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熊胆粉对H2O2所致的PC12细胞凋亡的保护作用及机制
目的:探讨熊胆粉对H2O2所致的PC12细胞凋亡的保护作用及机制.方法:PC12细胞常规培养后,首先通过MTT检测细胞存活率的方法进行H2O2损伤模型的摸索和熊胆粉药物浓度的筛选;确定造PC12细胞损伤的H2O2浓度和熊胆粉的安全作用浓度后,将处于对数生长期的PC12细胞分为对照组、模型组和不同剂量熊胆粉组.用200μmol/L H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,MTT法检测PC12细胞存活率、Hoechst33342荧光核染色观察细胞凋亡形态学改变、流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率、Western blot方法检测与细胞凋亡线粒体途径密切相关的蛋白CytC和Caspase-3表达的变化.结果:200μ mol/L H2O2诱导PC12细胞损伤明显,浓度小于等于100μmol/L的熊胆粉浓度对正常PC12细胞的存活率没有抑制作用.与模型组比较,熊胆粉组PC12细胞存活率显著提高(P＜0.01),凋亡率显著下降(P＜0.01),Cytc和Caspase-3的表达显著减少(P＜0.01),其作用与剂量有关.结论:熊胆粉可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞凋亡线粒体途径中凋亡相关蛋白CytC和Caspase-3的表达有关.
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消癌解毒方含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞端粒酶及凋亡相关基因mRNA表达的影响
目的:探讨消癌解毒方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721细胞端粒酶及凋亡相关基因mRNA表达的影响.方法:消癌解毒方含药血清作用于人肝癌SMMC-7721细胞,ELISA试剂盒检测各组端粒酶浓度,采用实时荧光定量PCR方法检测药物作用前后各组SMMC-7721细胞Bax、Bcl-2、CytC、Caspase-3 mRNA表达水平.结果:消癌解毒方含药血清作用于人肝癌SMMC-7721细胞可以降低其端粒酶浓度,且呈剂量依赖性;可使Bcl-2 mRNA表达水平下调,使Bax、CytC、Caspase-3 mRNA表达水平上调,下调Bcl-2/Bax mRNA比例,且中、高剂量组与对照组比较效果明显(P＜0.01,P＜0.05).结论:消癌解毒方含药血清可能通过抑制端粒酶活性,调控凋亡相关基因mRNA的表达,抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长,促使其凋亡,在肝癌治疗中发挥疗效.
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温肺降浊方对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡的影响
目的:探讨温肺降浊方对血管性痴呆(VD)大鼠海马Cytc、Bax蛋白表达的影响及其神经保护作用.方法:SD大鼠120只,随机分为假手术组、模型组、温肺降浊方组(中药组)、盐酸多奈哌齐组(西药组),每组30只.采用2-VO法制作VD大鼠模型,Morris水迷宫测试大鼠学习、记忆能力,流式细胞术检测海马细胞的凋亡情况,免疫组化法检测Cytc、Bax蛋白的含量.结果:①与假手术组比较,模型组大鼠学习、记忆成绩下降;与模型组比较,中药组与西药组大鼠的学习与记忆成绩均有显著提高(P＜0.05);②与假手术组比较,模型组细胞凋亡发生率显著增加(P＜0.05);与模型组比较,中药组及西药组细胞凋亡率均显著下降(P＜0.05);③与模型组比较,中药组与西药组Cytc、Bax蛋白表达均显著下降(P＜0.05),且中药组与西药组比较无统计学意义.结论:温肺降浊方能明显改善VD大鼠学习记忆能力,其作用机制可能与其通过抑制Cytc、Bax蛋白的表达,从而抑制海马神经元的凋亡有关.
