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沉默信息调节因子1(SIRT1)在前列腺癌恶性生物学表型中的作用
目的 观察SIRT1在前列腺癌组织和细胞中的表达,探讨SIRT1在前列腺癌发生中的作用.方法 收集辽宁医学院附属第一医院手术切除的8例成对前列腺癌组织和癌旁组织随机分组,体外培养PrEC、LNCap、PC3和DU145细胞,real-time PCR和Western blot法检测SIRT1和P53在前列腺癌组织和细胞中mRNA和蛋白表达.提取细胞系中总蛋白、浆蛋白和核蛋白,Western blot法检测PC3和DU145细胞中SIRT1和P53的蛋白表达和定位.结果 前列腺癌组织中,SIRT1的mRNA和蛋白表达明显高于癌旁组织(P＜0.O1);LNCap、PC3和DU145细胞中SIRT1的mRNA和蛋白表达明显高于PrEC细胞(P ＜0.01);PC3和DU145细胞系SIRT1蛋白表达明显高于胞质(P＜0.01).结论 SIRT1可能通过P53不同方式促进前列腺癌发生,为探讨SIRT1在前列腺癌恶性生物学表型中的作用和机制奠定基础.
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Erk/Akt信号分子介导血清饥饿诱导的前列腺癌DU145细胞增殖
目的 癌症晚期阶段,随着肿瘤体积增大,肿瘤灶内的细胞面临着低氧、营养匮乏的生存环境.近年来研究表明,癌细胞在这种环境条件下仍具有一定的增殖能力.本研究旨在探讨血清饥饿对前列腺癌(prostate cancer,PCa)DU145细胞增殖的影响及其相关信号分子的调控机制.方法 无血清培养基干预DU145细胞,分别用MTT、细胞计数实验观察血清饥饿对细胞活力和细胞增殖的影响;蛋白质印迹法测定干预前后细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,Erk)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine protein kinase,Akt)的蛋白表达及磷酸化水平变化.结果 血清饥饿72h,细胞活力(t=8.233,P=0.001)和细胞增殖能力(t=12.291,P=0.000 3)显著降低.血清饥饿48 h的细胞数目为0.792±0.063,较血清饥饿24 h的0.591±0.070增多,t=3.686,P=0.021.随着血清饥饿时间的延长,细胞增殖受到影响.蛋白质印迹法结果表明,血清饥饿能明显促进Erk (P=0.007)和Akt(P-0.001)磷酸化,却对Erk和Akt总蛋白的表达没有显著影响.Erk通路抑制剂U0126显著抑制了血清饥饿环境下Erk的磷酸化(P＜0.001),同时抑制了细胞的增殖能力,t=8.544,P=0.001;Akt通路抑制剂LY294002显著抑制血清饥饿环境下Akt磷酸化(P=0.003)的同时抑制了细胞的增殖能力,t=10.472,P＜0.001.结论 在血清饥饿条件下,DU145细胞可以通过激活Erk和Akt信号通路来保持一定的增殖能力,这可能是其在血清饥饿环境下做出的适应性反应.
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SATB1在人不同前列腺癌细胞系中表达的实验研究
目的:探讨SATB1与前列腺癌增殖及侵袭发生的关系.方法:体外培养前列腺癌细胞系(LNCaP、PC3、DU145),MMT法检测其增殖能力;Tanswell细胞侵袭实验检测其侵袭能力;RT-PCR检测其SATB1 mRNA的表达情况;Western blot检测其SATB1蛋白质的表达.结果:前列腺癌细胞PC3和DU145的增值能力及侵袭能力比LNCaP强(P＜0.01),PC3和DU145细胞中SATB1 mRNA及蛋白质表达水平均显著高于LNCaP细胞(P＜0.01).结论:SATB1在前列腺癌表达水平可能与前列腺癌的增殖和侵袭正相关.
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沉默信息调节因子1小干扰RNA抑制前列腺癌细胞DU145的迁移
目的 观察沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)小干扰RNA(siRNA)对前列腺癌DU145细胞迁移和基质金属蛋白酶中MMP2和MMP9表达变化的影响.方法 体外培养DU145细胞,实验分Scramble siRNA组和SIRT1siRNA组;利用脂质体介导转染技术转染前列腺癌DU145细胞,Western blot方法检测DU145细胞中SIRT1的干涉效能;划痕实验、平板克隆实验和Transwell迁移实验研究SIRT1对其体外迁移运动能力的影响;Western blot方法检测DU145细胞中MMP2和MMP9的蛋白表达.结果 与Scramble siRNA组比较,SIRT1 siRNA组SIRT1的蛋白表达水平降低,明显抑制DU 145细胞的迁移,降低MMP2和MMP9蛋白.结论 下调SIRT1的表达可以抑制前列腺癌细胞DU145的迁移,其机制可能与改变基质金属蛋白酶中MMP2和MMP9的表达相关.
