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羧基荧光素乙酰乙酸在移植免疫研究中的应用
目的:介绍和探讨活体荧光示踪染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)在移植免疫研究中的应用及价值.方法:以不同浓度的CFDA-SE标记小鼠脾细胞用于体内外实验.标记Balb/c(H2d)和C57BL/6小鼠(H2b)脾细胞行混合淋巴细胞培养,流式细胞术观察标记细胞的增殖情况.Balb/c裸小鼠(H2d)构建移植物抗宿主(GVHR)、宿主抗移植物(HVGR)模型;通过流式细胞术检测标记细胞在外周血及脾的增殖情况. 结果:荧光显微镜观察到标记细胞.流式细胞术检测到标记细胞荧光强度出现倍减现象,表明细胞发生了增殖;无抗原刺激组荧光强度无明显变化,抗原刺激后24~72 h标记细胞停留在脾,第3天后增殖细胞进入外周血液. 结论:羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记技术可应用于体内、体外实验,有助于对细胞增殖及定位进行检测,在移植免疫实验研究中具有很高的应用价值.
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两种小鼠异位心脏移植模型的复制及比较
目的:研究两种小鼠心脏移植模型的优缺点,为不同实验中选择术式提供依据. 方法:应用放大16倍的显微镜和显微外科手术器械,单人操作完成同品系或者同种异体小鼠腹部和颈部异位心脏移植两种术式,比较手术成功率、手术时间以及移植心脏存活时间. 结果:腹部和颈部异位心脏移植手术成功率分别为85%和60%,前者失败原因主要为出血,后者主要为吻合口狭窄.两种术式同种异体移植心脏存活时间无明显差异[(7.6±0.9)天vs(7.5±1.0)天, P>0.05],二者均明显短于同系移植心脏存活时间(平均>100天);两种术式手术时间存在明显差异,颈部异位心脏移植术的受者准备、动脉和静脉吻合以及总手术时间上均比腹部异位心脏移植短.结论:应根据实验需要选择,如注重手术成功率时,应选择腹部异位心脏移植;注重缩短手术时间时则应选用颈部异位心脏移植.
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中药有效成分Nordosin 增强FK506体外抑制淋巴细胞IL-2分泌作用的研究
目的:观察中药有效成分Nordosin 对FK506体外抑制致炎细胞因子作用的影响,探讨Nordosin在移植免疫领域存在的潜在应用价值.方法:建立ConA激活小鼠脾淋巴细胞增殖模型,采用ELISA和RT-PCR方法,测定Nordosin 与 FK506联合应用对淋巴细胞的IL-2蛋白和mRNA表达的影响;同时,运用流式细胞检测T淋巴细胞CD25+表达的变化.结果:Nordosin 与 FK506 联合用药可以抑制小鼠脾淋巴细胞的IL-2分泌(P<0.01),IL-2 mRNA表达以及T淋巴细胞CD25+表达也显著降低(P<0.01),其作用强于单独使用FK506组(P<0.01).结论:Nordosin可以增强FK506抑制体外淋巴细胞IL-2分泌及其受体表达的作用,Nordosin可望成为一种免疫抑制辅助用药.
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Real Time-PCR法检测BAFF分子在肾移植受者外周血单个核细胞中的表达
目的 探讨BAFF分子在肾移植受者外周血单个核细胞的表达情况,并初步探讨该分子与肾移植免疫的关系.方法 采用适时定量聚合酶链反应(Real Time-PCR)分别检测肾移植术后1年以内、术后1~3年、术后3年以上患者外周血淋巴细胞B淋巴细胞活化因子(BAFF)分子的表达水平,同时取健康志愿者作对照.结果 术后1~3年、术后3年组的BAFF分子的表达均高于健康对照组(P<0.01),术后1年以内组和健康对照组无明显差异(P>0.05).结论 BAFF分子的表达水平有随着移植时间增加而增加的趋势,并有可能参与了肾移植术后的免疫反应.
