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趋化因子受体CCR1及CCR5在胃癌中的表达及临床意义
目的 探讨胃癌组织和癌旁正常组织中趋化因子受体CCR1和CCR5的表达及分布情况,并分析其与临床病理特征的相关性,同时研究上述两种因子在胃癌组织中的表达是否存在联系.方法 采用免疫组织化学和Western blot的实验研究方法,检测胃癌组织及其癌旁正常组织中CCR1及CCR5的表达水平,找到两者与各自临床病理特点的相关性,及其表达的相互关联性.结果 免疫组织化学结果显示,胃癌组织中CCR1的检出阳性率为52%,癌旁正常组织中CCR1的阳性率为25%,两种组织中CCR1的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中CCR5的阳性率为60%,癌旁正常组织中CCR5的阳性率为28%,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot结果显示,CCR1和CCR5在胃癌组织中的相对表达量分别为(2.134 ± 0.193)和(2.736 ± 0.125),但二者在癌旁正常组织中的相对表达量为(1.378 ± 0.047)和(0.971 ± 0.027),差异有统计学意义(P<0.05).CCR1的表达水平与患者的性别、年龄、分化程度及浸润深度均无关(P>0.05),但其与肿瘤分化程度及淋巴结的转移具有相关性(P<0.05);CCR5在组织中的表达与胃癌患者的性别、年龄及分化程度无相关性(P>0.05),与浸润深度及淋巴结转移呈正相关(P<0.05).CCR1与CCR5的表达成正相关(P<0.05).结论 组织中CCR1及CCR5的表达水平升高可能与胃癌的发生、发展具有关联性,通过对CCR1及CCR5的检测,可能对临床诊断胃癌具有一定的提示作用.
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CCR1在鼻咽癌中的表达及其临床意义
目的 研究趋化因子受体1 (CC chemokine receptor 1,CCR1)在鼻咽癌中的表达及其临床意义.方法 运用免疫组化染色法及荧光定量PCR方法检测71例鼻咽癌组织及71例癌旁组织中CCR1的表达水平,分析CCR1表达与鼻咽癌患者临床病理特征之间的关系.结果 免疫组化结果显示,CCR1在鼻咽癌组织中的阳性率为77.5％(55/71),在癌旁组织中的阳性率为21.1％ (15/71),鼻咽癌组织中CCR1表达水平显著高于癌旁组织(P＜0.05);荧光定量PCR检测结果显示,在鼻咽癌组织中CCR1 mRNA的表达水平显著高于癌旁组织,差异具有统计学意义(P＜0.05).CCR1的表达与鼻咽癌患者的年龄、性别无显著相关性,而与患者的临床分期、T分期、分化程度、淋巴结转移呈正相关关系.结论 CCR1在鼻咽癌的发生发展中可能起到癌基因的作用,CCR1表达水平可作为判断鼻咽癌临床预后的预测指标.
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高同型半胱氨酸血症对大鼠颈动脉损伤后MIP-1α及其受体CCR1表达的影响
目的 通过制备高同型半胱氨酸血症(HHcy)大鼠颈动脉球囊拉伤模型,观察血管组织形态,检测巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、CC型趋化因子受体1(CCR1)的表达,以探讨HHcy促内膜增生和平滑肌细胞增殖的机制.方法 健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为2组,高同型半胱氨酸组30只,采用80 mg·kg-1·d-1 L-蛋氨酸皮下注射制备HHcy的大鼠模型,对照组30只,同剂量生理盐水(80 mg·kg-1·d-1)皮下注射.4周后行颈动脉球囊拉伤,分别于术后7 d、14 d取材.酶法检测血浆Hcy浓度,苏木素-伊红(HE)染色、免疫组织化学染色检测血管损伤后内膜增生、平滑肌细胞增殖和MIP-1α、CCR1表达情况.结果 (1)HHcy组大鼠血浆Hcy显著高于对照组[(57.09±7.59)μmol/L vs.(5.28±0.20)μmol/L,P<0.01].(2)血管损伤组血管内膜较未损伤组明显增厚,HHcy组上述变化更为明显.(3)血管损伤组MIP-1α和CCR1阳性表达强于未损伤组,MIP-1α和CCR1蛋白在HHcy血管损伤组的阳性表达强于对照组.结论 (1)L-蛋氨酸皮下注射可成功制备HHcy大鼠模型.(2)HHcy诱导MIP-1α、CCR1表达增强,在血管损伤后促进内膜增生和平滑肌细胞增殖过程中发挥着重要作用.