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KISS-1基因表达物对骨肉瘤细胞凋亡和自噬调控机制的研究
目的 该研究就KISS-1基因表达物在骨肉瘤细胞中的凋亡和自噬作用进行比较分析,探讨KISS-1基因表达对骨肉瘤细胞凋亡和自噬的调控机制.方法 于2016年4月—2017年1月在该院细胞实验室分别向K7M2骨肉瘤细胞培养中分别加入KISS1蛋白Kp(Kisspeptin)或抗Kp蛋白,将其对应分为Kp组和抗Kp蛋白组,并分别与普通培养的K7M2细胞形成的控制组进行比较,待细胞培养24,48、72、96 h后,每组各时间点选取6孔对数生长期的细胞纳入实验观察,MTT观察细胞增殖情况,并采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,应用RT-PCR检测细胞培养72 h后凋亡标记物(P53、CytC)及自噬标记物(P62、Beclin1)的mRNA表达水平.结果 细胞培养96 h后,对照组细胞增殖率均数百分比由(0.660±0.075)％变为(1.330±0.214)％,Anti-Kp组细胞增殖率均数百分比由(0.677±0.093)％变为(1.465±0.194)％,而Kp组细胞增殖率均数百分比由(0.530±0.083)％变为(0.328±0.044)％,凋亡率均数百分比由(24.53±3.65)％变为(39.75±8.32)％.Anti-Kp组增殖率显著高于对照组(P<0.05).细胞接种培养72 h后,对照组的P53和CytC的mRNA表达水平均数为(0.213±0.045)和(0.220±0.046),Kp组P53和CytC的mRNA表达量均数为(0.393±0.107)和(0.509±0.145).同时,P62和Beclin1在控制组的mRNA表达量均数为(0.169±0.055)和(0.120±0.043),而在Kp组P62和Beclin1mRNA表达量均数为(0.426±0.120)和(0.357±0.103).P62和Beclin1的mRNA表达水平在Kp组高,Anti-Kp组低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 KISS-1基因表达物具有促进细胞凋亡和自噬来控制骨肉瘤细胞增殖的作用.
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高氧暴露下早产鼠肺组织Nrf2和Cytc的表达及意义
目的 观察高氧暴露下早产新生大鼠肺组织中的转录因子NF-E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)和细胞色素C(Cytochrome C,Cytc)的动态表达,探讨Nrf2和Cytc的表达变化在高氧肺损伤中的作用.方法 早产新生SD大鼠生后1d随机分为两组:空气组与高氧组.空气组早产鼠置于同一室常压空气中;高氧组早产鼠持续暴露于常压氧舱中,氧质量浓度＞85％.两组分别于空气或高浓度氧暴露后1、4、7、10、14 d提取肺组织标本.采用石蜡包埋切片行苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)观察肺组织的病理学变化.采取半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)测定Nrf2和Cytc mRNA水平的动态表达.结果 ①与空气组相比较,高氧暴露4、7d早产鼠肺组织中Nrf2 mRNA表达显著增强,10 d出现下降趋势,14 d明显减弱(P＜0.05).②与空气组相比,高氧暴露1、4d早产鼠肺组织中CytcmRNA均显著增强(P＜0.05),7d始出现下降趋势,但7d Cytc mRNA的表达仍稍增强、10 d时减弱,7、10 d时两者相比差异无统计学意义(P＞0.05),14 d显著减弱(P＜0.05).结论 氧化爆发可诱导肺组织中Nrf2与Cytc的异常表达,高氧暴露可能通过上调Nrf2活性,提高机体抗氧化,在减轻高氧肺损伤过程中发挥一定抗氧化作用;Cytc在高氧肺损伤细胞凋亡发生发展中起重要作用.
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肾衰保肾胶囊对5/6肾切除大鼠CytC和Fas表达的影响
目的 观察肾衰保肾胶囊对5/6肾切除大鼠CytC蛋白和Fas蛋白表达的影响.方法 采用5/6肾切除致慢性肾衰竭大鼠模型,将实验分3组:假手术组、模型组(5/6肾切除组)、治疗组[5/6肾切除+肾衰保肾胶囊(0.648 g·kg-1·d-1)].观察实验大鼠治疗前后的一般状态、肾组织的病理改变;采用免疫组织化学法分别检测肾组织中的CytC蛋白和Fas蛋白表达情况.结果 肾衰保肾胶囊能够明显改善大鼠的症状和体征,降低实验大鼠肾组织中的CytC蛋白和Fas蛋白表达,与对照组比较差异有统计学意义.结论 肾衰保肾胶囊对残肾组织的功能和形态有保护作用,能通过Fas、CytC两条凋亡途径减少肾实质细胞凋亡,延缓慢性肾衰竭的进展.