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中药在移植免疫机制及应用方面的研究进展
近年来,器官移植技术的发展引起了广泛关注,而目前大的难题在于术后面临免疫排斥反应的考验.在临床上,环孢素A、硫唑嘌呤及糖皮质激素等药物的联合使用是目前抗免疫排斥的主要手段.然而这些一线抗排斥药物存在着诸多弊端,譬如不良反应大、价格昂贵、可能诱发感染及肿瘤等.随着在药物研究方面的进展,越来越多的新药物出现在了抗免疫排斥反应的领域,其中中药,特别是中药提取物因低毒有效特点而受到关注.
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同种异基因组织工程骨修复骨缺损IFN -γ和IL -10的表达
[目的]通过检测同种异基因组织工程骨(tissue engineering bone,TEB)修复骨缺损血清IFN -γ、IL - 10水平和脾内IFN-γmRNA、IL-10mRNA的表达,探讨同种异基因TEB的免疫原性.[方法]Ficoll - Hypaque梯度密度离心法分离出成年兔骨髓间充质干细胞(MSCs),培养扩增.取第3代细胞,化学法诱导成成骨细胞(ODC).将ODC按1×109/L密度接种至羟基磷灰石/磷酸三钙(HA/TCP),共同培养,构建TEB.动物随机分三组(TEB,HA/TCP组,自体骨组),每组24只,人为造成兔左桡骨处1.0 cm左右长创伤性骨缺损,植入TEB、HA/TCP、自体骨.观察伤口愈合情况;于术后第4、10 d、6周,麻醉下取下腔静脉血ELISA法测血清IFN -γ、IL - 10水平;取脾行HE染色观察;RT- PCR测IFN -γ、IL - 10 mRNA表达.[结果]各组动物IL - 10、IL - 10 mRNA比IFN -γ和IFN-γ mRNA高,其中TEB组IFN -γ和IFN -γ mRNA较其他两组稍高,IL - 10和IL - 10 mRNA较其他两组稍低,IFN -γ、IL - 10水平和IFN - γmRNA、IL - 10 mRNA表达同组前后比较有统计学差异(P<0.05),组间比较没有差异(P>0.05).[结论]由同种异基因MSCs诱导而成的ODC与HA/TCP构建的TEB免疫原性极低,可以用于修复骨缺损.
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儿童移植免疫的一些问题
随着医学技术的进步,目前移植种类逐渐扩大,成功比率增高,存活时间延长,但移植还存在许多问题,往往这些问题均与移植免疫相关,为此本文结合儿童期的免疫特点,着重介绍了移植免疫反应的种类,包括皮肤、脏器和造血干细胞移植的免疫反应特点;引起移植免疫反应的主要因素;以及宿主抗移植物反应和移植物抗宿主病的类型和特点.
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硼替佐米在器官移植中的应用进展
近年来,越来越多的研究结果显示,体液免疫在移植免疫及实体器官移植后的急性排斥反应和慢性排斥反应中发挥重要作用.然而,现有的针对体液免疫的各种治疗措施(如血浆置换、静脉注射用人免疫球蛋白、多克隆及单克隆抗淋巴细胞抗体,包括利妥昔单抗等)由于对成熟浆细胞缺乏作用而具有局限性[1].硼替佐米作为首个被美国国家食品药品管理局(FDA)批准用于临床的蛋白酶体抑制剂,不仅在其已批准的适应证如多发性骨髓瘤的治疗方面取得了较好疗效,而且在移植免疫中也具有多效的调节效应.本文就硼替佐米在器官移植中的应用进展作如下综述.
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预测肾移植后患者发生排斥反应的一种新标志物sCD30
创立一种在患者肾移植前预测排斥反应和移植后早期识别排斥反应发生的体外试验方法,是移植免疫学者的长期目标.近年来,国际多移植中心的移植免疫学者研究发现了一种新的与移植物存活相关的风险预测标志物--人可溶性CD30(sCD30)[1-3].本文就肾移植患者移植前后sCD30的表达水平与移植肾存活的相关性及风险预测作一简要综述.
