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地榆总皂苷对巨核祖细胞增殖分化及相关受体表达的影响
目的:观察地榆总皂苷(DYS)对Baf3细胞和32D细胞的促增殖和分化作用,以及对IL-3受体和干细胞因子受体c-kit表达水平的影响.方法:培养依赖IL-3生长的Baf3细胞和32D细胞,在加或不加IL-3条件下,用质量浓度为5,10,20,30,40 mg·L-1的DYS分别处理细胞24,48,72,96 h后,采用CCK8方法检测细胞增殖;并用Giemsa染色检测细胞分化;另以RT-PCR方法检测DYS对Baf3细胞IL-3受体及对32D细胞c-kit表达水平的影响.结果:DYS单独处理细胞48 h,明显促进Baf3细胞和32D细胞增殖;与对照细胞比较,DYS处理32D细胞呈现成簇生长并形成许多大的细胞团;在加入IL-3的条件下,DYS也能明显增强IL-3的促细胞增殖作用.此外,DYS高浓度单独处理32D细胞可明显诱导多倍体巨核细胞数增加,促进巨核细胞分化.在mRNA水平,DYS单独处理细胞也能明显上调IL-3受体和c-kit的表达.结论:地榆总皂苷单独作用能促使2种巨核祖细胞的增殖和分化,其作用与上调IL-3受体和c-kit表达水平有关.
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外周血干细胞因子及其受体表达与血压水平的关系
背景 高血压及血压升高导致的血管损伤在人群中患病率很高,干细胞因子(SCF)及其受体在血管损伤修复方面有重要作用.SCF可分两型,可溶型SCF参与各种病理应激反应,膜结合型与慢性炎症时血管形成和纤维化有关.目的 探讨外周血浆中干细胞因子(SCF)及其受体(c-kit)表达与血压水平之间的关系.方法 采用横断面研究方法,随机入选156例作为研究对象,包括正常血压(n=36),高血压前期(n=45)和高血压病人(n=75).测量腰围、血压、血脂、血糖等指标.用酶联免疫吸附法(ELISA)检测外周血浆中SCF及其受体蛋白的表达,放射免疫法检测内皮素1及肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平.结果 ①SCF及c-kit水平随血压水平的升高而增加[SCF:正常血压(768.8±44.1)比高血压前期:(834.6±47.6)比高血压:(907.1±52.3)ng/L;c-kit:正常血压(9.6±1.5)比高血压前期(11.1±2.1)比高血压(13.2±1.6)mg/L,P<0.01];②SCF及c-kit表达水平与收缩压、舒张压、内皮索1和TNF-α水平呈正相关;③多无线性回归显示SCF、c-kit和内皮素1是收缩压的危险因素,SCF、c-kit、内皮素1和TNF-α是舒张压的危险因素.结论 外周血中SCF及其受体c-kit表达水平随血压水平升高而有逐渐升高趋势,并与收缩压,舒张压、内皮素1和TNF-α水平呈正相关,提示高血压病人血管有炎症过程,内皮明显损伤.
