熊果酸对乳腺癌细胞caspase-3和PARP表达的影响

目的:探讨三萜类中药成分熊果酸(UA)诱导乳腺癌细胞MCF-7的凋亡作用,并通过分析UA作用后MCF-7细胞的caspase-3和多聚ADP核糖多聚糖(PARP)蛋白表达的变化,探讨其诱导MCF-7细胞凋亡的分子机制.方法:采用细胞培养技术,用不同浓度的药物在一定的时间内处理细胞株,采用MTT法、活细胞原位光镜和荧光染色技术、流式细胞技术(FCM)、荧光免疫组织化学技术,图象分析技术,研究UA对caspase-3和PARP蛋白表达的影响,诱导细胞凋亡的作用.结果:UA剂量依赖性的抑制MCF-7细胞增殖,半数生长抑制剂量(IC50)为(22.6±3.0)μmol·L-1,诱导caspase-3和PARP表达增加,使细胞呈现典型的凋亡形态学特征,核质浓集,有凋亡小体.结论:UA诱导MCF-7细胞凋亡,其机制涉及到caspase-3和PARP依赖性凋亡调节信号通路.

大肠癌PARP表达与P-selectin和ICAM-1表达的相关性

目的 初步探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)与大肠癌侵袭转移的关系及其可能机制.方法 采用SP免疫组化法检测PAR(聚腺苷二磷酸核糖,系PARP产物)、P-selectin及ICAM-1的表达;并应用免疫荧光双标法检测PAR与P-selectin、ICAM-1的共表达.结果 大肠癌组织内PAR、P-selectin及ICAM-1的表达均明显高于对照肠黏膜(P＜0.05);3种蛋白的表达仅与大肠癌转移有关(P＜0.05),而与其他临床病理因素无关;PAR与P-selectin和ICAM-1的表达均呈正相关关系(P＜0.05).结论 大肠癌组织内PARP活性增强,并可能通过上调P-selectin和ICAM-1的表达而有利于大肠癌侵袭转移,有望成为判断大肠癌转移的参考指标之一.

TRIM69可抑制紫外线和依托泊苷刺激时HeLa和HEK293T细胞系内活化型caspase7和剪切型PARP的表达

目的 验证TRIM69蛋白是否能够抑制HeLa和HEK293T细胞系内活化型caspase7(cleaved caspase7)和剪切型PARP(cleaved PARP)的蛋白水平.方法 构建含人源TRIM69的真核表达质粒,转染HeLa细胞和HEK293T细胞,筛选稳定表达TRIM69的细胞系,通过紫外线照射和凋亡诱导剂依托泊苷(etoposide)刺激处理,Western blot检测细胞内TRIM69蛋白、活化型caspase7和剪切型PARP蛋白水平的变化.结果 紫外线照射和依托泊苷刺激后,与对照组相比,TRIM69过表达的细胞内活化型caspase7和剪切型PARP的蛋白水平均下降(P＜0.05).结论 TRIM69蛋白的表达可抑制紫外线或依托泊苷刺激时HeLa和HEK293T细胞内凋亡相关蛋白活化型easpase7和剪切型PARP的蛋白水平.

雷公藤内酯醇诱导MUTZ-1细胞凋亡及其机制研究

为了探讨雷公藤内酯醇(triptolide)诱导骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系MUTZ-1细胞凋亡及其作用机制,将triptolide与MUTZ-1细胞共育,采用MTT法观察细胞生长,DNA片段化分析和Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR及Western blot方法检测基因和蛋白质水平.结果表明:triptolide对MUTZ-1细胞具有明显的生长抑制作用,呈量效与时效关系,24小时半数抑制率(IC50)为55.06ng/ml;triptolide能诱导MUTZ-1细胞DNA断裂产生DNAladder,且能诱导MUTZ-1细胞磷脂酰丝氨酸转位,其发生率随药物浓度增加而增加;triptolide作用于MUTZ-1细胞12小时导致caspase-3激活,PARP酶解及c-IAP2 mRNA表达水平下调,凋亡率与caspase-3原酶及c-IAP2表达量呈负相关(r=-0.907,P=0.000;r=-0.919,P=0.000).结论:triptolide能通过诱导凋亡抑制MUTZ-1细胞的生长,triptolide诱导MUTZ-1细胞凋亡是通过caspase-3激活及PARP酶解所介导的,且caspase-3的激活可能与凋亡蛋白抑制因子c-IAP2的下调有关.