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凝血酶与移植物内皮细胞损伤
随着移植免疫基础理论的研究和进展、实验手段及移植配型等方法日臻完善、以及免疫抑制剂的成功应用,有效降低了抗宿主排斥反应,器官移植后的存活率等方面取得卓著成绩.人们转而逐渐认识到移植后的血栓并发症,以及由凝血酶(thrombin/Ⅱα)等凝血相关因子、细胞因子、粘附分子、趋化因子等相互作用,介导移植物内皮细胞损伤、血管平滑肌增生、纤维素沉积等一系列病理变化,已成为导致移植失败的重要原因.本文将着重对同种异体移植后急性排斥反应中凝血酶参与介导的内皮细胞损伤机制作一综述.
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在体移植免疫实验研究应注意的几个问题
近年来我国的移植工作者在努力做好临床工作的同时,越来越重视基础研究工作,并已取得不小的进步,但同时也暴露了一些问题.不少研究者的想法相当不错,但是在实施过程中缺乏必要的基础知识和设计技巧,或实验体系存在明显缺陷,降低了结果的可信度;或无法获得预期结果;或对结果的解释不够客观,终导致事倍功半,论文质量差强人意.笔者以为,在体移植免疫实验研究应从以下几方面予以充分重视.
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2011年两岸三地移植免疫论坛概述(下)
吗替麦考酚酯(MMF)具有肾功能保护作用.体外试验表明,MMF可抑制平滑肌细胞和成纤维细胞的增殖,提示MMF可延缓肾脏慢性纤维化病变的进程.MMF对慢性增生性血管病变的抑制作用,可能是通过其抑制平滑肌细胞增殖、α-肌动蛋白的表达和细胞的转分化、一氧化氮合成酶产生而达到的.
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2011年两岸三地移植免疫论坛概述(上)
2011年10月21-23日,由中华医学会器官移植学分会等8家学术团体及单位联合主办、浙江大学医学院附属第一医院、上海罗氏制药有限公司联合协办的“2011年两岸三地移植免疫论坛”在美丽的杭州西子湖畔隆重召开.会议邀请了中国内地、香港、台湾地区以及美国、德国的海内外器官移植领域知名专家,共同就移植与免疫领域的热点话题进行了充分交流与探讨.
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改良性大鼠同种异体肾移植模型的建立
为了开展肾移植免疫方面的研究,我们建立了一种改良性大鼠同种异体肾移植模型,符合大鼠同种异体肾移植研究的模型要求.一、材料和方法1.实验动物:清洁级健康雄性大鼠120只,Wistar和SD各60只,体质量200~250 g.Wistar系为供体,SD系为受体.
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IκBα突变体对树突状细胞成熟及其信号通路的影响
不成熟树突状细胞(DC)低表达共刺激分子,通过T细胞凋亡、无能及调节性T细胞增多等多种机制诱导免疫耐受[1].如何有效抑制DC成熟从而诱导免疫耐受是移植免疫的重要课题.不成熟DC发育为成熟DC主要由NF-κB信号通路控制[2].我们利用IκBα突变体(IκBαM)阻断NF-κB活化,观察它对DC成熟的影响.
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大鼠原位移植肝脏中细胞凋亡与转化生长因子-β1 mRNA表达的实验研究
本实验旨在探讨大鼠原位肝移植免疫特惠的机制,研究肝脏移植移植中肝实质细胞和浸润细胞凋亡及肝脏移植移植物中转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA的表达变化.
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肾移植患者血清中可溶性B7-H3水平的变化及其临床意义
目的 检测肾移植患者移植前后血清中可溶性B7-H3(sB7-H3)水平变化,并探讨其临床意义.方法 34例肾移植患者于移植前及移植后3、6、12个月采集外周血,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中的sB7-H3,取11例健康志愿者为正常对照.用Luminex检测人白细胞抗原(HLA)和主要组织相容性Ⅰ类相关链A位点(MICA)抗体并分为术前抗体阳性组及阴性组.随访组根据术后1年内基本情况分为肾功能稳定组和不稳定组.结果 肾移植组术前血清sB7-H3水平[(27.10±13.61)μg/L,n=34]高于正常对照组[(11.61±3.77)μg/L,n=11],两组比较差异有统计学意义(P<0.01),且术前抗体阳性组血清sB7-H3水平高于阴性组[(34.96±17.37)μg/L,n=11比(23.34±9.75)μg/L,n=23,P<0.05].肾移植术后肾功能稳定组各时间点血清sB7-H3水平与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),肾功能不稳定组未排斥时血清sB7-H3和肌酐(Cr)水平与正常对照组比较差异亦无统计学意义(P>0.05),而排斥时其血清sB7-H3水平[(20.63±4.28)μg/L,n=12;(18.95±2.98)μg/L,n=6;(28.36±19.83)μg/L,n=10]和Cr均明显升高,与肾功能稳定组及正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 慢性肾炎患者血清sB7-H3水平增高,且术前抗体阳性组增高更明显;肾移植术后血清sB7-H3水平与肾功能变化一致.术后监测sB7-H3动态变化,可间接了解患者机体免疫状态,对肾移植术后的疗效观察和预后判断有参考价值.