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长链非编码RNA ZXF1表达与肺腺癌预后的关系及相关分子机制
目的：探讨长链非编码RNA ZXF1的表达情况与肺腺癌临床病理特征和预后的关系以及相关分子机制。方法收集83例手术切除的肺腺癌组织标本，荧光实时定量PCR检测ZXF1 mRNA的表达，分析ZXF1表达水平与肺腺癌临床病理特征和预后的关系。建立肺腺癌A549细胞过表达ZXF1模型，利用蛋白质抗体芯片技术筛选与ZXF1功能上相关的靶蛋白。结果83例肺腺癌组织和癌旁组织中，ZXF1 mRNA的表达水平分别为8．32±3．05和1．05±0．47，差异有统计学意义（P＜0．05）。 ZXF1表达水平与肺腺癌患者的肿瘤分化程度和淋巴结转移有关（均P＜0．05），与患者性别、年龄和肿瘤大小无关（均P＞0．05）。 Kaplan?Meier分析显示，ZXF1 mRNA高表达组患者的无病生存时间（DFS）和总生存时间（OS）均低于ZXF1 mRNA低表达组（P＜0．05）。 Cox多因素分析显示，年龄、ZXF1表达水平、肿瘤大小和淋巴结转移为影响肺腺癌患者DFS的独立因素（均P＜0．05），年龄、ZXF1表达水平、肿瘤大小、淋巴结转移和肿瘤分化程度为影响肺腺癌患者OS的独立因素（均P＜0．05）。蛋白质抗体芯片检测显示，肺腺癌A549细胞过表达ZXF1后，骨形态发生蛋白5（ BMP?5）和干细胞因子受体（ SCFR）表达相应增加。结论 ZXF1在肺腺癌组织中高表达，并且与肿瘤分化程度及淋巴结转移有关，ZXF1高表达的肺腺癌患者预后较差。 ZXF1可能通过增强靶蛋白BMP?5和SCFR的表达而影响肺腺癌的进展。
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干细胞因子受体在急性白血病病人中的表达及其临床意义
目的:探讨干细胞因子受体(c-kit R)在急性白血病病人中的表达及其临床意义.方法:采用流式细胞仪(FCM)分别检测24例急性淋巴细胞白血病(ALL)和47例急性髓细胞白血病(AML)病人骨髓单个核细胞(MNC)跨膜c-kit R表达的阳性率及阳性水平 .结果:ALL病人c-kit R表达的阳性率及阳性水平与正常人相比差异无显著性(P>0.05),而AML 病人的c-kit R水平则显著高于对照组和ALL病人(P<0.01).AML病人的c-kit R表达率及阳性水平以M1、M2高,M4、M5低,两者间差异有显著性(P<0.05);染色体核型分析显示,c-kit R阳性表达的AML病人,大多数出现染色体核型异常.结论:c-kit R检测有助于ALL和AML的鉴别及AML的FAB亚型分型.
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小鼠胚胎与成体肝脏中干细胞变化的探讨
目的 依据干细胞生物学特性,探讨从胚胎到成体肝脏内具干细胞特性细胞的变化状况.方法 分离不同胎龄与日龄小鼠肝脏细胞进行体外培养,观察分离获得的细胞数、培养形成的集落数及生长状态,并对集落进行干细胞表面标记物(c-kit、c-Met、Nestin)、肝细胞表面标记物(AFP、ALB)及胆管上皮细胞表面标记物(CK19)的标记.结果 各组分离的细胞经体外培养均有集落形成,肝干细胞的表面标记提示形成的集落具有肝干细胞特性.其中以第15天胚胎肝脏分离所获的细胞数和培养形成的集落数多、生长状态好.15 d后观察的各项指标渐减,细胞生长状态渐差.结论 早期胚胎肝脏中大部分是具有干细胞特性的细胞,随胎龄增加,有干细胞特性的细胞逐渐减少,直至出生第5天仅有少数保持未分化状态的细胞存留在肝脏内.
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干细胞生长因子在自体移植中厚皮片中的表达
目的 检测干细胞因子(Stem cell factor,SCF)在人自体移植中厚皮片中的表达,初步认识干细胞因子在自体移植皮片色素沉着发牛机制中的作用.方法 取面颈部自体中厚皮片移植术后1年左右的色素沉着皮片,以自身正常皮肤作为对照,组成配对资料n＝16),利用S-P免疫组化方法,检测SCF在受区移植皮片、受区周围与供区周围正常皮肤的表达与分布,使用MIQAS医学图像定量分析系统,定量检测各组标本中SCF阳性表达面积(PA)、阳性表达强度(OD).计算出阳性表达指数(P1,PI＝PA×0D),并就PI值行统计学分析.结果 SCF表达定位于表皮基底层的黑素细胞与角朊细胞的胞浆及胞膜表面.SCF在受区移植皮片、受区周嗣及原供区周围正常皮肤中的PI值分别为158 830±53 753、86 839±21 381、85 033±16 972.SCF在受区移植皮片组的表达与两正常对照组相比具有显著性差异(p＜0.01);SCF在受区周围正常对照皮肤与原供区周围正常皮肤中的表达无差异.结论 SCF在自体中厚移植皮片中的表达较在自体正常对照皮肤中显著增高,推测SCF在自体移植皮片色素过度沉着中可能起重要凋控作用.