脊髓损伤诱发Leydig细胞凋亡与PARP、FAS基因表达

目的：研究切除精索神经对Leydig细胞凋亡和PARP、Fas基因表达的影响。方法成年健康SD大鼠20只，随机分为假手术组和脊髓损伤组，手术后14 d以Percoll连续密度梯度法提取Leydig细胞后采用流式细胞仪（FACS）定量检测Leydig细胞凋亡情况，以Western blot方法检测Leydig细胞中cleaved-PARP、Fas蛋白的表达。结果脊髓损伤组凋亡Leydig细胞比例（32.15%）显著高于假手术组（12.78%）（P＜0.05），其Fas蛋白及Cleaved-PARP蛋白的表达水平均显著升高。结论脊髓损伤诱发Leydig细胞凋亡，PARP、Fas基因参与对该过程的调控。

二甲双胍联合胰岛素对妊娠期糖尿病患者临床疗效及PARP水平分析

目的 观察妊娠期糖尿病患者应用胰岛素、二甲双胍联合治疗的疗效及PARP水平变化.方法 选取2017年7月—2018年7月在该院诊治的108例GDM患者临床资料,按不同治疗方案分2组,每组54例,对照组经皮下注射门冬胰岛素治疗,观察组在其基础联合二甲双胍治疗,比较两组血糖及不良反应.结果 观察组治疗后FPG(4.02±0.34)mmol/L、2 hPG(5.54±0.63)mmol/L、HbAlc(5.39±0.84)％均比对照组水平低,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗后PARP水平(30.51±0.94)U/L比对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);两组不良反应比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 妊娠期糖尿病患者应用胰岛素、二甲双胍联合治疗能有效降低血糖,控制血糖稳定,并减少PARP,减轻炎症,且无明显不良反应,安全有效.

三阴性乳腺癌分子靶向治疗研究进展

三阴性乳腺癌缺乏ER、PR及Her2受体的表达,现有的内分泌治疗和分子靶向治疗无法应用.相较于其他分子类型的乳腺癌,三阴性乳腺癌的复发率、转移率及病死率仍较高.除发掘更有效的化疗药物及方案外,研究对三阴性乳腺癌有效的分子靶向治疗药物也至关重要.目前已开发出针对不同靶点的靶向药物主要包括以贝伐单抗为代表的抗血管生成药物,以希妥昔单抗和帕尼单抗为代表的抗表皮生长因子受体药物及以iniparib、olaparib和veliparib为代表的PARP抑制剂.虽然这些药物在细胞实验和动物模型研究中都表现出出色的抗肿瘤活性,它们在临床试验中的疗效却不甚理想.本文将就近年三阴性乳腺癌分子靶向治疗研究的不同分子靶点及相应的分子靶向药物临床应用的研究上取得的进展做一综述.

黄癸素诱导三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的研究

PARP抑制剂奥拉帕尼用于前列腺癌精准治疗的研究进展

探讨PARP抑制剂奥拉帕尼的作用机制及治疗前列腺癌(PC)的应用进展.查阅近年来关于奥拉帕尼与前列腺癌靶向洽疗的文献资料,予归纳综述.奥拉帕尼在有DNA修复缺陷的PC治疗有较好疗效,除BRCA1/2、ATM外,其他参与DNA修复的基因突变也有效,也可能作为疗效预测指标.另外奥拉帕尼与放疗、化疗及其他治疗方法联合应用具潜在的优势,需进一步临床验证.cfDNA液体活检可能成为新的预测标志物.奥拉帕尼的耐药及长期应用的血液学毒性需要注意.奥拉帕尼治疗中晚期PC有效,尤其是含有DNA修复缺陷的PC患者.这为PC的治疗提供了新选择.

