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糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1融合蛋白的制备及抗肿瘤作用研究
目的制备糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1融合蛋白(mB7.1-GPI),研究该蛋白制备的肿瘤疫苗的抗肿瘤作用. 方法用已构建的重组糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1的表达载体pcDNA3.1(+)/mB7.1-GPI,转染到CHO细胞中,表达和纯化mB7.1-GPI.采用流式细胞术和免疫荧光激光共聚焦显微镜观察其对细胞膜的锚定作用.建立C57BL/6小鼠的淋巴瘤模型,观察用mB7.1-GPI融合蛋白制备的肿瘤疫苗对荷瘤小鼠的免疫治疗作用. 结果 mB7.1-GPI融合蛋白能够锚定在肿瘤细胞膜上,能有效刺激小鼠脾细胞增殖和分泌IL-2与IFN-γ.融合蛋白制备的肿瘤疫苗能够显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,并延长其生存期. 结论糖基磷脂酰肌醇锚定型小鼠B7.1制备的肿瘤疫苗具有较强的抗肿瘤作用,有可能作为一种有效的新型疫苗用于肿瘤的治疗和预防.
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阵发性睡眠性血红蛋白尿症靶向治疗策略
阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)为一种获得性造血干细胞(HSC)磷脂酰肌醇聚糖-A类(PIG-A)基因突变所致的难治性溶血性疾病。临床上,PNH多以对症治疗为主,但其不能根治,且需长期维持治疗。随着PNH发病机制研究的不断深入,诸如HSC移植、基因治疗、糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚链蛋白输注等靶向治疗日益受到重视,新近特异性抗补体单克隆抗体的出现为PNH患者的靶向治疗带来希望[1-2]。我们旨在对PNH靶向治疗策略作一综述。
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Caveolin-1与中枢神经系统疾病
Caveolae是细胞膜上特定的50~100 nm的微区域,呈烧瓶状,主要由caveolin、胆固醇、鞘磷脂、鞘糖脂、酰基鞘氨醇和糖基磷脂酰肌醇( glycosyl phosphatidyl inositol , GPI)锚着蛋白组成,可单独或成串出现,形成一个不被去垢剂溶解的区域。 Palada于1953年首先在电镜下发现了caveolae结构,并将之命名为质膜小泡( plasmalemmal vesicle )。2年后, Yamada 报道了相似的结果,并将之命名为小窝蛋白(caveolae)[1]。 caveolae的主要作用是介导细胞的内化和胞吞转化。
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脂筏的提取及鉴定
脂筏是脂质双层内含有特殊脂质的蛋白质的微区,具有低流动性,呈现有序液相,富含胆固醇和鞘磷脂[1].与糖基磷脂酰肌醇(GPI)相连,或被肉豆蔻酸酰化,是脂筏分子主要的2种蛋白修饰形式.膜上许多结构可通过被GPI锚固的形式作为细菌、病毒以及毒素的受体.
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人类朊毒体病的研究进展
朊毒体病即传染性海绵状脑病(transmissible spongiform encephalopathies,TSEs)是由朊毒体(Prion)引起的人和动物共患的一类致死性中枢神经系统病变性脑病[1].人类朊毒体病导致了进行性认知功能的损害和运动的共济失调,并且以脑组织海绵样的退变伴有星形胶质细胞和小胶质细胞的增生.这些改变伴有一种宿主起源的具有蛋白水解酶抗性的蛋白质即异常朊毒体蛋白(PrPSc)的聚集.细胞型的朊毒体蛋白(PrPc)是一种蛋白酶敏感的糖蛋白,通过一个糖基磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidylinositol,GPI)锚定在细胞膜上[2].大量证据证明,异常朊毒体蛋白(PrPSc)正是作为一种内源性的传染因子导致了朊毒体病的发生.
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多色流式细胞术测定CD55及CD59表型在阵发性睡眠性血红蛋白尿诊断中的应用
阵发性睡眠性血红蛋白尿(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, PNH)是一种获得性红细胞异常性溶血性疾病,以睡眠时出现阵发性血红蛋白尿为主要特征.发作期尿潜血阳性,并有其他血管内溶血表现.尿含铁血黄素试验持续阳性,蔗糖溶血试验阳性,酸溶血Ham's试验阳性等.随着科学研究的进展,现在PNH已被确认是造血干细胞基因突变的克隆性疾病,其异常血细胞膜上糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol, GPI)生成障碍,导致PNH患者血细胞膜上GPI连接蛋白如分化群(cluster of differentiation, CD)55、CD59等的表达明显减低和缺乏,因而对正常血清中的补体特别敏感而发生溶血.因此,利用免疫荧光染色标记针对CD55、CD59的单克隆抗体,采用流式细胞术检测PNH患者血细胞CD55、CD59表达的数量,对PNH的诊断有重要意义.现将结果报告如下.