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丹参酮ⅡA磺酸钠对神经病理性痛大鼠脊髓CX3CR1、 NF-κB及TNF-α mRNA表达的影响
目的 评价丹参酮ⅡA磺酸钠对神经病理性痛大鼠脊髓人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)、NF-κB及TN'F-α mRNA表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠54只,体重180 ～ 220 g,6～8周龄,采用随机数字表法,将大鼠分为3组:假手术组(S组)、神经病理性痛组(CCI组)和丹参酮ⅡA磺酸钠组(SSI组),每组18只.CCI组和SSI组采用坐骨神经慢性压迫损伤法制备大鼠神经病理性痛模型.SSI组于术毕即刻开始至处死前1d,腹腔注射丹参酮ⅡA磺酸钠注射液25 mg/kg,1次/d,S组和CCI组腹腔注射等容量(5 ml/kg)生理盐水.于术前1d、术后3、7和14 d(T0-3时测定机械痛阈和热痛阈;于T1-3时测定痛阈后处死大鼠,取L4-6脊髓组织,采用荧光定量PCR法测定脊髓CX3CR1、NF-κB及TNF-α的mRNA表达.结果 与S组比较,CCI组和SSI组术后T1-3时机械痛阈和热痛阈降低,脊髓CX3CR1、NF-κB及TNF-α的mRNA表达上调(P＜0.05);与CCI组比较,SSI组术后T1-3时机械痛阈和热痛阈升高,脊髓CX3CR1、NF-κB及TNF-α的mRNA表达下调(P＜0.05).与L时比较,CCI组、SSI组于T2和T3时CX3CR1表达下调,NF-κB和TNF-α的mRNA表达上调(P＜0.05);与T2时比较,CCI组、SSI组T3时CX3CR1、NF-κB和TNF-α的mRNA表达下调(P＜0.05).结论 丹参酮ⅡA磺酸钠减轻大鼠神经病理性痛的机制与抑制NF-κB的激活,下调CX3CR1及TNF-α mRNA的表达有关.
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骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞可异常影响骨髓瘤细胞株的趋化功能
背景：多发性骨髓瘤患者骨髓微环境中间充质干细胞有多种异常，但异常的间充质干细胞对骨髓瘤细胞的趋化功能影响目前仍不清楚。
目的：比较正常人与多发性骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞在体外对骨髓瘤细胞株趋化迁移的影响。
方法：体外培养的正常人骨髓间充质干细胞或初诊骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞，在有或无硼替佐米条件下，分别与骨髓瘤细胞株U266细胞直接共培养，比较U266细胞的Transwel 迁移率、定量PCR检测mRNA的表达水平。同时还检测 U266细胞对正常人骨髓间充质干细胞或骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞培养液上清的Transwel 迁移情况。
结果与结论：正常人骨髓间充质干细胞或骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞与 U266细胞直接共培养后，两组骨髓瘤细胞的趋化特性有区别，表现为骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞组的U266细胞基础Transwel 迁移率高、CCR1的表达水平高(P均<0.05)。硼替佐米处理U266细胞后并不能消除两组的的区别。然而，U266细胞对正常人骨髓间充质干细胞或骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞培养液上清的Transwel 迁移并没有明显区别。结果提示骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞本身存在一些内在缺陷，在与骨髓瘤细胞株 U266相互作用过程中，可以影响 U266的体外趋化功能，并且这一影响主要是通过骨髓间充质干细胞与骨髓瘤细胞直接相互作用引起的。 -
受激活调节正常T细胞表达和分泌因子及其受体CCR1、CCR5在大鼠附睾的表达与定位
目的:观察受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)与其受体CCR1、CCR5在大鼠附睾中的表达和定位.方法:采用免疫组织化学法检测成年大鼠附睾上皮RANTES及其受体的细胞定位,免疫荧光双标染色分别显示RANTES与CCR1、CCR5的细胞共定位情况.RT-PCR检测RANTES及其受体mRNA表达水平,免疫印迹检测RANTES及其受体的蛋白量.结果:RANTES与其受体CCR1、CCR5在大鼠附睾各段呈特异性表达.免疫印迹在大鼠附睾各段检测到RANTES及其受体CCR1、CCR5特异性蛋白条带.RANTES与其受体CCR1、CCR5在大鼠附睾上皮主要表达于基细胞.双重免疫荧光显示RANTES与CCR1、CCR5在附睾管基细胞共存.结论:RANTES可能通过自分泌或(和)旁分泌方式在大鼠附睾基细胞功能活动方面起重要作用.