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整合素CD103在同种胰岛排斥反应中的作用
CD8+效应细胞(CTL细胞)在同种器官移植宿主抗移植物反应(HVGR)过程中发挥重要作用.被活化的CD8+T淋巴细胞主要通过细胞毒颗粒和Fas/FasL途径(程序化细胞死亡)来直接毁损靶细胞[1].同时,它们也产生多种细胞因子、化学因子和前炎症酶等,可能间接地促进靶细胞的损伤和/或招募其他的效应细胞参与对移植物的杀伤.我们对CD8+效应细胞是如何在外周被激活并移行到移植部位的细胞和分子机制(即输入途径)有了较深入的理解[2-3].然而,对于CD8+效应细胞是如何进入并损伤移植物的下游事件(即输出途径)缺乏足够的认识.大多数移植器官的功能性成分(例如肾脏的肾小管和肾小球、胰腺的胰岛、肝脏的肝细胞和肺脏的腺泡细胞等)都是特化的上皮成分.同种反应性CD8+效应细胞对这些结构的特异攻击是器官同种排斥反应的主要事件,因此分析CD8+效应细胞与上皮细胞的相互作用是我们了解移植免疫并制定治疗策略的一个重要环节.
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雷公藤多甙对异体神经移植后免疫反应及骨骼肌萎缩的影响
目的 探讨雷公藤多甙对异体神经移植后免疫反应和骨骼肌萎缩的影响.方法 用Wistar大鼠坐骨神经桥接SD大鼠10 mm坐骨神经缺损.60只成年雄性SD大鼠(体重200~250 g)随机分为4组(n=15):A、B组为新鲜异体移植,C、D组为供者神经雷公藤多甙预处理后移植.术后第2天予A、C组生理盐水,B、D组分别予雷公藤多甙5 mg/(kg·d)和2.5 mg/(kg·d),时间5周.术后定期观察移植神经和患侧骨骼肌大体及组织学变化,并分析肌纤维直径,透射电镜观察骨骼肌超微结构,免疫组化检测移植神经MHC-Ⅰ、Ⅱ分子表达和CD4+、CD8+T细胞入侵.结果 移植神经炎症细胞浸润和骨骼肌萎缩,B、C、D组均明显轻于A组;骨骼肌湿重和肌纤维直径,A组明显低于B、C、D组(P<0.05),C组低于B、D组(均P<0.05),而B、D组间差异无统计学意义(P>0.05).术后6周,A组肌小节结构消失,肌丝溶解严重和残存"Z"线片段.余组肌原纤维均排列整齐,明带、暗带和肌小节结构清晰.MHC-Ⅰ、Ⅱ表达和CD4+、CD8+T细胞入侵在术后第1周出现高峰;同一时相,B、C、D组显著低于A组(均P<0.01),B、D组低于C组(均P<0.05),而B、D组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 雷公藤多甙能减轻失神经支配骨骼肌萎缩;雷公藤多甙预处理能降低供者神经抗原性,减轻异体神经移植后排斥反应和受者免疫抑制剂用量.
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性激素对慢性移植物肾病影响的研究进展
近年来随着新型免疫抑制剂的不断问世以及对移植免疫的进一步认识,急性排斥反应的发生率明显下降,肾移植物l 年存活率大为提高,但长期存活率提高不甚明显.