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c-kit细胞内信号传导在NB4细胞分化中的作用
目的 探讨c-kit信号传导在全反式维甲酸(ATRA)诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4细胞分化中的作用.方法 用ATRA诱导APL细胞株NIM.RT-PCR、Western blot分别检测诱导后NIM细胞中c-kit mRNA、c-kit蛋白的表达;流式细胞仪(FCM)测定细胞表面CD117表达情况.结果 ATRA诱导后的NIM细胞稳定表达c-kit基因;随细胞的分化成熟,c-kit mRNA及c-kit蛋白的表达呈进行性下降,ATRA处理后24、48、72 h,c-kit mRNA表达分别下降38.9%.44.4%和61.1%,c-kit蛋白分别下降4.3%,34.6%,80.2%;细胞表面CDm表达率极低,ATRA处理前后无明显变化.结论 c-kit细胞内信号传导可能参与ATRA诱导NB4细胞分化的调节.
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慢性再生障碍性贫血患儿血浆可溶性干细胞因子及其受体水平测定的意义
目的探讨可溶性干细胞因子(SCF) 及其受体(s-kit)与儿童慢性再生障碍性贫血(CAA)发病的关系.方法利用ELISA法测定CAA患儿、正常儿童外周血浆及脐血血浆s-kit及SCF水平.结果 CAA组血浆s-kit水平(13.02±5.18) μg/L低于正常儿童组(17.82±5.36) μg/L和脐血组(19.0±5.63) μg/L,CAA组血浆SCF水平(365.5±98.35) μg/L,低于正常儿童组(469.26±102.32) μg/L和脐血组(567.22±135.88) μg/L.结论 CAA组血浆s-kit及SCF水平降低,提示s-kit及SCF可能在儿童CAA发病中起一定作用.
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脂肪源间充质干细胞对小鼠急性肾损伤后干细胞因子及其受体表达的影响
目的 研究脂肪源间充质干细胞(ADMSCs)对急性肾损伤(AKI)的治疗作用,并探讨ADMSCs治疗小鼠AKI可能的机制.方法 30只雄性昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组和治疗组,每组10只.应用腹腔注射顺铂建立AKI模型,治疗组于注射顺铂12 h后尾静脉注射ADMSCs悬液,模型组于注射顺铂12 h后尾静脉注射等量生理盐水.注射顺铂7d后处死小鼠,通过测定血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平及观察小鼠肾组织形态学改变判断肾损伤情况;免疫组织化学法检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、干细胞因子受体(c-KIT)及干细胞因子(SCF)表达情况.结果 与模型组比较,治疗组BUN、Scr和NGAL水平显著下降(P＜0.01),肾小管坏死(ATN)评分显著降低(P＜0.01),c-KIT、SCF表达显著增加(P＜0.01);与正常对照组比较,模型组c-KIT、SCF表达亦显著增加(P＜0.01).结论 在AKI小鼠模型中,外源性ADMSCs可能通过旁分泌SCF、c-KIT,并激活SCF/c-KIT信号通路来促进肾小管细胞的修复,继而达到保护受损肾脏的作用.
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肛门直肠畸形直肠末端c-kit和干细胞因子受体表达的研究
目的 研究肛门直肠畸形(ARM)患儿直肠末端c-kit和SCF的表达水平,以探讨ARM患儿术后便秘的分子机制.方法 通过RT-PCR方法研究10例高位、10例中位、8例低位ARM畸形和2例后天性肛瘘直肠末端c-kit mRNA和SCF mRNA的表达水平,并与正常对照组进行比较.结果 与正常对照组相比较,c-kit mRNA、SCF mRNA的表达在高位ARM组、中位ARM组差异有显著意义(P＜0.05),后天性肛瘘组、低位ARM组差异无显著意义(P＞0.05).结论 低位ARM和后天性肛瘘直肠末端c-kit mRNA和SCF mRNA表达未见明显异常提示这两种疾病可能不影响患儿直肠末端Cajal间质细胞的发育和功能.高、中位ARM患儿直肠末端c-kit mRNA和SCF mRNA表达的减少可能是先天性的,将影响Cajal间质细胞的发育和功能,可能是患儿术后便秘产生的分子生物学证据之一.