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野生型p53基因脂质体转染细胞疫苗的制备
目的:制备具有治疗活性的野生型p53基因真核表达载体的细胞疫苗.方法:利用RT-PCR从人外周血淋巴细胞总mRNA中扩增出全长的野生型p53基因,将其克隆入TA克隆载体,经扩增后,将p53cDNA连入pCMV真核表达载体中.利用lipofectamine将其转染DU145细胞并通过免疫组化的方法检测其表达情况.结果:p53基因可在DU145细胞中稳定表达.结论:制备了可稳定表达于DU145细胞中的野生型p53基因细胞疫苗.
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SIRT1抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞凋亡的影响及可能机制
目的 观察SIRT1抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞系细胞凋亡和细胞凋亡关键调控因子(Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3)表达变化的影响,探讨SIRT1在前列腺癌发生的可能机制.方法 体外培养DU145细胞,实验分对照组(DMSO组)和sirtinol组(终浓度为10,25和50μmol/L),Western印迹检测DU145细胞SIRT1蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测DU145细胞中细胞凋亡关键调控因子Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3的蛋白表达.结果 与对照组相比,随着sirtinol浓度的增加,SIRT1蛋白表达水平逐渐降低,细胞凋亡比例增加,诱导细胞发生凋亡.不同浓度sirtinol作用DU145细胞后Bcl-2蛋白表达减少,且随剂量增加表达越低;Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比率降低;伴随Cytochrome C的释放和Caspase-3的激活.结论 下调SIRT1表达诱导前列腺癌细胞DU145细胞凋亡,其机制可能与改变细胞凋亡关键调控因子Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3的蛋白表达相关.
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靶向抑制Fbxw8对前列腺癌细胞增殖能力的影响
目的 探讨Fbxw8对人前列腺癌DU145细胞增殖及对增殖相关基因cyclinA、cyclinB、CDK1、p21和p27表达的影响.方法 RT-PCR和Western blot法验证Fbxw8 siRNAs的干扰效率；利用CCK-8检测法检测细胞的增殖能力；流式细胞仪检测细胞周期分布情况；Western blot法检测细胞增殖相关蛋白CDK1、CDK2、cyclinA、cyclinB、P21、P27的表达.结果 Fbxw8 siRNAs显著下调DU145细胞中Fbxw8mRNA及蛋白水平的表达(P＜0.01)；Fbxw8 siRNAs显著抑制DU145细胞增殖活力,其中72 h抑制明显(P＜0.05)；流式细胞术分析显示,Fbxw8 siRNAs可阻滞细胞于G2/M期,G2/M期细胞百分数由15.32％ (control siRNA)增加到29.03％(Fbxw8 siRNA 1)和28.39％(Fbxw8 siRNA 2)；Western blot结果显示,Fbxw8 siRNAs可促进周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21、p27的表达,同时下调G2/M期调控蛋白CDK1、CDK2、cyclin A及cyclin B1的表达.结论 靶向抑制DU145细胞中Fbxw8的表达可显著抑制细胞的增殖,使阻滞细胞于G2/M期,并且可能是通过下调CDK1、CDK2、cyclin A及cyclin B1的表达,上调P21、P27的表达实现的.
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Snail1基因启动子区组蛋白修饰在前列腺癌细胞EMT发生中的作用
目的 探讨Snail1基因启动子区的组蛋白修饰与前列腺癌DU145细胞发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)现象的关系.方法 RT-PCR、Western blot及IF法验证TGF-β1诱导前列腺癌细胞发生EMT过程中相关标记物的变化;利用ChIP试验来筛查Snail1启动子区组蛋白修饰及RNA聚合酶Ⅱ的富集区域.结果 诱导前列腺癌发生EMT过程中,仅有DU145细胞EMT相关标记物的变化明显(P＜0.05);DU145细胞中Snail1经TGF-β1诱导后出现明显上调的现象;Snail1基因启动子区域的P4位点存在HβK4ME3及RNA聚合酶Ⅱ的富集.结论 TGF-β1通过促使Snail1基因启动子区P4位点的H3K4ME3富集导致Snail1表达上调,促进了前列腺癌DU145细胞EMT现象的发生.
