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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌医院感染研究进展
抗生素的大量应用,以及新的广谱抗生素的不断问世,致使细菌耐药性日趋严重,已经成为世界关注的公共卫生问题.医院感染的重要病原菌-耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)临床感染十分常见,因其表现为多重耐药,易引起感染的暴发流行,是临床治疗非常棘手的一大难题和研究热点.MRSA医院感染严重,社区获得性MRSA感染也有增加的趋势而备受关注.且国外已经出现耐万古霉素的金黄色葡萄球菌(VRSA),被称为超级细菌(Superbug)或沉默的杀手(Sillent killer).本文论述了MRSA医院感染的研究进展及其防治.
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体外诱导阿莫西林耐药株幽门螺杆菌PBP1突变位点检测
目的 分析幽门螺杆菌(Hp)阿莫西林耐药的相关分子机制. 方法 将Hp接种在含阿莫西林Karmali平板连续传代,诱导阿莫西林敏感菌株Hp 26695产生耐药性,获得耐药株.PCR扩增5种青霉素结合蛋白(PBPs,PBP1～PBP5),2种Hop孔蛋白(HopB和HopC)和1个外排泵蛋白(HefA)的编码基因,分析耐药菌株与敏感株Hp 26695之间的基因差异. 结果 获得4株阿莫西林耐药菌株,其中小抑菌浓度(MIC)为0.5和2 mg/L各1株,MIC为4mg/L 2株;对PCR扩增的基因片段进行测序和比对分析在4个耐药株的PBP1中共检出3个突变位点,2个替代突变(T438M,T593K)和1个插入突变(594G+),突变导致的氨基酸变化均位于所有耐药株PBP1的C端转肽酶结构域中.T593K和594G+是新发现的突变位点.594G+突变株的MIC为2.0 mg/L.T438M和T593K突变增加了594G+突变株的耐药强度,594G+合并T438M或T593K突变株的MIC提高到4.0 mg/L. 结论 在体外诱导的阿莫西林耐药株Hp PBP1中检测到3个突变位点,其中2个为新发现突变,Hp对阿莫西林耐药可能与PBP1的上述突变有关,但需要进一步试验验证.
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肺炎链球菌青霉素结合蛋白基因pbp2x新的变异与青霉素及头孢噻肟耐药
目的 调查研究肺炎链球菌临床分离株的pbp2x基因和氨基酸序列的变异特点,探讨本地区的肺炎链球菌对青霉素及头孢噻肟的耐药机制.方法 2006年1月-2007年2月收集肺炎链球菌临床分离株34株,进行青霉素及头孢噻肟药敏试验,对青霉素不敏感的肺炎链球菌(PNSP)的青霉素结合蛋白pbp2x基因进行PCR扩增和测序,并进行BLAST分析.结果 有12株PNSP(青霉素及头孢噻肟MIC≥0.5 mg/L)发生了2个重要位点的氨基酸的替换:第一个保守基序STMK内Thr338→Ala及第三个保守基序KSG之前的Leu546→Val氨基酸替换.另外,菌株15发生了第二个保守基序SSN之前的His394→Leu氨基酸替换,而且本研究首次发现了紧邻第一个保守基序STMK后,Met342→Ile位点的氨基酸替换.有17个菌株的pbp2x基因的核苷酸及氨基酸序列出现了新的变异,已向GenBank提交,获得序列号:EU044831、EU089706-EU089709、EU106881-EU106884、EU124672.结论 本地区大多数PNSP的pbp2x核苷酸及氨基酸变异序列高度相似,提示肺炎链球菌对青霉素及头孢噻肟的耐药与pbp2x基因变异相关.
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两种β-内酰胺类抗生素联用的合理性分析
β-内酰胺类抗生素是一类常用的抗菌药物,他们的化学结构中均有β-内酰胺环,可分为:青霉素类、头孢菌素类及非典型β-内酰胺类.临床工作实践中为了扩大抗菌谱常采用以β-内酰胺类抗生素为基础的联合用药来治疗单一抗生素不能控制的混合感染或病因未明的严重感染,为了降低药物的毒副作用、减少耐药性的产生、获得协同作用等目的时也常联合用药[1].