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槲皮苷对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用
目的 探讨槲皮苷对H2O2所致的PC12细胞凋亡的保护作用及机制.方法 PC12细胞培养后,MTT检测细胞存活率的方法进行H2O2损伤模型的摸索和槲皮苷药物浓度的筛选,将PC12细胞分为对照组、模型组和不同剂量槲皮苷组.用400 μmol H2O2刺激PC12神经元细胞使其发生凋亡复制阿尔茨海默病(AD)模型,MTT法检测PC12细胞存活率、硫辛酰胺脱氢酶催化的INT显色反应检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量和DAPI荧光核染色观察细胞凋亡形态学改变,Western blot方法检测Cytc和caspase-3表达的变化.结果 400 μmol H2O2诱导PC12细胞损伤明显,与模型组比较,槲皮苷组PC12细胞存活率显著提高(P＜0.01),凋亡率显著下降(P＜0.01),LDH释放量和凋亡相关蛋白Cytc和caspase-3的表达显著减少(P＜0.01).结论 槲皮苷可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与抑制细胞凋亡线粒体途径中凋亡相关蛋白Cytc和caspase-3的表达有关.
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实验性糖尿病大鼠脑细胞凋亡的探讨
目的:研究糖尿病对脑细胞凋亡的影响.方法:采用四氧嘧啶制造糖尿病大鼠模型,差速离心法提取脑线粒体并分析细胞色素C(CytC)含量.用原位细胞凋亡TUNEL法观察糖尿病大鼠脑细胞凋亡情况.结果:与正常对照组相比,糖尿病大鼠脑线粒体CytC含量明显升高(P＜0.05)脑神经细胞凋亡数显著升高(P＜0.05).结论:糖尿病对大鼠脑细胞凋亡有显著影响,可能由CytC触发引起.
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灯盏花素对缺氧/复氧诱导培养乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用
目的:探讨灯盏花素对缺氧/复氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其作用机制.方法:利用原代培养的SD乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血再灌汴(ML/R)模型,分正常对照组,模型组和灯盏花素3个剂量(25、50、100 mg/L)预处理组.用MTT法测定细胞存活率,用AnnexinV-FITC/PI舣标记法测定细胞凋亡率;用免疫组化法检测Bcl-2蛋白的表达;用Western-blot法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3的表达及细胞色素C(CytC)的释放.结果:缺氧复氧损伤后,与正常对照组比较,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,灯盏花素3个剂量预处理后,细胞存活率增加,细胞凋亡率降低,且显示剂量依赖性.另外,缺氧复氧损伤,可使心肌细胞Bcl-2蛋白表达减少,CytC释放增加,Caspase-3活性增强,灯盏花素预处理后,Bci-2表达增强,CytC释放减少,caspase-3活性降低.结论:灯盏花素可抑制模拟缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡,其抗细胞凋亡作用可能与其增加Bcl-2蛋白表达,减少CytC的释放,抑制Caspase-3活性有关.
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亚低温对缺血再灌注海马CA1区细胞调亡内途径中相关蛋白的影响
目的研究亚低温对全脑缺血再灌注的保护作用及其对细胞凋亡内途径中相关蛋白表达的影响.方法采用蒙古沙土鼠全脑缺血5 min再灌注模型,在3 h、6 h、1天、3天和7天5个不同的时间点动态观察海马CA1区组织结构、TUNEL阳性细胞以及Bcl-2、Bax、CytC、Caspase-3在常温组和亚低温组以及假手术组的表达和变化.结果同常温组相比,亚低温组CA1区各时间点的TUNEL标记阳性细胞数显著减少(P<0.01),且其高峰出现延迟;Bax在3 h、6 h、1天时,CA1区表达明显减少(P<0.01);CytC的动态变化与Bax相一致;Bcl-2在3 h、6 h两点无明显变化,但在1天、3天和7天点显著升高(P<0.01);Caspase-3的动态变化与Bcl-2相似,即早期无变化,后期表达的免疫强度增加(P<0.05).结论亚低温可减少细胞凋亡,其机制可能与降低促凋亡蛋白Bax表达和减少线粒体释放蛋白CytC有关;也可能与抗凋亡蛋白Bcl-2表达的上调有关,而和凋亡蛋白酶Caspase-3的活性可能无关,但需进一步研究证实.