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miR-17-92基因簇增强前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂的耐药性
背景与目的:miR-17-92基因簇与多种疾病的发生密切相关,其在肺癌、肝癌、胃癌和前列腺癌等多种肿瘤细胞中均高表达.本研究利用慢病毒包装系统建立稳定高表达miR-17-92基因簇的DU145细胞株,探讨miR-17-92基因簇对前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的影响.方法:构建高表达miR-17-92基因簇的表达载体,转染DU145细胞株,同时转染空载体作为对照,并用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)进行鉴定.用xCELLigence系统监测细胞的迁移、侵袭能力及顺铂处理后的生长情况;通过划痕实验观察细胞的迁移情况;采用蛋白[质]印迹法(Western blot)、凝胶酶谱实验和RTFQ-PCR检测相关蛋白质和基因的表达以探讨miR-17-92增强DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的相关机制.结果:DU145-miR-17-92细胞迁移速率和侵袭能力高于DU145-control细胞(P<0.01).DU145-miR-17-92细胞中整合素β1的蛋白质表达水平和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)的活性显著高于DU145-control细胞.顺铂处理后,DU145-miR-17-92细胞的生长速度自12 h起快于DU145-control细胞并呈顺铂耐药性(P<0.01).细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)在DU145-miR-17-92细胞中呈现持续高水平磷酸化,顺铂处理后,其磷酸化水平无明显变化.DU145-miR-17-92细胞中切除修复互补交叉基因1(excision repair cross complementing1,ERCC1)的mRNA和蛋白质表达水平显著高于DU145-control细胞.结论:高表达miR-17-92增强了DU145细胞的迁移、侵袭能力,其机制与整合素β1的表达上调及MMP-9活性增强有关.此外,高表达miR-17-92增强了DU145细胞对顺铂的耐药性,该过程与ERK1/2的磷酸化水平增加和ERCC1的表达水平上调相关.
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癌症疼痛诊疗上海专家共识 (2017年版)
为进一步规范我国癌症疼痛诊疗行为,完善重大疾病规范化诊疗体系,提高医疗机构癌症疼痛诊疗水平,改善癌症患者生活质量,保障医疗质量和医疗安全,2011年卫生部制定并发布了《癌症疼痛诊疗规范(2011年版)》[1],以下简称规范.
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shRNA沉默RAGE基因表达对前列腺癌细胞增殖的抑制作用
目的:构建针对人晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products , RAGE)基因的特异性短发夹RNA(small hairpin RNA, shRNA)表达载体,探讨其对前列腺癌细胞DU145增殖的抑制作用.方法:设计并合成4种针对RAGE基因的特异性短链寡核苷酸,构建含shRNA RAGE的表达载体,转染高表达RAGE的亚克隆细胞株sub DU145-2C1.荧光显微镜下观察细胞转染后的情况,实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative -PCR, RFQ-PCR)检测转染shRNA后对RAGE mRNA表达的影响,Western印迹法检测对RAGE蛋白表达的影响,CCK-8法检测对细胞增殖的影响,划痕实验观察对细胞迁移能力的影响.结果:构建获得的shRNA RAGE表达载体能够有效抑制RAGE基因的表达(P<0.05),其中以shRNA RAGE -1(R1)的抑制作用强,其对RAGE mRNA表达的抑制率为84%,对蛋白表达的抑制率为27%.细胞增殖结果显示,转染shRNA RAGE后细胞增殖能力明显降低;而细胞迁移能力则无明显变化.结论:shRNA RAGE能有效下调RAGE基因的表达水平,抑制细胞增殖.