急性淋巴细胞白血病与PARP活性的关系

目的 探讨急性淋巴细胞白血病与PARP活性的关系.方法 通过正常人和急性淋巴细胞白血病患者外周血细胞PARP活性检测进行对比研究.结果 急性淋巴细胞白血病患者血细胞PARP活性明显高于正常人.结论 急性淋巴细胞白血病与PARP高活性有相关性.

多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖致大鼠肾脏系膜细胞细胞外基质沉积中的作用

目的 探讨多聚二磷酸腺苷(ADP)核糖聚合酶-1(PARP-1)在高糖(25 mM)致大鼠肾脏系膜细胞细胞外基质沉积中的作用.方法 ①体外培养大鼠肾脏系膜细胞株(MCs 1097),使用高糖(25 mM)处理大鼠肾脏系膜细胞,部分实验组中应用PARP-1抑制剂PJ34(3×10-6 M)进行干预处理.②RT-PCR和Western blot检测PARP-1、纤维粘连蛋白(FN)、胶原Ⅳ(COL Ⅳ)的mRNA及蛋白表达.③高通量比色测定法检测PARP-1的活性.结果 ①高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1 mRNA和蛋白的表达,分别较低糖对照组增加72.3%和68.4%(P < 0.05),PJ34可明显抑制高糖诱导的PARP-1 mRNA和蛋白的过度表达,mRNA和蛋白分别为高糖组的31.8% 和55.5%(P < 0.05).同时,高糖显著诱导大鼠肾脏系膜细胞PARP-1激活,高糖组为低糖对照组活性的1.77倍(P < 0.05),PJ34可显著抑制高糖诱导的PARP激活,活性降低为高糖组的67.8% (P < 0.05).②高糖显著增加COL Ⅳ和FN表达,PJ34显著抑制高糖诱导的COL Ⅳ和FN mRNA过度表达(分别为高糖组的 68.2% 和54.7%(P < 0.05);COL Ⅳ和 FN蛋白水平的变化与RNA水平变化相一致,PJ34可显著抑制高糖诱导的COL Ⅳ和FN蛋白表达(分别为高糖组的54.0%及66.6%(P < 0.05).结论 高糖可以诱导培养的大鼠肾脏系膜细胞内PARP激活,PARP-1表达增加,PJ-34预处理可以明显降低高糖诱导的大鼠肾脏系膜细胞内PARP的激活以及下游FN及COLⅣ的高表达,提示PARP1 参与了肾脏系膜细胞细胞外基质沉积的发生发展过程.

PARP及NF-κB在重症急性胰腺炎大鼠肾上腺细胞中的表达及5-AIQ/PDTC的干预作用

目的 探讨ADP核糖聚合酶(PARP)/核因子(NF)-κB在大鼠重症急性胰腺炎(SAP)肾上腺损伤中的表达情况及PARP抑制剂5-氨基异喹啉酮(5-AIQ)/吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)的干预作用.方法 将原代培养的肾上腺皮质细胞进行细胞定量后分为6组:空白对照(SO组)、胰腺炎组(SAP组)、PDTC药物对照组(SO+ PDTC组)、PDTC干预组(SAP+ PDTC组)、5-AIQ药物对照组(SO +5-AIQ组)和5-AIQ干预组(SAP+ 5-AIQ组).以胰腺炎大鼠血清刺激SAP组和2个干预组,之后以适浓度加入每组相应药物,在给药后继续培养12h,观察各组细胞皮质酮分泌情况及PARP/NF-κB的表达情况.结果 体外培养肾上腺细胞呈圆形或类圆形,胞质内有分泌颗粒,培养第2天贴壁率约60％,可被3β-HSD染色.SAP组皮质酮水平为(216.4±15.7) μg/L,明显低于SO组(294.8±16.3)μg/L(P ＜0.05),5-AIQ干预组和PDTC干预组皮质酮水平分别为(258.6±19.0)μg/L及(264.3±18.2)μg/L,明显高于SAP组但低于SO组和药物对照组(P ＜0.05)；SAP组和PDTC干预组肾上腺细胞PARP-1的表达高于SO组,5-AIQ干预组PARP-1的表达明显低于SAP组和PDTC干预组,但高于SO组和药物对照组；SAP组肾上腺细胞NF-κB的表达高于SO组,5-AIQ干预组和PDTC干预组NF-κB的表达明显低于SAP组,但高于SO组和药物对照组.结论 PARP/NK-κB通路参与重症急性胰腺炎肾上腺损伤过程,应用5-AIQ及PDTC可在一定程度上减轻肾上腺细胞功能的损伤程度.

