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ELISA一步法HBeAg、HBcAb阳性与HBsAg阴性标本的分析
目前国内检测HBsAg大都采用酶联免疫吸附法(ELISA),该试剂操作方法为双抗体夹心双位点一步法,用这个方法检测HBsAg时,如果标本中HBsAg浓度过高,会因钩状效应(HOOK)出现假阴性而造成HBsAg漏检,这样势必增加医疗风险,存在医疗隐患,严重威胁医疗安全.
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ELISA一步法与二步法及放免法对HBsAg检测结果分析
目前基层实验室检测HBsAg大多都采用ELISA一步法,与二步法和放免法相比,虽然快速简便,但也有弊端,如高滴度HBsAg阳性标本表现假阴性结果[1,2].为了解实验中是否存在着这种现象,做了以下观察.
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线粒体介导金银合金纳米粒子的合成
背景:由于金银双金属纳米粒子较强的催化活性及选择性催化氧化的特性,在生物医学、药物传递、电化学分析等方面存在潜在的广泛应用.目的:以动物细胞中线粒体为模板,制备金银合金纳米粒子.方法:从鱼肝中分离线粒体;在1 mL偏碱性HAuCl4溶液(10 mmol/L)中加入1 mL线粒体母液,摇匀,加入1 mL AgNO3溶液(10 mmol/L),室温条件下在电磁搅拌器上反应20-30 h,观察反应液颜色从无色逐渐变为紫色,即得金银合金纳米粒子,对其进行表征.①细胞毒性实验:将不同质量浓度(0,25,50,75, 100,125,150 mg/L)的金银合金纳米粒子加入到胃癌细胞中,培养48 h后,MTT法检测细胞增殖A值;②安全稳定性实验:将1 mL不同质量浓度(0,25,50,75,100,125,150 mg/L)的金银合金纳米粒子溶液置于玻璃反应瓶中,将0.2 mL超纯水分次加入到纳米粒子溶液中,左右震荡摇匀;当加入超纯水后,使用紫外-可见光谱对溶液进行表征.结果与结论:①金银合金纳米粒子为合金结构,平均粒径20-30 nm,基本为球形分布,粒度较均一,结晶度较好,结构单一,表面存在羟基、羰基等活性基团;②MTT实验表明在150 mg/L质量浓度范围内,金银纳米粒子无明显的细胞毒性;③随着金银合金纳米粒子质量浓度的变化,强度大的特征吸收峰与金银合金纳米颗粒的含量基本呈正相关;④结果表明,金银合金纳米粒子具有良好的细胞相容性及体外稳定性.
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不同分子生物学方法检测手足口病标本的比较
目的：探究不同分子生物学方法检测手足口病标本的效果。方法选取我院收集的120份手足口病标本，分别根据不同分子生物学方法，将其分为实时RT－PCRZ组、一步法RT－PCRZ组、巢式PCR组进行检测，比较分析三种方法检测肠道病毒71型（ EV71）敏感性。结果实时RT－PCR法与巢式PCR手足口病检测率明显高于与一步法RT－PCR法（ P＜0.05）。结论在手足口病检测方面，实时RT－PCR法与巢式PCR法具有较高的检测准确性，值得在临床检测中推广。
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DCS细胞中SRS19-6白血病病毒3’-cDNA序列的克隆
利用本室建立的树突状细胞肉瘤(dendritic cell sarcoma,DCS)细胞系免疫Lou/c大鼠，制 备了细胞膜蛋白单克隆抗体983D4，该抗体具有小鼠肿瘤细胞的特异性，能抑制体外细胞生 长 速度，降低克隆形成能力[1]。为了得到其cDNA序列，本工作构建了DCS细胞cDNA表 达文库并用983D4单抗进行了免疫学筛选。1 材料与方法1.1 细胞总RNA的提取及cDNA合成 用异硫氰酸胍-酚-氯仿抽提一步法 [2]提取DCS细胞总RNA，oligo-dT纤维素层析柱(Gibco-BRL)分离mRNA后，按照Gibc o-BRL公司逆转录试剂操作说明，分别用MMLV逆转录酶和E.coli DNA聚合酶I作用下合成cD NA第一、二链，Sephacryl S-400离心柱除去小分子cDNA。
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沙眼衣原体感染快速诊断的方法与应用
为探求一种准确性强、灵敏度高、便于操做、适用于广泛应用检测沙眼衣原体的方法,我们以细胞分离法为金标准对一步法ELISA检测沙眼衣原体进行了研究,现将结果报道如下.
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一步法ELISA在HIV初筛中的应用探讨
目的探讨一步法ELISA试剂在HIV抗体初筛实验中是否存在高剂量钩状效应,及其影响程度和对策.方法分别采用一步法和二步法HIV抗体EHSA检测试剂盒对10例确诊抗体阳性样本进行检测以及样本梯度稀释后再复检.结果10例确诊样本二步法结果均阳性,一步法仅7例阳性;假阴性样本经10-1和10-2稀释后,再用一步法检测时结果均为阳性.结论ELISA一步法试剂的检测范围不可忽视.一步法双抗原夹心ELISA检测HIV抗体时的明显前带现象是潜在的漏检导致因素,应用于HIV初筛效果不如二步法.