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抗SMO多克隆抗体对DU145前列腺癌细胞生长及侵袭力的影响
目的 探讨抗SMO多克隆抗体对DU145前列腺癌细胞生长及侵袭能力的影响.方法 预测SMO蛋白抗原表位并制备SMO抗体,评估其效价和特异性;实验分组包括空白对照组、兔IgG抗体处理组、抗SMO抗体处理组、shRNA空载对照组、TRPC-6蛋白shRNA稳转细胞处理组以及合并正常IgG抗体和抗SMO抗体处理组.MTT法和细胞凋亡实验检测抗SMO抗体对DU145细胞增殖和细胞凋亡的影响;Transwell实验检测抗SMO抗体对正常以及稳转TRPC-6shRNA蛋白的DU145细胞侵袭能力的影响.结果 制备的抗体效价为1∶51 200,且抗体特异性良好;随着抗SMO抗体浓度的升高,细胞存活百分比逐渐下降(P＜0.05),随着时间的发展,48 h和72 h之间的细胞存活百分比存在差异(P＜0.05).凋亡实验显示,早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)凋亡百分比在抗SMO抗体处理组较空白对照组中明显升高(P＜0.05),随着抗体浓度的升高,凋亡百分比逐渐升高.Transwell实验显示,随着抗SMO抗体的处理,细胞的细胞侵袭抑制率逐渐升高(P＜0.05),TRPC-6蛋白shRNA稳转DU145细胞处理组中,随着抗体浓度的升高,细胞的细胞侵袭抑制率逐渐升高(P＜0.05).结论 抗SMO多克隆抗体对正常以及TRPC-6蛋白shRNA稳转的DU145细胞生长以及侵袭能力均有明显的抑制作用,为临床治疗前列腺癌提供一个潜在的方向.
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长链非编码RNA H19在前列腺癌中的表达及对前列腺癌细胞糖代谢与生长的影响
目的:探讨长链非编码RNA H19在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞DU145和PC-3糖代谢和生长的影响. 方法:采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测20例前列腺癌组织(高分化和低分化各10例)和5例良性前例腺增生组织中H19的表达水平.H19小干扰RNA(siRNA)转染前例腺癌细胞DU145和PC-3,以不转染载体和转染阴性载体作为空白对照组和阴性对照组,MTT法检测转染后DU145和PC-3细胞的生长情况,qPCR检测转染细胞中H19的表达水平,通过测定培养液中葡萄糖和乳酸的含量分析前例腺癌细胞糖代谢的变化.结果:高分化和低分化前例腺癌组织中H19的相对表达量(0.725±0.385、2.086±0.542)均显著高于BPH组织(0.210 ±0.068),P均＜0.01,且低分化前例腺癌组织显著高于高分化前列腺癌组织(P＜0.01).转染H19 siRNA后,H19在DU145和PC-3细胞中的表达均显著低于空白对照组和阴性对照组(P均＜0.01);转染H19 siRNA后的DU145和PC-3细胞,生长能力、葡萄糖消耗量和乳酸生成量均较空白对照组和阴性对照组显著下降(P均＜0.01). 结论:H19在前列腺癌中呈现高表达,抑制其表达可有效抑制前列腺癌细胞的糖代谢和生长.
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罗默碱抗前列腺癌活性的实验研究
目的:构建体外、体内模型,探讨罗默碱抗前列腺癌活性. 方法:检测罗默碱对多种前列腺癌细胞(DU145、LNCaP、PC-3和22RV1)增殖、凋亡和迁移的影响,筛选敏感肿瘤细胞系,构建裸鼠荷瘤模型,进一步验证罗默碱的体内抗肿瘤药效. 结果:罗默碱对DU145、LNCaP、PC-3和22RV1细胞增殖和迁移均具有不同程度的抑制作用,对其细胞凋亡亦具有不同程度的诱导作用,其中以LNCaP细胞为敏感.裸鼠荷LNCaP肿瘤模型中,罗默碱单独干预组肿瘤重量[(1.99±0.95)g]显著低于对照组[(2.95±1.04)g],P＜0.01;而高剂量罗默碱(30 mg/kg)和紫杉醇联合干预组肿瘤重量[(0.90±0.16)g]均显著小于其他3组(P＜0.05或P＜0.01).罗默碱单独干预组裸鼠的心脏脏器系数(0.58 ±0.06)、肝脏脏器系数(6.20±0.42)和肾脏脏器系数(1.49±0.33)均不同程度低于紫杉醇单独干预组(0.66 ±0.04、6.99 ±0.72和1.95 ±0.34,P均＜0.05),脾脏脏器系数(0.54±0.11)和胸腺脏器系数(0.06 ±0.01)显著高于紫杉醇单独干预组(0.41 ±0.09、0.05 ±0.01,P均＜0.05).病理结果显示罗默碱干预组及联合给药组中肿瘤恶变程度和肿瘤转移程度低于对照组,罗默碱干预组及联合给药组中小鼠内脏损伤明显小于紫杉醇组水平. 结论:罗默碱发挥一定的抗前列腺肿瘤功效,同时联合化疗药给药时可以降低其毒性.