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泛耐药鲍曼不动杆菌PBP1A、CarO及β-内酰胺酶的编码基因分析
目的 了解一株泛耐药鲍曼不动杆菌(js01株)可能存在的β-内酰胺类药物耐药机制.方法 对自2011年12月宁波市第一医院住院患者的痰样本js01株分离,用gyrA和parC基因PCR扩增、测序和BLASTn比对确认菌种.用PCR法分析33种β-内酰胺酶基因(13种A类酶基因、10种B类酶基因、2种C类酶基因、8种D类酶基因)和插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测以及CarO膜孔蛋白编码基因.再用分段PCR法扩增PBP1A编码基因,双向测序后拼接成全长序列.结果 js01株检出β-内酰胺酶TEM-1、ADC-30、OXA-23和OXA-66编码基因.插入序列与β-内酰胺酶编码基因连锁检测显示ISabaI-ADC-30和ISabal-OXA-23为阳性.js01株carO基因序列与鲍曼不动杆菌敏感株(SDF)相比存在有义突变,氨基酸序列一致率为76.0％ (189/249),存在3个氨基酸缺失.js01株PBPIA编码基因序列与SDF株相比存在有义突变,氨基酸序列的一致率为99.6％( 848/851),存在3个氨基酸变异,但js01株PBPIA蛋白分子立体结构比SDF株丢失2个螺旋结构.结论 本株鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类药物耐药主要与该菌株管家基因(PBP1A、CarO编码基因)突变与可移动遗传元件介异的β-内酰胺酶编码基因有关.
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细菌耐药性研究进展与对策
目的了解细菌耐药性的严重性及机理,指导临床合理使用抗生素.方法查阅国内外有关文献.结果细菌产生耐药性与酶对抗生素的修饰或破坏、膜通透性改变、细菌能主动外排抗生素、新靶位的改变或产生、药物靶位的过度表达有关.结论合理使用抗生素、开发新型抗生素可以减少细菌耐药性的发生.
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头孢吡肟的不良反应与防治
头孢吡肟(cefepime)是广谱第四代头孢菌素类抗生素,通过抑制细菌细胞壁的生物合成而达到杀菌作用,对革兰氏阳性菌和阴性菌均有作用.与前三代头孢菌素相比,具有更广的抗菌谱,对细菌产生的β-内酰胺酶有更高的稳定性和更低的诱导性,能更快地穿透革兰阴性杆菌的外膜且与多种青霉素结合蛋白有更高的亲和力,临床用于重度感染治疗确有较好的疗效.
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肽聚糖循环及细菌对β-内酰胺类抗生素的耐受性
介绍肽聚糖循环及细菌对β-内酰胺类药物的耐药机制,为相关教学和科研工作提供参考.通过查阅文献,结合自身科研工作,对β-内酰胺类抗生素的抑菌机制和细菌对β-内酰胺类抗生素的耐药机制进行综述;β-内酰胺类抗生素可与转肽酶等蛋白质结合,破坏肽聚糖平衡,从而阻碍细胞正常生长;而细菌可通过β-内酰胺酶的诱导、外排泵的表达、外膜通透性增加和靶蛋白的修饰等措施来应对β-内酰胺类抗生素的作用,从而产生耐药.与肽聚糖循环有关的蛋白质,如转肽酶和转糖基酶,可作为β-内酰胺类新抗生素的筛选靶标;与细菌耐药性产生有关的蛋白质,如β-内酰胺酶,可作为β-内酰胺类抗生素辅助药物的筛选靶标.
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基于分子对接技术预测人面子叶中黄酮成分抗菌作用靶点
目的：木犀草素、槲皮素、儿茶素、表儿茶素是人面子叶中主要的黄酮成分，研究显示人面子具有抗菌活性，利用Autodock软件，模拟并预测黄酮成分的抗菌作用靶点。方法：采用中医药化学数据库和Autodock 4．2软件进行分子对接。结果：模拟分析得出木犀草素、槲皮素、儿茶素、表儿茶素与青霉素结合蛋白3、青霉素结合蛋白5、DNA聚合酶的对接结果及其功能区域的相互作用关系。结论：木犀草素是人面子叶中潜在活性成分，青霉素结合蛋白5和DNA聚合酶是人面子叶中黄酮成分抗菌的潜在靶点。本研究预测了人面子叶的抗菌作用靶点，为探索其抗菌机制奠定了基础，也为以木犀草素为先导化合物开发新型药物提供了理论基础。
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马桑水提取物抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的作用机制研究
目的 探索马桑水提取物(CSE)对耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)的抗菌作用机制.方法 分别用AFFX原核表达谱芯片、Western-blotting、SDS-PAGE凝胶电泳等方法,测定CSE对MRSA相关基因表达、自溶酶以及p-内酰胺酶的影响.结果 MRSA对绝大多数抗生素耐药,而CSE与多种β-内酰胺类抗生素合用具有显著地协同效应(P＜0.05);可显著下调MRSA的RNA表达总量,单用CSE或与氨苄西林合用均能呈剂量依赖性调控基础代谢基因、肽聚糖水解酶(lytM)基因、转运子基因、青霉素结合蛋白(PBPs)以及β-内酰胺酶活性(P＜0.05);可显著提高MRSA菌体内头孢唑啉浓度(P＜0.05).结论 CSE具有抑制MRSA作用,与β-内酰胺类抗生素合用具有协同作用.其机制与调控ribA、PBPs、lytM等相关靶基因的表达与转录,影响药物主动外排、细菌自溶及代谢等多种因素有关.