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非小细胞肺癌组织MIP-1表达及其与树突状细胞浸润的关系
目的 探讨非小细胞肺癌组织MIP-1表达及其与树突状细胞浸润的关系.方法 选择74例非小细胞肺癌组织标本,采用荧光原位杂交法检测MIP-1的表达,免疫组织化学检测趋化因子受体CCR1、CCR7的表达.结果 肺癌细胞胞质及胞膜表达MIP-1,同时检测到肺癌组织中有CCR1和CCR7阳性树突状细胞的浸润.MIP-1、CCR1和CCR7阳性树突状细胞的表达和肺癌分期相关.肺癌组织中MIP-1阳性细胞表达率与CCR1阳性树突状细胞数量呈正相关,而与CCR7阳性树突状细胞数量呈负相关.结论 非小细胞肺癌组织MIP-1表达与肿瘤浸润树突状细胞表面分子CCR1、CCR7的表达关系密切.
关键词： 非小细胞肺癌 巨噬细胞炎症蛋白-1 CCR1 CCR7 -
细胞因子CCL7通过受体CCR1增强干细胞归巢促进尿失禁恢复的研究
目的:观察尿道局部注射细胞因子chemokine(C-C motif) ligand 7(CCL7)能否提高损伤后尿失禁模型中间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)归巢和CCR-1过表达的MSC归巢,探索CCL7对尿失禁的功能恢复.方法:尾静脉注射荧光转染MSC至尿失禁大鼠模型,1周后在4组[假尿失禁组(Sham SUI)、尿失禁合并MSC治疗组(SUI+MSC)、尿失禁合并CCR1增强表达MSC治疗组(SUI+ MSC-CCRl)、尿失禁合并MSC-CCR1加CCL7组(SUI+ MSC-CCR1+CCL7)]中观察大鼠尿道组织中MSC归巢聚集情况.观察各组治疗后控尿恢复情况[假产伤假治疗组(sham injury+sham CCL7);产伤加假治疗组(injury+ sham CCL7);产伤加治疗组(injury +CCL7)].结果:SUI+ MSC-CCR1+ CCL7组在产伤后1天和1周后MSC局部归巢与存活情况显著增加(P＜0.05),并显著高于sham SUI组、SUI+ MSC组和SUI+ MSC-CCR1组,且与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).1周后CCL7治疗后恢复情况明显优于尿失禁产伤后假治疗组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:CCL7与过表达CCR1可以促进MSC在损伤局部归巢与存活,CCL7对促进损伤后尿失禁模型的尿控水平恢复有显著意义.