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Rock蛋白抑制剂法舒地尔对前列腺癌PC3、DU145细胞侵袭、迁移和凋亡的影响
目的:探讨RhoA/Rock信号传导通路在前列腺癌形成过程中的可能作用;研究Rock蛋白抑制剂法舒地尔潜在抗肿瘤侵袭、迁移和促凋亡的作用. 方法:分别用5、10、20、40、80、160 μmol/L浓度的法舒地尔作用于前列腺癌PC3、DU145细胞24 h,MTT法检测细胞增殖抑制率,并计算其IC50,取法舒地尔IC50的1/4作为给药剂量用于进一步研究.免疫细胞化学法检测法舒地尔对PC3、DU145细胞RhoA、Rock I、RockⅡ蛋白表达的影响;Western印迹检测法舒地尔对PC3、DU145细胞RhoA总蛋白、RhoA膜蛋白、Rock I、RockⅡ蛋白表达的影响;通过Transwell、划痕实验、流式细胞术评估细胞的侵袭、迁移、凋亡情况. 结果:随着法舒地尔作用浓度的增加,对PC3、DU145的抑制率分别从(9.29 ±1.23)％、(7.59 ±1.54)％增加到(81.37 ±3.97)％、(76.53 ±2.67)％,呈一定剂量依赖性(P均＜0.05);细胞迁移实验中实验组穿入下室的PC3、DU145细胞为(39.2±8.4)个和(34.2±6.7)个,阴性对照组分别为(116.8 ±9.3)和(112.5 +10.8)个,差异有统计学意义(P均＜0.05);划痕实验结果显示实验组PC3、DU145细胞24 h划痕愈合率为(37.26±1.17)％和(32.38 ±2.73)％,阴性对照组愈合率为(78.12±4.16)％和(69.47 ±6.71)％(P均＜0.05);Annexin V-FITC/PI双染色法的结果显示,法舒地尔作用PC3、DU145细胞后凋亡率分别为(31.88±2.49)％、(28.65±2.99)％,显著高于阴性对照组[(7.51 ±2.28)％、(7.13±1.61)％,P均＜0.05].免疫细胞化学检测显示,法舒地尔能明显降低Rock I和RockⅡ的表达(与阴性对照组比较P均＜0.05),而RhoA的表达与阴性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);Western印迹也显示,法舒地尔也明显降低RhoA膜蛋白、Rock I、RockⅡ蛋白的表达(与阴性对照组比较P均＜0.05),而RhoA总蛋白表达与阴性对照组差异无统计学意义(P＞0.05). 结论:RhoA/Rock信号传导途径可能参与了前列腺癌的形成;法舒地尔能够有效地抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移,并促进其凋亡,其机制可能与法舒地尔下调RhoA/Rock信号通路有关.
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奥曲肽抑制雄激素非依赖性前列腺癌增殖的相关分子机制
目的 探讨奥曲肽在体外抑制人雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145增殖作用及相关分子机制.方法 以紫杉醇为对照,采用XTT法测定1000 nmol/L奥曲肽对DU145细胞增殖的影响,采用人全基因表达谱芯片检测奥曲肽对DU145细胞作用前后基因表达的差异.结果 奥曲肽显著抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,抑制率(51.4±3.2)％.芯片分析结果显示,奥曲肽对DU145细胞作用前后,共有325个基因有差异表达;其中,表达量差异在2倍以上的基因58个.与增殖相关的基因p21和p27表达升高,Cyclin E和CDK2基因表达降低.结论 奥曲肽能在体外抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145的增殖;其作用机制可能与上调p21和p27基因的表达,下调Cyclin E和CDK2基因表达相关.奥曲肽有可能成为治疗雄激素非依赖性前列腺癌的药物选择.