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静脉滴注头孢吡肟引起严重精神症状1例
头孢吡肟(cefepime)是第四代注射用头孢菌素,与前三代头孢菌素比较,它具有更广的抗菌谱,对细菌产生的β-内酰胺酶有更高的稳定性和更低的诱导性,能更快地穿透革兰阴性杆菌的外膜且与多种青霉素结合蛋白有更高的亲和力的特点,故临床用于重度感染的治疗有较好的疗效.现将1例用头孢吡肟致严重精神症状报告如下.
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儿童感染肺炎链球菌的青霉素结合蛋白基因突变分析
目的 分析儿童感染肺炎链球菌的青霉素结合蛋白基因突变与青霉素耐药水平之间的关系.方法 自2012年1月至2014年12月期间分离的1 317株肺炎链球菌中随机抽取出青霉素MIC=2.0 μg/mL、4.0 μg/mL、≥8.0μg/mL各20株共60株作为实验菌株,采用PCR方法对实验菌株进行青霉素结合蛋白PBP1a、PBP1b、PBP2a、PBP2b、PBP2x、PBP3的基因扩增,扩增产物进一步纯化和测序,测序结果与青霉素敏感肺炎链球菌R6就国际上公认的PBPs保守序列进行比对分析.结果 60株肺炎链球菌的PBP2b、PBP1a、PBP2x、PBP2a基因的保守区或保守区附件均发现氨基酸突变,未发现PBP3与PBP1b突变.中介与耐药菌株基因突变位点存在重合,主要出现在单一的PBP1a序列的370STMK模体元件内Thr371Ser置换突变或伴有PBP2b序列的Thr451 Ala/Ser和Ala624Gly置换突变,同时PBP2a序列的465SLN模体元件前置位发生Ser461Ala的置换突变.结论 肺炎链球菌对青霉素中、高水平耐药菌株绝大部分合并有不同PBP序列中4～6个氨基酸的置换突变,但合并多个氨基酸置换突变并非就必然引起耐药水平的相应升高.中、高水平耐药与PBP1a、PBP2b、PBP2a的变异关系密切,其中PBP1a的STMK保守区域Thr371Ser置换是引起耐药的主要因素之一.
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耐β-内酰胺类抗生素肺炎链球菌青霉素结合蛋白PBPs的氨基酸基因变异
目的 通过对台州地区耐β-内酰胺类抗生素肺炎链球菌青霉素结合蛋白基因PBPs的研究,分析肺炎链球菌的耐药机制.方法 收集2009年至2010年浙江台州地区63例肺炎链球菌临床分离菌株,进行培养、鉴定及药敏试验,PCR扩增耐药株青霉素结合蛋白PBPs基因并测序分析结果.结果 PBPs基因的变异位点主要集中在保守序列STMK,SSN区域及其附近.与以往报道相一致.结论 肺炎链球菌的PBPs基因变异与β-内酰胺类抗生素耐药性密切相关.
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鲍曼不动杆菌耐氨苄西林-舒巴坦与青霉素结合蛋白基因变异的相关性
目的 测定鲍曼不动杆菌临床分离株对常用抗菌药物的敏感性;分析青霉素结合蛋白(PBP)基因的变异,探索其与鲍曼不动杆菌对氨苄西林-舒巴坦耐药的相关性.方法 收集上海市4所教学医院临床分离的鲍曼不动杆菌67株,采用琼脂稀释法测定其对常用抗菌药物的低抑菌浓度.扩增所有临床株的7种PBP基因并测序.比较该菌氨苄西林-舒巴坦敏感组与耐药组之间核苷酸序列差异.结果 临床分离鲍曼不动杆菌对常用抗菌药物耐药率高,对氨苄西林-舒巴坦耐药率为67.6％.测序结果显示敏感株及耐药株间未发现PBP的氨基酸变异.结论 临床分离鲍曼不动杆菌对氨苄西林-舒巴坦耐药率较高.其耐药机制与PBP变异无相关性.