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曲尼斯特延缓糖尿病肾病肾间质纤维化的作用及机制
目的：研究曲尼斯特延缓糖尿病肾病肾间质纤维化的作用及机制。方法：建立糖尿病肾病(DKD)大鼠模型：SD大鼠随机分为正常对照组(n=6)、DKD模型组(n=8)、曲尼斯特低剂量(n=8)和高剂量治疗组(n=8)。采用高糖高脂饲料喂养联合低剂量STZ注射构建大鼠DKD模型。成模后，分别予以曲尼斯特200 mg/(kg·d)(曲尼斯特低剂量组)和400 mg/(kg·d)(曲尼斯特高剂量组)分2次灌胃。于第8周末处死大鼠，收集大鼠24 h尿液测24 h尿白蛋白排泄量，收集血测肾功能及血白蛋白；取部分肾组织置于4%中性甲醛溶液中固定，采用免疫组织化学检测肾组织补体C3a受体(C3aR)，E-钙黏附蛋白(epithelial cadherin，E-Cadherin)，α-SMA，纤维连接蛋白(fibronectin，FN)，I型胶原蛋白(collagen I，Col I)，干细胞生长因子(stem cell factor， SCF)和干细胞因子受体(c-kit)的表达以及分布；Western印迹检测肾组织E-cadherin，α-SMA，FN，Col I，SCF和c-kit蛋白的表达；RT-PCR检测肾组织FN，Col I，SCF，c-kit mRNA的表达。结果：曲尼斯特能抑制肥大细胞在DKD大鼠肾组织的浸润；DKD模型组肾小管上皮细胞E-cadherin的表达较正常对照组减少，并可见α-SMA表达，曲尼斯特可一定程度逆转这一过程；与正常对照组比较，DKD模型组肾小管间质区域Col I和FN的表达增加，曲尼斯特能剂量依赖性地抑制Col I和FN的表达；DKD大鼠肾组织SCF，c-kit蛋白及mRNA表达增加；肾组织SCF，c-kit蛋白表达与肥大细胞浸润程度及肾小管间质FN，Col I蛋白的表达呈显著正相关。曲尼斯特能抑制SCF，c-kit mRNA及蛋白的表达(P<0.05)。结论：肥大细胞参与了DKD大鼠肾间质纤维化的发生发展，曲尼斯特可能通过阻断SCF/c-kit信号通路，抑制肥大细胞的募集而逆转DKD大鼠肾小管上皮细胞的EMT，抑制肾间质纤维化。
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SCF/c-Kit反应轴调控ADSCs在糖尿病创面修复中的作用研究
目的 探讨干细胞因子(SCF)/干细胞因子受体(c-Kit)信号调节脂肪间充质干细胞(ADSCs)增殖、迁移的作用机制,及其在糖尿病创面愈合中的作用.方法 分离培养ADSCs.将其分为ADSCs组、ADSCs+SCF(4 ng/ml,24 h)组和ADSCs+SCF+c-Kit siRNA(4 ng/ml,24 h)组;利用Western blot检测c-Kit、p-AKT、AKT蛋白的表达;采用CCK-8、细胞克隆形成检测增殖情况;采用Transwell法检测迁移情况.采用链脲佐菌素腹腔注射复制糖尿病小鼠模型,并复制背部直径为2cm的全层皮肤缺损模型.将6只糖尿病裸鼠随机分为实验组和对照组,对照组小鼠于创面周围以皮内注射方式注射1×106个未处理的ADSCs,实验组小鼠注射等量的经SCF(4 ng/ml)预处理24 h后的ADSCs.10 d后处死各组裸鼠,计算创面愈合率,苏木精-伊红染色法检测真皮层与表皮层间的厚度,比较两组的差异.结果 SCF诱导c-Kit的表达呈时间、浓度依赖性(<0.05).SCF促进ADSCs的增殖、迁移,c-Kit siRNA抑制ADSCs的增殖、迁移(<0.05).SCF促进p-AKT的表达,c-Kit siRNA抑制c-Kit、p-AKT的表达.实验组糖尿病裸鼠创面愈合率更高,真皮层与表皮层厚度大(<0.05).结论SCF/c-Kit反应轴激活PI3K/AKT信号通路,促进ADSCs增殖、迁移.SCF预处理能够促进糖尿病裸鼠创面愈合.