关键词： 奥曲肽 雄激素非依赖性前列腺癌 DU145 -
异黄酮增加前列腺癌细胞放射敏感性
目的:研究异黄酮(genistein)与辐射联合应用对DU145前列腺癌细胞放射敏感性的影响.方法:雄激素非依赖型DU145前列腺癌细胞在克隆形成试验中,接受不同浓度的genistein和/或合用辐射,比较DU145细胞的存活率;用DNA Ladder检测细胞凋亡,并辅以TUNEL法观察凋亡形态;流式细胞仪和免疫印迹法分别观察细胞周期改变和相关蛋白表达.结果:克隆形成试验显示,genistein在较低或中等浓度(5～15 μmol/L)时,即可提高DU145细胞的放射敏感性;单独辐射和/或合用genistein 24 h后,细胞凋亡主要见于高浓度genistein(＞30 μmol/L)处理组,72 h后凋亡亦见于较低浓度genistein组;当genistein与辐射合用时,可产生G2/M细胞周期阻滞,72 h后得到大部维持并伴有凋亡和超二倍体细胞群的出现;细胞周期相关蛋白分析提示,随着genistein浓度的提高,周期素B1呈明显双相改变,cdc-2亦呈类似改变,但较轻微,而p21cip1则稳步上升.结论:genistein可提高DU145前列腺癌细胞的放射敏感性,其机理可能与凋亡细胞的增加,细胞周期阻滞和细胞修复功能障碍有关.
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稳定沉默Raptor表达的前列腺癌DU145细胞株的构建
目的 应用RNA干扰技术降低前列腺癌DU145细胞株Raptor基因表达水平,并建立稳定转染细胞株.方法 针对Raptor基因设计合成siRNA,鉴定、测序正确后转染293T细胞观察基因表达情况；构建Raptor-shRNA慢病毒载体；进行Raptor-shRNA慢病毒包装及滴度测定；筛选稳定表达Raptor-shRNA的前列腺癌DU145细胞株；Western blot检测稳定转染细胞中的Raptor表达水平.结果 Raptor-shRNA成功转染前列腺癌DU145细胞后,通过嘌呤霉素筛选,获得了Raptor基因沉默的DU145细胞株,Western blot检测证实该细胞株的Raptor表达水平明显低于对照组(P＜0.01).结论 成功构建稳定沉默Raptor表达的前列腺癌DU145细胞株,为后续研究奠定了基础.
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基因沉默白介素8对激素非依赖前列腺癌干细胞的生物特性的影响
目的：探讨小干扰RNA沉默激素非依赖前列腺癌DU145细胞白介素8基因对肿瘤干细胞生物学特性及耐药性的影响。方法用不同剂量的小干扰RNA沉默激素非依赖前列腺癌DU145细胞IL-8基因，应用流式仪检测AL-DH阳性细胞比例的变化。采用悬浮细胞成球和克隆形成实验分别观察肿瘤干细胞自我更新和体外成瘤能力的变化。Annexin V-PE／7-AAD细胞凋亡双染试剂盒检测细胞凋亡率的变化，Western-blot法分析Akt蛋白的变化。结果 DU145细胞IL-8基因的沉默能降低肿瘤干细胞的比例，显著降低肿瘤干细胞悬浮细胞成球率和克隆形成率。多西他赛能显著抑制IL-8基因沉默DU145细胞的活性。 Western-blot显示Akt的磷酸化被显著抑制。结论 IL-8基因的沉默能显著抑制激素非依赖前列腺癌干细胞的自我更新和体外成瘤能力，增加该群细胞对多西他赛的化疗敏感性，同时显著抑制了Akt的磷酸化，这可能是IL-8基因沉默抑制该群细胞干细胞特性的作用机制之一。
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肝癌衍生生长因子对前列腺癌细胞增殖的影响及其机制
目的 探讨人肝癌衍生生长因子(hHDGF)对前列腺癌细胞增殖的影响及相关机制.方法 根据hHDGF的干扰靶点构建短发卡RNA(shRNA)慢病毒载体,包装并纯化后稳定转染前列腺癌细胞株DU145和LNCaP.细胞分为2组:① 含无意义序列的慢病毒转染细胞作为对照组;② 含靶序列的慢病毒转染细胞作为实验组.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hHDGF mRNA表达,CCK-8实验和集落形成实验检测细胞增殖,Western blot-ting检测细胞内相关蛋白的表达水平.结果 成功构建慢病毒载体并稳定转染至前列腺癌细胞株,qRT-PCR和Western blotting结果示,hHDGF mRNA和蛋白表达均下降(P<0.05),CCK-8实验和集落形成实验均显示细胞增殖受到抑制(P<0.05),Western blotting结果示磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(P-AKT)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(P-mTOR)的表达均下降(P均<0.05).结论 hHDGF表达下调对前列腺癌细胞增殖具有抑制作用,该作用可能与PI3K-AKT-mTOR信号通路改变相关.