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社区呼吸道感染肺炎链球菌对头孢妥仑的耐药机制研究
目的 研究头孢妥仑敏感性降低肺炎链球菌的耐药机制.方法 收集2009年1月至2010年1月来自全国各地10所教学医院的37株头孢妥仑低抑菌浓度(MIC)≥1 mg/L的社区呼吸道感染肺炎链球菌作为研究组,并取6株头孢妥仑MIC≤0.5 mg/L的社区呼吸道感染肺炎链球菌作为对照组.采用微量肉汤稀释法测定菌株对11种抗菌药物的MIC.采用多重PCR法对所有菌株进行血清分型.采用PCR法扩增43株菌的pbp2b、pbp1a、pbp2x和murM基因.用限制性内切酶进行pbp2b、pbp1a、pbp2x的指纹图谱分析.根据酶切试验分型结果,同一型的菌株挑选1～5个PCR产物送测序,测序结果与肺炎链球菌标准菌株R6比较以分析耐药菌株的青霉素结合蛋白(PBP)保守基序,特别是SXXK盒、SXN盒、KT(S)G盒的突变情况.结果 根据药敏试验结果将菌株分为3组:3株对青霉素敏感、头孢妥仑MIC值≤0.5 mg/L作为C1组；3株对青霉素中介、头孢妥仑MIC值≤0.5 mg/L作为C2组；37株对青霉素中介,头孢妥仑MIC为1～4mg/L的为R组.R组的肺炎链球菌对左氧氟沙星、莫西沙星和万古霉素均敏感,对头孢呋辛、头孢克洛、阿奇霉素和克拉霉素均耐药,仅有8.2％和5.4％的菌株分别对阿莫西林-克拉维酸和头孢曲松敏感.37株R组菌株血清学分型结果35株为19F型,1株为14型,1株为19A型.C1组菌的PBP氨基酸保守基序与野生株R6相比无突变.C2组菌PBP氨基酸保守基序与R6株相比在PBP2B、PBP2X和PBP1A中均发生3点突变.R组菌株PBP氨基酸保守基序与R6株相比则在C2组突变的基础上增加了2～3个活性位点的突变.结论 PBP2B、PBP1A和PBP2X的突变与肺炎链球菌的头孢妥仑耐药性密切相关,特别是PBP2B的Ala618→Gly,PBP2X的Met339→Phe和Tyr595→Phe可能与头孢妥仑MIC升高相关.
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青霉素结合蛋白与革兰阴性细菌耐药性的研究进展
青霉素结合蛋白(PBPs)的改变与β-内酰胺类抗生素的亲和力降低是革兰阳性球菌获得抗生素耐药性的重要机制之一,而在革兰阴性细菌中因PBPs的改变导致耐药的出现却十分少见,这一观点忽视了革兰阴性细菌中PBPs在β-内酰胺类抗生素耐药机制中的作用.文章对PBPs的结构、功能、检测方法及与革兰阴性细菌耐药性的关系等方面的研究进展作一综述.
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颅内感染青霉素结合蛋白PBP1A、PBP2B和PBP2X同时变异的肺炎链球菌
肺炎链球菌拥有6种青霉素结合蛋白(PBPs),其中分子质量80000～90000的PBPs 2X、2B、1A、1B和2A具有转肽酶的作用,在细胞壁肽聚糖的连接中起重要作用.β-内酰胺类药物与PBPs靶向结合,通过灭活转肽酶作用和影响细胞壁合成来抑制肺炎链球菌的生长.肺炎链球菌对青霉素耐药主要是因为PBPs发生了改变,降低了与β-内酰胺类药物的亲和性.
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非PBP2a型苯唑西林耐药金黄色葡萄球菌的研究
目的:探讨从临床分离的表型为苯唑西林(OXA)耐药(OR)的金黄色葡萄球菌(金葡菌)是否存在mecA基因以外的耐药机制. 方法:表型为OXA耐药(OR)的金葡菌130株,其中五种非β-内酰胺类药物(庆大霉素、环丙沙星、林可霉素、四环素、红霉素)三种以上耐药(OR-R)125株,三种以上敏感(OR-S)5株;表型为OXA敏感(OS)的金葡菌,五种非β-内酰胺类药物3种以上耐药(OS-R)14株.采用OXA,OXA/克拉维酸(CA)双纸片扩散试验,青霉素和苯唑西林酶浸出三维试验和mecA基因聚合酶链反应(PCR)三种试验,分别检测青霉素酶、苯唑西林酶和mecA基因. 结果:130株OR和14株OS双纸片试验均为阴性,三维试验中青霉素酶均阳性,苯唑西林酶均阴性.125株OR-R型菌均检出mecA基因;5株OR-S菌中有3株未检出mecA基因,2株检出mecA基因;14株OS-R菌均未检出mecA基因. 结论:表型为OXA耐药而非β-内酰胺类药物以敏感为主的金葡菌中,存在mecA基因和苯唑西林酶均为阴性的耐药型菌株,占OXA耐药株中的2.3%(3/130).其耐药机制可能与青霉素结合蛋白(PBPs)的改变导致了OXA的亲和力下降有关.