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质粒介导外源性microRNA下调CCR1降低人肝癌细胞侵袭性
目的 观察趋化因子受体CCR1在高转移潜能人肝癌细胞HCCLM3侵袭中的作用.方法 设计并合成3对靶向CCR1 mRNA的寡核苷酸片段,将其连接pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体构建表达microRNA(miRNA)真核载体S1、S2、S3,脂质体转染法将重组质粒转入HCCLM3细胞.实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)分析CCR1 mRNA抑制效率;Western印迹测定CCR1蛋白的表达量改变;MTT法检测HCCLM3增殖的影响;Matrigel侵袭实验检测HCCLM3细胞侵袭力的改变.结果 转染48 h后,S3组CCR1 mRNA较空转染组(Mock)和非特异序列组(Neg)减少80%以上,且明显少于其他组(P＜0.01);72 h后S3组CCR1蛋白表达明显少于其他组;转染后,HCCLM3细胞的增殖改变差异无统计学意义.Matrigel侵袭实验结果示转染S3后HCCLM3细胞穿过人工基底膜的数量减少80%,显著低于其他组(P＜0.01).结论 人肝癌细胞HCCLM3的CCR1表达可被质粒导人的外源性miRNA有效抑制,进而降低HCCLM3细胞侵袭性,但对细胞增殖无明显影响.
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CCR1基因过表达对骨髓间充质干细胞靶向肝癌迁移能力的影响
目的 研究过表达人的CCR1 (hCCR1)受体对人的骨髓间充质干细胞(hMSCs)靶向肝癌迁移能力的影响,探讨MSCs作为细胞载体在肝癌基因治疗中的应用前景. 方法 构建慢病毒表达质粒pLV-hC CR1,经293T细胞包装,收集病毒上清液,感染hMSCs.收集各组细胞,通过RT-PCR、Western blot分析各组细胞hCCR1 mRNA及蛋白表达情况,并通过Transwell迁移实验研究hCCR1过表达对hMSCs体外迁移能力的影响.建立肝癌裸鼠原位模型,将荷瘤裸鼠随机分为2组,每组8只;通过尾静脉注射将hMSCs输入到荷瘤裸鼠体内,研究hCCR1过表达对hMSCs体内靶向肝癌迁移能力的影响.两组数据之间的比较采用独立样本t检验,多组间均数比较采用单因素方差分析. 结果 限制性内切酶酶切及测序表明,成功构建hCCR1慢病毒表达载体.以293T包装的重组慢病毒能够高效感染hMSCs,hMSCs感染重组慢病毒后可高效表达hCCR1.Transwell体外迁移实验表明,hCCR1基因转染的hMSCs向肝癌细胞条件培养基的趋向迁移能力明显增强[(134.8±15.7)/LPF对比(83.5±10.9) /LPF,t=10.40,P＜0.01].体内迁移实验显示,hMSCs经尾静脉注射后14 d,到达小鼠肝癌部位的hMSCs-hCCR1显著多于hMSCs-RFP [(86.7±14.1)/HPF对比(54.5±9.6)/HPF,t=-7.32,P＜0.01]. 结论 CCR1基因过表达可显著增强骨髓MSCs靶向肝癌迁移的能力,提示开发迁移能力更强的细胞载体及MSCs的临床应用具有重要的意义.
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趋化因子LKN-1及其受体CCR1和CCR3在妊娠期高血压疾病中的表达
目的:通过测定妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中趋化因子白细胞诱素-1(leukotactin-1,LKN-1)及其受体CCR1和CCR3的表达,以探讨其在妊娠期高血压疾病发病中的作用.方法:收集32例妊娠期高血压疾病患者(研究组)和32例正常足月妊娠孕妇(正常对照组)的胎盘组织;采用Western蛋白印记法进行检测LKN-1及其受体CCR1和CCR3在胎盘组织中的表达;并结合免疫组化法对LKN-1、CCR1和CCR3在胎盘中的表达进行定位.结果:①Western蛋白印记法:在研究组和正常对照组胎盘组织中LKN-1表达均为阴性;研究组胎盘组织中无论是CCR1还是CCR3的水平均明显低于正常对照组(CCR1:0.66±0.06 vs 0.88±0.03,P<0.01:CCR3:0.17±0.01 vs 0.27 ±0.01,P<0.01);②免疫组化法:两组孕妇胎盘组织中LKN-1表达均为阴性;两组孕妇胎盘血管内皮细胞和基质细胞内均有CCR1阳性表达,绒毛滋养细胞中CCR1弱阳性表达;两组孕妇胎盘血管内皮细胞和绒毛滋养细胞内均有CCR3阳性表达.结论:LKN-1在妊娠期高血压疾病患者和正常足月妊娠的胎盘组织中均无阳性表达;但其受体CCR1与CCR3蛋白在研究组胎盘组织中表达下调,可能与人妊娠期高血压疾病的发生、发展有关.