防治糖尿病并发症的新思路--干预过氧化物产生过量

在高血糖致血管损伤的过程中,线粒体电子传递链过氧化物产生过量是晚期糖基化终末产物形成、蛋白激酶C激活、多元醇通路和氨基己糖通路活性增高的共同机制.阻止过氧化物的生成或干预其作用将是糖尿病并发症防治的重要方向,其中转酮醇酶激活剂、多(ADP-核糖)聚合酶抑制剂和各种新型抗氧化剂备受关注.

氧化应激与糖尿病血管并发症

糖尿病血管并发症是糖尿病患者致残、致死的首要原因.高血糖引起细胞内活性氧簇生成过多是糖尿病血管损伤机制中的关键步骤.同时由于诱导型一氧化氮合酶表达增加,一氧化氮合成增多,两者产生的强氧化剂过氧亚硝酸阴离子引起一系列氧化应激反应,导致血管损伤.基于这一理论,有望开发针对氧化应激的新药,从根本上防治糖尿病血管并发症.

聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶抑制剂研究进展

肿瘤基因的不稳定性使其更容易产生并积累DNA损伤,但同时也会导致肿瘤DNA损伤修复功能发生部分丢失,使其更依赖于尚存的DNA修复路径,充分修复放化疗所致的DNA损伤,导致放化疗抵抗.聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶[poly-(ADP-ribose)polymerase,PARP]抑制剂可以在同源重组修复缺陷(homologous recombination deficiency,HRD)肿瘤细胞中充分修复DNA损伤,产生协同细胞杀伤的作用.目前,多种PARP抑制剂(PARP inhibitor,PARPi)通过美国食品药品监督管理局(FDA)审批用于晚期卵巢癌患者,多项临床试验也正在评估PARPi单药或联合放化疗是否可以使更多患者获益,以及毒性是否可以耐受,研究对象也从卵巢癌扩大到乳腺癌、前列腺癌、直肠癌、肺癌、胰腺癌、腹膜肿瘤、头颈部肿瘤、脑瘤、鳞状细胞癌及肉瘤等.本文对已应用于临床的PARPi研究情况及面临的问题进行综述.

黄芩甙对重症急性胰腺炎大鼠胰腺聚ADP-核糖聚合酶活性的抑制作用

目的 探讨黄芩甙对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺聚ADP-核糖聚合酶（PARP)活性的抑制作用.方法 将45只大鼠随机分为假手术组、模型组、黄芩甙干预组,每组15只.假手术组进腹后仅翻动胰腺和十二指肠后关腹，模型组采用3.5%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射造成SAP大鼠模型，黄芩甙干预组在造模成功后给予黄芩甙治疗.术后3，6，12 h测定各组大鼠血清淀粉酶、脂肪酶及胰腺组织髓过氧化物(MPO)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平，并用免疫组化方法检测胰腺组织PARP的活性代谢产物聚腺苷二磷酸核糖（PAR）的表达水平.结果 术后3，6，12h，模型组血清淀粉酶、脂肪酶及MPO水平均较假手术组显著增高.黄芩甙干预组血清淀粉酶、脂肪酶及MPO水平均显著低于模型组；术后各时间点，假手术组胰腺组织均无PAR表达;模型组PAR阳性，且随时间延长表达显著增多；黄芩甙干预组PAR表达低于模型组，且随时间延长显著减少.术后各时间点，黄芩甙干预组胰腺组织IL-6和TNF-α水平显著低于模型组(P均<0.01).结论 黄芩甙可能通过抑制PARP的活性，减轻活性氧产物对胰腺组织的损害而发挥对胰腺组织的保护作用.