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Survivin shRNA-APC双基因对结肠癌线粒体凋亡通路相关因子表达的影响
目的 RNA干扰技术对线粒体凋亡通路的影响研究甚少.文中旨在探讨Survivin shRNA-APC双基因对结肠癌线粒体凋亡通路相关因子Survivin、细胞色素C(Cytc)、第二线粒体来源的Caspase激活剂(Smac)、半胱氨酸蛋白酶9( Caspase-9)表达的影响及对结肠癌移植瘤细胞凋亡的影响. 方法 实验用30只裸鼠用随机数字表法分为双基因组、Survivin shRNA组、APC组、空载组和空白组5组,每组6只,将构建好的Survivin shRNA-APC双基因结肠癌细胞稳转株、Survivin shRNA结肠癌细胞稳转株、APC结肠癌细胞稳转株、空载结肠癌细胞稳转株及HT-29结肠癌细胞分别皮下注射至裸鼠左前腋窝中后部,建立裸鼠结肠癌移植瘤模型;检测裸鼠移植瘤体积、瘤重计算生长抑制率;Real time PCR检测移植瘤组织Survivin、Cytc、Smac、Caspase9 mRNA的表达;免疫组化检测移植瘤组织Survivin、Cytc、Smac、Caspase9蛋白的表达;TUNEL检测各组移植瘤组织细胞凋亡情况. 结果 成功构建裸鼠结肠癌移植瘤模型. APC组、Survivin shRNA组、双基因组与空白组和空载组相比,移植瘤组织平均体积、平均瘤重均明显减少(P<0.05),体积抑制率、瘤重抑制率明显升高(P<0.05);与 Survivin shRNA组、APC 组相比,双基因组移植瘤组织平均体积、平均质量均明显减少(P<0.05),体积抑制率、瘤重抑制率明显升高(P<0.05). APC 组、Survivin shRNA 组、双基因组与空白组和空载组相比,移植瘤组织Survivin mRNA及蛋白相对表达量明显降低(P<0.05),移植瘤组织Cytc、Smac、Caspase-9 mRNA及蛋白相对表达量明显升高(P<0.05);与Survivin shRNA组、APC 组相比,双基因组移植瘤组织Survivin mRNA及蛋白相对表达量明显降低(P<0.05),Cytc、Smac、Caspase9 mRNA及蛋白相对表达量明显升高(P<0.05).与空白组和空载组移植瘤组织细胞凋亡指数[(9.87±0.30)%、(10.05±0.42)%]相比,APC 组、Survivin shRNA 组、双基因组[(30.16±1.72)%、(33.61±2.02)%、(56.78±3.04)%]明显升高(P<0.05),其中双基因组移植瘤组织细胞凋亡指数明显高于APC 组、Survivin shRNA 组(P<0.05). 结论 Survivin shRNA-APC双基因可能通过下调线粒体凋亡通路凋亡抑制因子Survivin及上调促凋亡因子Cytc、Smac、Caspase9的表达诱导结肠癌移植瘤组织细胞凋亡,抑制结肠癌移植瘤生长,并且其调节凋亡因子、诱导细胞凋亡及抑制移植瘤生长的能力较单基因更为明显.