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葡萄糖诱导的体外培养人脐静脉内皮细胞膜中葡糖基磷脂酰肌醇锚式补体活化膜调节物(CD59,CD55)的下调
研究表明糖尿病血管病变发生的主要原因是内皮细胞功能异常,高血糖又是加速内皮功能紊乱的重要原因之一.糖尿病患者中还可发现补体系统活性增加,导致糖尿病患者肾脏血管壁、肾小球及系膜区补体分子沉积;血浆中可溶性非细胞裂解的C5b-9的浓度及代表内皮功能紊乱的von Willebrand因子浓度增加.补体介导的自体细胞损伤有以下几种调节因子:衰败加速因子(DAF、CD55)、膜共因子蛋白(MCP、CD46)、C3b受体、唾液酸和膜溶解反应抑制物(MIRL、CD59)等. 本研究中,我们报道体外用高浓度D-葡萄糖培养的人脐静脉内皮细胞下调表达与GPI锚接的 CD55和CD59,而对跨膜分子CD46表达没有影响,同时我们也显示与D-葡萄糖一起培养的内皮细胞在加入从糖尿病患者血浆中纯化的抗内皮细胞抗体(AECA)和新鲜人补体后易于产生 C5b-9沉积.
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高磷酸酯酶伴智力低下综合征的研究进展
高磷酸酯酶伴智力低下综合征(Hyperphosphatasia with mental retardation syndrome,HPMRS),又称马布里综合征(Mabry syndrome),是一种常染色体隐性遗传疾病,早在1970由马布里和其同事描述[1],由糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphatidylinositol,GPI)锚合成编码区突变引起.该综合症临床表现变异广泛,主要以发育延迟、癫痫发作和高磷酸酯酶三个核心症状组成[2].HPMRS是遗传性糖基磷脂酰肌醇缺乏(inherited GPI deficiencies,IGDs)的一个亚型[3],GPI是一种人类细胞表面复杂的糖脂,可在细胞膜上锚定150多种蛋白质,至少有27个基因参与糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白(GPI-anchored proteins,GPI-APs)的生物合成和运输,已被描述引起突变的基因有13种[4-5],这些蛋白能够将其功能链接到信号转导系统.长期以来人们对于此种疾病的认识不甚清楚,常易漏诊、误诊,难以提出可靠的治疗方案,导致本病临床预后较差.国外学者近年来对HPMRS的研究进展较快,本文从遗传学、发病机制、临床表现及治疗干预等方面对其进行综述.
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急性髓系白血病患者外周血粒细胞、单核细胞膜GPI锚链和红细胞表面CD59表达水平的研究
目的 通过流式细胞术研究急性髓系白血病(AML)患者粒细胞、单核细胞糖基磷脂酰肌醇(glycosyl-phosphatidyl inositol,GPI)锚链和红细胞CD59表达水平及其临床意义.方法 该研究纳入了36例并发血管内溶血的AML患者及21例阵发性睡眠性血红蛋白尿(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)患者,依据国际临床流式细胞协会推荐的PNH流式诊断指南,分别对受试对象的红细胞和有核细胞进行PNH克隆检测,统计分析AML患者粒细胞、单核细胞及红细胞PNH克隆的水平.结果 AML组患者与PNH组患者相比较无明显红细胞CD59表达缺陷(I型红细胞98.49±4.61 vs 61.41±25.86,Ⅱ型红细胞1.33±4.55 vs 16.82±19.92,Ⅲ型红细胞0.17±0.85 vs 21.71±21.12,差异均有统计学意义(t=6.43,3.41,4.71,均P<0.001);粒细胞、单核细胞缺陷克隆检测存在但与PNH组比较则明显减少(粒细胞26.46±23.36 vs 73.12±28.41,单核细胞35.80±27.80 vs 78.37±25.03,差异有统计学意义(t=4.59,3.76,均P<0.001).结论 AML患者有核细胞中可出现FLAER阴性的PNH克隆,但未见CD59表达缺陷的红细胞,可与PNH区分.
关键词: 急性髓系白血病 糖基磷脂酰肌醇 CD59检测 嗜水气胞菌溶素变异体检测 -
胶质细胞源性神经营养因子与脊髓再生
前言胶质细胞源性神经营养因子(glial cell tine-derived neurotrophic factor,GDNF)是在1993年由大鼠胶质瘤细胞系B49中分离的糖基化的二硫键结合的同二聚体蛋白质,含有134个氨基酸,分子量为33~35kD.因其具有7个保守的半光氨酸残基,并且它们在分子出现的位置与转化生长因子-β(transforming growth bctor-β,TGF-β)超家族的全体成员均相同,所以GDNF被认为是TCF-β超家族的一员.人和大鼠的GDNF基因业已被克隆,二者的氨基酸序列有93%的同源性[1].GDNF的受体是多成分的复合物,它是由固定于质膜外层的糖基磷脂酰肌醇(GPI)被称为GDNFRα和酪氨酸激酶RET蛋白组成.