关键词： 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 mecA基因 青霉素结合蛋白 -
肺炎链球菌β-内酰胺类抗生素小抑菌质量浓度与青霉素结合蛋白1A和2B变异的关系
目的 探讨肺炎链球菌(Sp)β-内酰胺类抗生素小抑菌质量浓度(MIC)与青霉索结合蛋白(PBP)1A和2B变异的关系.方法 对55株Sp用E-test法进行7种β-内酰胺类抗生素进行药敏试验,并提取每株Sp的DNA,分别对其青霉素结合蛋白基因(pbp)1a和pbp2b中编码青霉素结合区域(PBD)进行套式PCR扩增和直接测序,并用C1ustalx软件进行序列比对,分析PBP1A和PBP2B PBD保守序列的氨基酸置换.结果 青霉素敏感株4株中发现PBP2B保守序列SSN后苏氨酸(Thr)445→,丙氨酸(Ala),Thr451→Ala和谷氨酸(Glu)481→甘氨酸(Gly)置换,其余6株PSSP未发现PBP1A和PBP2B保守序列氨基酸置换.4株青霉素中介株(PISP)(MIC 0.19～0.38 mg/L)PBP2B Thr445→地,Thr451→Ala和Glu481→Gly置换,其中1株发现PBP2B保守序列SVVK后第431-432位点处脯氨酸(Pro)的插入,余3株存在谷氨酰胺(Gln)432→亮氨酸(Leu)置换.另16株PISP(MIC0.5-1.0 mg/L)在此基础上出现PBP1A SRN后Pro432→Thr,STMK中Thr371→丝氨酸(Ser)/Ala和KTG附近的短镶嵌序列Thr574→天冬氨酸(Asn)Ser575→Thr,Gln576→Gly,苯丙氨酸(Phe)577→酪氨酸(Tyr)置换,且后二种变异存在于所有青霉素和头孢类中介和耐药株中.20/25株青霉素耐药株存在PSP2B保守序列KTG附近Ala624→Gly,包含Ala624→Gly Sp组青霉素、头孢呋新、阿莫西林等抗生素平均MIC值明显高于不包含这一置换的Sp组.在青霉素MIC≥0.5 mg/L的菌株中均同时存在PBP1A和PBP2B的变异.结论 β-内酰胺类抗生紊对肺炎链球菌临床分离株MIC值与PBP1A和PBP2B编码青霉素结合活性区域的保守序列中或附近的氨基酸置换有关.
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社区获得性肺炎药物治疗进展
目的:随社区获得性肺炎细菌的变迁,了解如何合理选择和正确应用抗生素.方法:综合国内外对社区获得性肺炎病原学研究和抗生素研制的新进展.结果:肺炎链球菌仍然是社区获得性肺炎的主要病原菌,已有大约16.9%肺炎链球菌对青霉素耐药;其次,病原菌为支原体,衣原体,金葡菌,流感嗜血杆菌,肺炎克雷伯菌等革兰阴性菌,病毒等病原微生物.应根据病原微生物合理选用抗生素,PISP可选用青霉素,PRSP宜选择头孢噻唑、头孢三嗪、新氟喹诺酮类、万古霉素等糖肽类.为抗生物被膜以及支原体,衣原体,军团菌所致肺炎,可用大环内酯类和新氟喹诺酮类抗生素,对特殊病例由产ESBLs菌所致的肺炎治疗,宜选择碳青霉烯类,头霉素类,β-内酰胺酶抑制剂,可联用新氟喹诺酮类或氨基糖苷类.对产AmpC酶的细菌宜选择头孢吡肟,碳青霉烯类,也可联用新氟喹诺酮类或氨基糖苷类.依据抗生素的药动学特点,制定适宜的给药方案.结论:能否正确选择药物和合理使用上述药物的剂量和方法与临床疗效密切相关.