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泊洛沙姆188对体外神经元损伤后线粒体损害的作用研究
目的 探讨泊洛沙姆188(Poloxamer 188,P188)对体外神经元损伤引起的细胞死亡及线粒体损害可能发挥的作用机制.方法 采用小鼠的原代神经元培养并建立体外神经元离心损伤模型(VCID),在损伤后10 min加入P188,观察神经元的形态变化,MTT法与LDH法检测P188对体外神经元损伤引起细胞死亡的影响.分离线粒体亚成分,采用免疫印记法检测损伤后6 h与24 h线粒体内与胞质中CytC的表达情况,并检测P188对体外神经元损伤后caspase-3表达的影响.结果 显微镜观察到:与正常组相比,损伤组在外伤后24 h出现了一些结构与形态上的改变.P188处理过的神经元在损伤后24 h,在形态特征上发生明显的恢复,与对照组的形态特征类似.MTT法与乳酸脱氢酶(LDH)法结果显示:P188能明显减轻损伤引起的神经元死亡与乳酸脱氢酶漏出率.Western blot结果显示:在损伤后6 h与24 h,P188处理后均能明显抑制损伤后线粒体成分中CytC蛋白水平的下调(P<0.05),及胞质成分中CytC蛋白水平的上调(P<0.05),提示P188能明显抑制外伤引起CytC蛋白的释放.同时,P188也能抑制外伤引起的激活型caspase-3 (p20)的上调 (P<0.05).结论 P188对体外神经元损伤引起的细胞死亡及线粒体损害具有明显的神经保护作用,这种保护作用可能与抑制线粒体膜完整性破坏和抑制凋亡的线粒体途径有关.
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从线粒体相关凋亡蛋白表达探讨温肺降浊方对VD大鼠学习记忆能力的影响
目的:探讨温肺降浊方对血管性痴呆(VD)大鼠海马组织Cytc、Bax蛋白表达变化及大鼠学习记忆能力的影响.方法:雄性SPF级SD大鼠120只,随机分为假手术组、模型组、中药组、西药组,每组各30只.采用双侧颈总动脉永久性结扎法制作VD大鼠模型,中药组给予温肺降浊方灌胃,西药组予盐酸多奈哌齐灌胃,其余两组则予以等量生理盐水灌胃.采用Morris水迷宫测试大鼠学习、记忆能力,RT-PCR检测大鼠海马Cytc、Bax mRNA含量,Western blot检测大鼠海马Cytc、Bax蛋白表达水平.结果:①Morris水迷宫学习记忆能力测试结果证实与假手术组比较,模型组大鼠学习成绩与记忆成绩下降,各用药组大鼠的学习成绩与记忆成绩均有显著提高(P<0.05);②与模型组比较,中药组及西药组大鼠海马Cytc、Bax mRNA及蛋白表达量含量显著下降 (P<0.05),且药物组之间比较无统计学意义(P>0.05).结论:温肺降浊方可明显改善VD大鼠学习记忆能力,其机制可能与其抑制海马Cytc及Bax表达有关.
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依达拉奉预处理对大鼠全脑缺血/再灌注损伤的保护作用
目的 研究依达拉奉预处理对大鼠全脑缺血/再灌注损伤(I/R)大脑的保护作用,探讨其脑保护作用的可能机制.方法 采用改良Pulsinelli法制作大鼠全脑I/R模型.依达拉奉(3mg·kg-1)腹腔内注射法进行预处理.35只健康雄性SD大鼠随机分为7组,每组5只:对照组(C)、缺血再灌注损伤组(I)、依达拉奉预处理组(E),根据再灌注时间(1d、3 d、5d)I、E组依次分3个亚组.TUNEL法检测大鼠脑组织海马CA1区神经细胞凋亡数、免疫组织化学pv6001染色法检测Bcl-2、Bax及CytC(cytochrome c)蛋白表达的变化.结果 与相应I各亚组比较,E各亚组海马CA1区神经细胞凋亡数目显著减少;Bax、CytC蛋白的表达显著减少;Bcl-2蛋白的表达显著增加(P＜0.05).结论 依达拉奉预处理可能通过调节凋亡相关调控基因Bcl-2、Bax、CytC 的表达,明显减轻大鼠I/R的神经细胞凋亡,从而产生脑保护作用.