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TAO眼眶成纤维细胞上CCR1的表达
目的 研究趋化因子受体CCR1在甲状腺相关眼病(thyroid associated ophthalmopathy,TAO)的眼眶成纤维细胞(orbital fibroblasts,OFs)上的表达,探讨其在发病机制中的作用.方法 采用免疫组织化学SP法检测25例TAO患者和10例正常对照的眼眶组织中OFs上CCR1的表达情况,并将CCR1表达水平与TAO患者的临床活动性评分(clinical activity scores,GAS)进行相关性分析.结果 TAO患者的OFs明显表达CCR1,CCR1的表达阳性率为72％,正常人的OFs表达CCR1不明显或呈弱阳性,差异具有统计学意义(P＜0.05).TAO患者OFs上CCR1的表达与GAS无明显相关关系(r=0.048,P＞0.05).结论 趋化因子受体CCR1可表达于TAO的OFs上,其在TAO的发病机制中可能发挥重要作用.
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趋化因子受体CCR1在人大肠癌组织中的表达及其与淋巴结转移的相关性
目的: 研究趋化因子受体CCR1在大肠癌中的表达,探讨其与淋巴转移的关系.方法: 采用SP免疫组织化学方法检测98例临床新鲜标本,其中包括15例癌旁正常大肠黏膜组织及83例大肠癌组织中CCR1的表达情况,计算大肠癌组织中的微淋巴管密度(LMVD)与微血管密度(MVD),并进行CCR1表达与大肠癌淋巴结转移的相关性分析.结果: CCR1在浸润程度深、分化程度低、有淋巴结转移及Dukes分期较晚的大肠癌组织中的阳性表达率高于浸润程度浅(P<0.05)、分化程度高(P<0.05)、无淋巴结转移(P<0.01)及Dukes分期较早(P<0.05)的大肠癌组织.CCR1表达阳性的大肠癌组织LMVD高于CCR1表达阴性的大肠癌组织LMVD(P<0.01).而CCR1表达阳性的大肠癌组织与CCR1表达阴性的大肠癌组织中,MVD无统计学差异.结论: 趋化因子受体CCR1在大肠癌组织中表达增高,并可能与大肠癌的淋巴结转移增加有关,具有一定的诊断价值.
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受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)受体CCR1和CCR5在人附睾中的表达
目的:探讨受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)受体CCR1、CCR5在成人附睾中的表达和定位.方法:采用RT-PCR检测CCR1和CCR5 mRNA在成人附睾中的表达,免疫组织化学法观察CCR1和CCR5在人附睾中的细胞定位,免疫荧光双标染色分别检测RANTES与CCR1及CCR5的共定位情况.结果:在人附睾组织中获得了RANTES受体CCR1、CCR5的cDNA片段,免疫组织化学显示CCR1表达于输出小管的纤毛细胞,附睾管的顶细胞和基细胞;CCR5表达于附睾输出小管的纤毛细胞以及全部附睾管上皮细胞.免疫荧光双标显示RANTES分别与CCR1和CCR5的阳性信号在输出小管的纤毛细胞、附睾管的顶细胞和基细胞共存.结论:CCR1和CCR5在附睾上皮有表达,且与RANTES共定位,推测RANTES可能通过其受体在附睾中起作用,从而为精子成熟和储存提供适宜的微环境.