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三七皂苷对apoE-/-小鼠骨髓微环境中干细胞因子的影响
目的:研究三七皂苷(PNS)对apoE-/-小鼠骨髓来源内皮祖细胞的动员及其对骨髓微环境中干细胞因子的影响.方法:8周龄载脂蛋白E基因敲除(apoE-/-)小鼠,高脂饲料喂养,随机分为3组(n=15):模型组、三七皂苷低剂量和高剂量组,每天分别腹腔注射生理盐水、60mg/kg和120mg/kg三七皂苷.8周后,流式细胞仪检测外周血c-kit +/sca-1+和VEGFR-2 +/sca-1+细胞并计数,主动脉根部HE染色并计算动脉粥样斑块面积.应用Real time PCR检测骨髓SCF,c-kit和PI3K mRNA的水平.结果:模型组主动脉根部有明显的斑块形成,三七皂苷60mg/kg(P＜ 0.05)和120mg/kg(P ＜0.01)斑块面积均显著减小;三七皂苷低、高剂量组外周血c-kit +/sca-1+和VEGFR-2 +/sca-1+细胞数量明显高于模型对照组(P＜0.01),SCF、PDKmRNA水平明显高于模型组(P＜0.01).结论:三七皂苷动员骨髓来源内皮祖细胞可能与调控骨髓微环境中SCWc-kit信号通路相关.
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大鼠急性心肌梗死后心脏血流动力学参数、心肌组织病理学及c-kit mRNA表达的变化
探讨大鼠急性心肌梗死(AMI)后不同时间点心脏血流动力学参数、心肌组织病理学和c-kitmRNA表达水下的变化及三者之间的相互关系.66只成年雄性SD大鼠随机分为:正常组、假手术组和结扎组.通过结扎冠状动脉左前降支建立AMI模型.实验结束后,检测心脏血流动力学参数、心肌组织病理学变化和c-kit mRNA的表达水平.结果表明,正常组与各假手术组间血流动力学参数无明显差异(P＞0.05).与正常组相比,各结扎组的左心室收缩压(LVSP)、左心室内压力大上升速率和大下降速率(±dp/dtmax)均明显降低(P＜0.01);左心室舒张末期压力(LVEDP)明显上升(P＜0.01).但与结扎6 h组相比,其余各结扎组的LVSP、LVEDP、±dp/dtmax均明显升高(P＜0.05).结扎区心肌组织HE染色显示,与正常组相比,6 h结扎组心肌细胞无明显形态学改变;1 d结扎组细胞核固缩或碎裂,横纹不清或消失,大量心肌发生坏死;3 d结扎组心肌细胞结构消失,坏死区形成,并可见大量炎症细胞浸润;7 d结扎组中性多核细胞浸润更加明显,弥漫整个坏死区域;14 d结扎组可见梗死区周边有肉芽组织长入,并伴大量的中性多核细胞浸润.RT-PCR显示,c-kit mRNA在正常组和假手术组心肌组织中有低水下表达,但二者无明显差异(P＞0.05).结扎各组从3 d到14 d,心肌组织中c-kit mRNA表达分别为相应假手术组的1.46倍、1.91倍、2.67倍.提示,AMI后前2周内,受损心肌组织结构和心脏功能已开始修复,而c-kit+心肌干细胞在心肌的再生修复过程中可能发挥重要作用.