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亚硒酸钠诱导肺癌A549细胞凋亡的作用及对凋亡相关蛋白Cytc影响
目的 探讨凋亡相关蛋白Cytc是否与亚硒酸钠诱导肺癌细胞凋亡有关.方法 A549人肺癌细胞株按照亚硒酸钠浓度(0μmol/L,0.5μmol/L,2.5μmol/L,5.0μmol/L,8.0μmol/L)由低到高分为5组,加相应浓度的亚硒酸钠培养,噻唑蓝(MTT)法检测亚硒酸钠对A549细胞的抑制率;凋亡相关蛋白Cytc在A549细胞分布通过免疫细胞化学染色法检测,免疫印迹法检测亚硒酸钠对Cytc蛋白含量的影响,TUNEL检查亚硒酸钠对肺癌A549凋亡的影响.结果 MTT法结果显示:人肺癌A549细胞株,随着亚硒酸钠浓度的增加,其吸光度值逐渐降低,仅呈现浓度依懒性(P<0.01);亚硒酸钠对肺癌A549细胞株的生长抑制率2.5μmol/L和5μmol/L亚硒酸钠组呈现浓度和时间依赖性(P<0.05),0.5μmol/L和8μmol/L亚硒酸钠组仅呈现浓度依赖性(P<0.05).免疫组织化学和Western blot印迹结果均显示Cytc蛋白在肺癌A549细胞中的表达随着亚硒酸钠浓度的增高逐渐升高(P<0.05).TUNEL染色显示:亚硒酸钠诱导肺癌A549凋亡呈现浓度依赖性(P<0.05).结论 随着亚硒酸钠浓度升高肺癌A549细胞的抑制率升高,凋亡相关蛋白Cytc的表达也升高,故亚硒酸钠浓度诱导肺癌A549细胞凋亡与Cytc有关.
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ALA-PDT对人食管癌Eca-109细胞相关凋亡蛋白表达的影响
目的 探讨5-氨基乙酰丙酸—光动力疗法(ALA-PDT)对人食管癌Eca-109细胞相关凋亡蛋白表达的影响.方法 将人食管癌Eca-109细胞经过培养、处理后分为两组,ALA-PDT组(PDT组)细胞用ALA孵育6h后在光动力治疗系统下进行光照,光照后24h提取细胞总蛋白和胞质蛋白；对照组细胞不进行光动力治疗.采用Western blot法检测两组细胞中的Bcl-2、Cytc蛋白表达.结果 ALA-PDT作用于人食管癌Eca-109细胞后,与对照组比较,PDT组胞质中的Bcl-2蛋白表达量明显降低,Cytc蛋白表达量明显升高(P均＜0.05).结论 线粒体凋亡通路可能是ALA-PDT诱导Eca-109细胞凋亡的主要通路,Bcl-2可能为该凋亡通路的靶基因之一,释放Cytc进而诱导细胞凋亡可能为ALA-PDT诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的线粒体通路终末效应之一.
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木丹颗粒对糖尿病大鼠背根神经节蛋白表达及血清p38MAPK的影响
目的:观察木丹颗粒对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠背根神经节中磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)和CytC的蛋白表达及血清中p38MAPK的影响.方法:将8只正常的大鼠分入正常对照组,将造模成功的36只大鼠随机平均的分入模型组、木丹颗粒组、甲钴胺片组,每组13只.采用STZ诱导复制糖尿病模型,正常对照组和模型组灌胃生理盐水,甲钴胺片组和木丹颗粒组分别灌胃甲钴胺片和木丹颗粒,对比各组大鼠血清中的p38 MAPK水平,对比各组大鼠背根神经节中p-p38MAPK和CytC的蛋白表达情况.结果:模型组大鼠血清中的p38 MAPK水平显著性的高于正常对照组,背根神经节中p-p38MAPK灰度值和CytC灰度值显著性的低于正常对照组(P＜0.05);木丹颗粒组大鼠血清中的p38MAPK水平显著性的低于模型组,背根神经节中p-p38 MAPK灰度值和CytC灰度值显著性的高于模型组(P＜0.05).结论:木丹颗粒保护糖尿病大鼠背根神经节的作用机制可能为抑制线粒体中CytCd蛋白释放、降低血清中p38MAPK水平、抑制背根神经节中p38 MAPK磷酸化.