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淋球菌快速诊断方法的研究
目的探讨一步法快速检测淋球菌感染患者.方法用高压灭菌的细头棉杆沾取分泌物后立即放入无菌管内,放-30℃冰箱冷冻1 h后取出,每管加入稀释液0.5ml在振荡器上振荡2min后,用捕捉法对临床诊断疑为淋病123例患者进行检测.结果阳性检出率一步法为68.3%,常规法为26.0%.结论一步法简便、快速、特异性强、敏感度高、适合临床检测.
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TP-ELISA一步法检测梅毒螺旋体抗体钩状现象研究
目的 通过探讨钩状效应对酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗原夹心一步法检测梅毒特异性抗体结果的影响,评价双抗原夹心ELISA一步法检测梅毒螺旋体特异性抗体的应用价值.方法 采用稀释法,ELISA双抗原夹心二步法和振荡法分别检测怀疑存在钩状效应的血清标本8例;采用ELISA双抗原夹心一步法和二步法分别检测40例健康体检者血清和卫生部临床检验中心提供的梅毒抗体临床科研血清盘一套.结果 8例ISA双抗原夹心一步法检测结果为阴性,怀疑存在钩状效应的患者血清标本,采用ELISA双抗原夹心二步法进行检测时,结果均转为阳性;进行1:2,1:10,1:50和1:100倍稀释后,采用ELISA双抗原夹心一步法进行检测,分别有7例,8例,8例和5例结果转为阳性;将反应板在孵育过程中同时进行振荡,有5例转为弱阳性;ELISA双抗原夹心一步法和二步法分别检测40例健康体检者血清和卫生部临床检验中心提供的梅毒抗体临床科研血清盘,除3例弱阳性结果不符外,其它结果均一致.结论 建立敏感度高的ELISA两步法或采用现有ELISA一步法试剂同时对标本进行原倍和一定倍数稀释后检测,可以既克服钩状效应,又保证检测的敏感度.
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便潜血一步法检测试纸(FOB)的临床应用
隐血实验是临床上诊断消化道出血的一个重要项目,也是普查筛选消化道肿瘤的有效手段.我们自主研制的"便潜血一步法检测试纸"是采用抗人血红蛋白抗体,利用双抗体免疫夹心反应原理,特异性地结合人血红蛋白抗原,不结合其他物种的血红蛋白(如动物血红蛋白).粪便中若含有阈值0.1μg/ml的人血红蛋白,试验结果即呈阳性.本法检测便潜血不受维生素C、含过氧化物酶的绿叶蔬菜及铁剂等干扰,在5 min内即可得到明确的结果,是一种特异,快速、灵敏、简便的免疫层析检测法.
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方丝弓一步和两步关闭曲法的比较分析
目的 对标准方丝弓矫治器关闭间隙的二种方法,即一步和两步关闭曲法的优缺点进行评价.方法 采用前瞻性配对设计,对20例拔除4个第一前磨牙的轻、中度前突的安氏Ⅱ类1分类错(牙合)应用杭州爱丽斯方丝弓矫治器的病例,分两组分别采用一步关闭曲法和两步关闭曲法关闭拔牙间隙,对两组关闭间隙前后的X线头颅片分别进行测量分析比较.结果 两步法在节省支抗上略优于一步法,但差异无统计学意义.一步法在时间上要明显短于两步法,在维持前牙覆(牙合)及前牙转距方面无显著差别.结论 一步关闭曲法在标准方丝弓临床应用中可能会更易被接受.
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直接一步法测定低密度脂蛋白胆固醇
目的对直接一步法测定血清中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)进行方法学评价,并探讨friedewald公式计算法的可行性.方法通过重复性试验、回收实验、线性实验对该方法进行评价;并同时与friedewald公式计算法进行比较.结果该方法线性范围为:0.7～9.1 mmol/L,精密度:批内CV 2.76%,批间CV为3.56%;平均回收率是99.2%,参考范围为(2.45±0.55) mmol/L,与friedewald公式计算法相比,在TG<4.52 mmol/L时,二者有良好的相关性,与文献相符;心脑血管病组与正常对照组相比,二者差异有显著性(P<0.01).结论一步法准确性及重复性均符合要求,方便快速,在TG<4.52 mmol/L时,用计算法经济更方便;而TG≥4.52 mmol/L时,用测定法才能得到准确的结果.