姜黄素致SW872脂肪细胞凋亡作用

目的 探讨姜黄素对SW872脂肪细胞凋亡的影响及其凋亡机制.方法 MTT法检测不同剂量姜黄素对SW872前脂肪细胞和成熟脂肪细胞生长抑制的影响;4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察姜黄素作用后成熟脂肪细胞内细胞核变化.蛋白印迹法检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)裂解产物和Bcl-2-associated X protein(Bax)表达量.结果 姜黄素对SW872前脂肪细胞及成熟脂肪细胞生长有抑制作用,并呈剂量-时间效应关系,不同剂量姜黄素作用成熟脂肪细胞72h,与对照组比较,抑制率分别为2.97%、3.48% 、19.76% 、85.03%和94.48%;DAPI染色镜下观察成熟脂肪细胞出现明显核皱缩、变形现象;随姜黄素剂量增加,PARP裂解产物Bax蛋白表达量呈上升趋势(P<0.01).结论 姜黄素促进SW872脂肪细胞凋亡,凋亡机制与线粒体密切相关.

锯叶棕提取物对RPMI8226细胞凋亡相关蛋白表达的影响

[目的]探讨锯叶棕提取物对RPMI8226细胞凋亡的影响以及对细胞凋亡相关蛋白表达的影响.[方法]①体外培养的RPMI8226细胞加入到不同浓度的锯叶棕提取物(0.5或1.0μL/mL)培养24h,利用流式细胞仪测定位于前G1时期的细胞百分比以检测细胞凋亡;②体外培养的RPMI8226细胞加入到锯叶棕提取物(1.0μL/mL)培养24h,应用Western Blot检测PARP、MCl-1蛋白表达.[结果]①锯叶棕提取物诱导RPMI8226细胞凋亡具有剂量依赖性(P<0.05);②RPMI8226细胞暴露于锯叶棕提取物(1.0μL/mL)培养24h,PARP蛋白水平表达明显增加,但不能调整Mcl-1.[结论]锯叶棕提取物诱导RPMI8226细胞凋亡.

C-myb、PARP基因蛋白表达与食管癌放疗敏感性的相关因素分析

目的 探讨C-myb与PARP(聚腺苷二磷酸核糖聚合酶)与食管癌放疗敏感性的关系.方法 将124例食管癌患者分为四组,C-myb阳性组,PARP阳性组,C-myb与PARP双阳性组和双阴性组,进行常规分割放疗,2 Gy/次,5次/周,至DT 60 ～ 64 Gy/30 ～ 32次,未加用化疗.结果 四组3年局控率分别为37.9％、34.3％、25.8％、62.0％；3年生存率分别为13.8％、14.3％、9.6％、34.5％.结论 C-myb与PARP可作为预测食管癌放疗敏感性的检测手段之一.C-myb与PARP阳性者预后较差,应改变治疗模式或联合治疗.

PARP抑制剂对糖尿病大鼠皮层神经元的保护作用

目的：研究PARP抑制剂3?氨基苯甲酰（3?AB）对链脲佐菌素诱导的糖尿病（DM）大鼠皮层神经元的作用及机制。方法将60只大鼠随机分假手术对照组、DM组和DM+3?AB组，每组20只。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力，采用紫外分光光度计法测定皮层组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH?Px）和丙二醛（MDA）含量，采用Western blot法检测皮层PARP1蛋白表达水平，采用免疫组化法检测皮层caspase?3表达变化。结果 DM组大鼠学习记忆能力明显下降。DM组的SOD和GSH?Px含量显著低于对照组（P<0.01），MDA含量显著高于对照组（P<0.01），DM+3?AB组的SOD和GSH?Px含量明显高于DM组（P<0.05），MDA含量明显低于DM组（P<0.05）。DM组的PARP1表达显著增加（P<0.01），DM+3?AB组的PARP1表达显著降低（P<0.01）。DM组的caspase?3表达显著高于对照组（P<0.01），DM+3?AB组的caspase?3表达显著降低（P<0.01）。结论3?AB通过抑制PARP1，减轻DM导致的氧化应激，减少皮层神经元凋亡。