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长托宁对急性全脑缺血再灌注损伤大鼠细胞色素和Caspase-3表达的影响
目的:从细胞凋亡及其信号转导通路角度,探讨长托宁对全脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及部分机制.方法:雄性健康SD大鼠96只,随机分成3组:假手术组(S组,n=32)、缺血再灌注组(IR组,n=32)、长托宁干预组(P组,n=32),3组按再灌注时间再分为4个亚组,即缺血10 min后分别再灌注3,12,24,48 h,每个亚组动物均为8只.采用四血管闭塞法制造大鼠全脑缺血模型,应用免疫组化SP法动态观察不同时间点海马CAl区细胞色素C(CytC)和Caspase-3表达的变化;电镜和光镜观察再灌注24 h亚组海马CAl区神经细胞病理形态和线粒体超微结构的改变.结果:①大鼠脑缺血再灌注后海马CAl区CytC在再灌注3 h即有明显表达,于再灌注12h达高峰,以后表达逐渐降低;Caspase-3在再灌注3 h开始表达,12 h明显升高,24 h达高峰,48 h仍有较高表达.②与S组比较,IR组和P组各时间点海马CAl区的CytC、Caspase-3蛋白表达均明湿升高(P＜0.01);再灌注24 h亚组海马CAl区神经细胞病理形态和线粒体形态结构受损明显;③与IR组比较,P组各时间点海马CAl区的CytC、Caspase-3蛋白表达均明显降低(P＜0.05或P＜0.01);再灌注24 h亚组海马CAl区神经细胞病理形态和线粒体形态结构均有不同程度的改善.结论:长托宁对Caspase依赖的线粒体凋亡通路有干预作用,通过保护线粒体的形态功能、稳定线粒体膜、抑制CytC和Caspase-3的释放和激活,从而减少细胞凋亡的发生,发挥脑保护作用,这可能是其改善缺血再灌注损伤的部分作用机制.
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肢体缺血再灌注对脑组织细胞色素C的影响及缺血预适应的保护作用
目的 探讨缺血预适应(PC)对大鼠肢体缺血再灌注(LIR)后脑组织细胞色素C(CytC)的影响及其可能机理.方法 雄性Wistar大鼠48只,随机分成3组:对照组(control)、模型组(LIR)和缺血预适应组(IPC),每组16只,分别复制大鼠MR模型,测定脑组织丙二醛(MDA)和胞浆细胞色素C含量,检测线粒体Ca2+、细胞色素C含量,采用尼氏染色观察脑组织病理学改变和Western印迹法检测细胞色素C的表达变化.结果 大鼠LIR后,脑组织海马区、中脑红核区神经元细胞受损,模型组胞浆CytC表达明显上调,线粒体CytC表达下降,而线粒体Ca2+含量显著增加.缺血预处理后脑组织胞浆CytC、线粒体Ca2+与模型组相比含量降低,差异显著(P＜0.05),而线粒体CytC表达上升,并抑制脂质过氧化的发生.结论 缺血预处理可减少LIR中脑组织线粒体释放CytC,维持线粒体Ca2+稳态,对脑组织有保护作用.
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川芎嗪抑制IL-1β诱导的兔软骨细胞caspase-8和CytC的表达
目的 观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对白介素-1β(interleukin-1β,IL-Iβ)诱导的兔原代软骨细胞caspase-8和CytC表达的影响.方法 体外培养兔软骨细胞,用甲苯胺蓝染色检测蛋白多糖、免疫荧光检测兔原代软骨细胞Ⅱ型胶原；分为对照组、IL-1β 10 ng/mL单独作用组、IL-1β 10 ng/mL和不同浓度TMP联合作用组,按分组方法培养兔软骨细胞48 h,用Western blot和免疫组化检测caspase8蛋白表达；用ELISA法检测细胞内CytC的表达.结果 软骨细胞呈三角形或多角形,贴壁生长.蛋白多糖表达于细胞质中,Ⅱ型胶原主要表达于细胞质,少见于细胞核.实验组与对照组比较,IL-1β单独作用及IL-1β联合TMP作用软骨细胞后,caspase-8和CytC的表达均显著增加(P＜0.01).实验组之间比较,IL-1β+ 15 μg/mL川芎嗪联合作用组caspase-8和CytC的表达显著低于IL-1β单独作用组(P ＜0.05,P＜0.01).结论 川芎嗪能有效抑制IL-1β诱导兔软骨细胞caspase-8和CytC的表达,从而起到抑制细胞凋亡的作用.