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ELISA一步法和二步法检测临界值范围HBsAg的性能比较
目的：比较酶联免疫吸附试验（ELISA）一步法和二步法检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的性能。方法将二步法初检吸光度（A）值＞0．0735的标本均用一步法检测，并将初检临界值范围内的标本再用二步法复测，将所有复检范围内的标本用电化学发光法检测。结果 HBsAg检测结果A值＞0．5250的标本两法符合率为96．8％，A值在0．0735～0．5250之间的标本两法符合率为65．1％，两法的检测性能差异有统计学意义（P＜0．05）。结论二步法测定HBsAg与一步法比较，敏感性高。一步法存在漏检，二步法在检测低水平和过高浓度的HBsAg标本中具有显著优势。
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双导丝一步穿刺法及经皮肝穿刺门静脉造影在 TIPS 中的应用
目的：探讨双导丝一步穿刺法及经皮肝穿刺门静脉造影在 TIPS 中的操作方法及应用价值。方法采用双导丝一步穿刺法及经皮肝穿刺门静脉造影法，对21例肝硬化并食管胃底静脉曲张破裂出血患者行 TIPS 术。结果21例患者均成功实施 TIPS 手术，手术时间（152．41±50．38）min，手术穿刺针数（2．50±1．54）针，结果显示改良 TIPS 术可显著降低门静脉压力，改善肝功能，手术成功率100％，病死率5％。结论采用双导丝一步穿刺法及经皮肝穿刺门静脉造影的方法行 TIPS 术，能降低手术难度，值得临床推广应用。
关键词： 门体分流术 门静脉造影术 高血压 一步法 Sedilgner 穿刺技术 -
一步法内镜标定活检的实验研究
内镜已广泛用于各种消化系统疾病的诊断,包括各种急慢性炎症、良恶性肿瘤、息肉、先天畸形等.内镜检查是现代医学诊断的重要工具.然而内镜检查离不开病理诊断以明确病变性质,尤其是在癌前病变监测随访及肿瘤定标指导手术[1].如何准确地辨认目标进行复查、手术是目前的难题[2,3].目前有用注射针作为体腔黏膜定标,再用常规活检钳作黏膜活检,以解决这一问题,不但难度大,准确性也有质疑,因此需有一种同时定标活检仪器的帮助.本研究介绍一种可同时定标和活检的定标活检仪.
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免疫放射包被珠一步法测定HBsAg
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)测定是诊断乙型肝炎的重要指标,同时也是献血员筛选、婚前检查、食品及其他服务行业检查的主要指标.免疫放射包被珠定量法(IRMA)因其准确、灵敏(灵敏度达0.3～0.7ng/ml)[1]、试剂价格低廉等特点而成为目前实验室普遍选用的方法之一.我们在原法的基础上设计出一步法测定HBsAg的操作方法,结果满意,现介绍于下.
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硝酸盐还原酶一步法测定血清中硝酸盐浓度
为建立简便快速的一氧化氮(NO)间接测定方法,根据硝酸盐还原酶还原硝酸盐(NO3-)至亚硝酸盐(NO2-)的过程中,所消耗的还原型辅酶Ⅱ(NADPH)的量与NO-3浓度呈正比的原理,用340nm处NADPH吸光度的下降值,推算出NO-3的量.所建体系的反应时间为90min,NADPH浓度为6mmol/L,硝酸盐还原酶浓度为500U/L.NaNO3在0 u-mol/L～200umol/L范围内,与NADPH吸光度的变化量具有良好的线性关系,r=0.993.批内变异系数(CV)=4.4%,批间CV=10.5%;回收率为92.36%.20例25～55岁的正常人血清中NO-3浓度为52.42±19.76umol/L.用此法测定血清中NO3-浓度简便快速、特异性高、干扰因素少,不需昂贵仪器,适合实验室常规测量及临床推广使用.
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健身六步走
第一步法:大步走.普通步走1小时,与用大步走20分钟的效果无法相比.因为在大步走时,全身肌肉参与的运动量非常大,另外,在肌肉用力的情况下,血液循环的量也得以加大.建议:男士在大步走100米时,用不超过100步走完;女士大步走100米时,好不超过110步.
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一种新型快速定量检测HBV DNA试剂的评价
目的 对一种新型快速定量检测HBV DNA试剂进行性能评价.方法 以达安公司HBV DNA定量检测试剂(浓缩碱裂解法)为参比试剂,湖南圣湘公司HBV DNA定量检测试剂(一步法)为实验试剂,比较两法对117例临床标本和2012年江苏省室间质评样本检测结果的相关性和准确性.评价一步法PCR试剂的敏感性、特异性、线性关系和重复性.结果 两种试剂检测25例HBV DNA阴性标本,结果均为阴性,92例HBV DNA阳性样本中87例两法均为阳性.经以10为底数的对数转换后,一步法检测结果为4.82±1.80,浓缩碱裂解法为4.78±1.89,结果无统计学差异(t=-0.74,P＞0.05),且两法相关性良好(r =0.971,P＜0.05).两法特异性均为100％ (25/25)；一步法敏感性为98.9％ (91/92),浓缩碱裂解法为95.7％ (88/92)；两法检测室间质评样本均在合格范围内.一步法检测试剂的r为0.999；两份HBV DNA阳性样本重复检测10次的变异系数(CV)分别为0.89％和0.15％.结论 一步法试剂的检测结果准确可靠,与浓缩碱裂解法试剂相比,操作简便快速.
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ELISA一步法HBeAg阳性HBsAg阴性标本的分析
乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)阳性的样品,其乙肝病毒表面抗原(HBsAg)大多数阳性,但也有少数样品因HBsAg浓度过高致钩状（hook)效应出现HBsAg假阴性,造成HBsAg漏检.
