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蛋白酶体抑制剂治疗多药耐药肿瘤机制的研究进展
多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致肿瘤化疗失败的重要原因,其复杂的机制中涉及许多蛋白的作用,这些蛋白多为蛋白酶体抑制剂的底物.通过蛋白酶体抑制剂可有效逆转MDR现象,它是目前抗癌药物研制领域的一个重要方向.介绍蛋白酶体的作用和MDR,综述近年来关于乳胞素、醛基肽、环孢菌素类似物和硼酸肽这4种蛋白酶体抑制剂对MDR的治疗机制.
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GST-π与恶性肿瘤多药耐药的研究进展
临床化疗失败的重要原因是肿瘤细胞对化疗药物产生内在性和获得性多药耐药(MDR).经典的mdr1、MRP等耐药机制已基本明确,因此,进一步了解非经典的耐药途径对于完善多药耐药机制有重要意义.综述了GST-π的生物学特性、GST-π介导的恶性肿瘤多药耐药的机制、GST-π在恶性肿瘤中的表达、GST-π与其他耐药途径的关系和GST-π耐药的逆转策略.
关键词： 肿瘤 药物耐受性 谷胱甘肽转移酶/代谢 综述文献 -
miRNA对肺癌化疗耐药调控研究进展
目的:总结miRNA对肺癌耐药调控的研究状况,并探讨其在预测肺癌对药物敏感性和耐药性中的作用.方法:应用PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,以“miRNA和肺癌”等为关键词,检索2007-01-2013-01的相关文献,共检索到英文文献732篇,中文文献88篇.纳入标准:1)肺癌耐药相关机制;2)miRNA在肺癌耐药中的作用;3)miRNA预测肺癌细胞的药物敏感性.根据纳入标准,符合分析的文献33篇.结果:肺癌耐药机制包括药物吸收降低或排出增多、药物靶点改变、细胞修复功能增强及细胞凋亡的减弱等,涉及药物作用各个环节关键基因突变可能导致耐药发生.而miRNA为一类高度保守的非编码RNAs,通过对上述各环节关键基因表达的调控进而调节肺癌细胞对化疗药物的敏感性.在肺癌化疗耐药的患者中,肺癌细胞miRNA突变或表达异常,导致miRNA对靶基因如药物转运相关基因、细胞解毒功能相关基因、细胞损伤后自我修复能力相关基因、细胞凋亡相关基因及肿瘤上皮间质化相关基因等表达的异常调控,致使肺癌细胞化疗耐药产生.同时,根据这些miRNA表达情况可预测肺癌患者对药物的反应.结论:miRNA对肺癌细胞耐药调控发挥着重要作用,从而为肺癌化疗耐药预测提供了新的思路和手段.
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乳腺癌细胞DNA分析和转铁蛋白受体表达与化疗药物敏感性的关系
目的:研究乳腺癌细胞DNA周期、转铁蛋白受体(CD71)的表达与化疗药物敏感性的关系.方法:利用流式细胞术(FCM)分析36例乳腺癌细胞DNA周期和CD71+细胞表达率,同时用MTT比色法检测化疗药物敏感性.结果:乳腺癌组织CD71+细胞表达率与5-氟尿嘧啶(5-FU)、甲氨蝶呤(MTX)和环磷酰胺(CTX)相对抑制率存在正相关,r值分别为0.485、0.404和0.496,P值分别为0.003、0.014和0.002,而与多柔比星(ADM)、顺铂(DDP)和丝裂霉素(MMC)相对抑制率无相关关系.正倍体细胞除CTX和MMC的敏感例数少于异倍体细胞外,其余药物均多于异倍体细胞,其中5-FU和MTX明显增多,P值分别为0.04和0.029.结论:乳腺癌细胞CD71的表达率与周期性化疗药物的敏感性具有相关性.当肿瘤细胞相处于增殖状态时,对周期性化疗药物的敏感性增高;肿瘤细胞的异倍体细胞对化疗药物的敏感率低于正倍体细胞.
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MTT法体外药敏试验指导下胃肠癌的预见性化疗
目的:研究MTT法体外药敏试验指导下胃肠癌预见性化疗的临床意义.方法:取27例新鲜胃肠癌标本进行体外MTT法药物敏感试验(MTT试验组),27例同期胃肠癌患者作经验对照组.试验组按药敏试验结果化疗,耐药者按临床经验化疗;对照组按临床经验化疗.结果:27例药敏试验完成实验,药敏阳性者胃癌8例,肠癌5例;阴性者胃癌7例,肠癌7例.临床化疗结果:试验组中对药物敏感者化疗有效率76.9%,耐药者中有效率14.3%,经统计学处理差异有显著性,x2=10.7,P<0.01;试验组总有效率为44.4%.经验对照组化疗后有效率为25.9%,经统计学处理两组疗效差异有显著性,x2=9.5,P<0.01.MTT实验结果与临床化疗结果的符合率为81.48%(10+12/27).结论:MTT法检测癌细胞对抗癌药或敏感试验可以预见胃肠癌的化疗.
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胃癌组织Tau蛋白表达与紫杉醇敏感性关系的研究
目的:研究Tau蛋白在胃癌组织中的表达情况及其与应用紫杉醇敏感性的关系.方法:免疫组化方法检测47例胃癌组织中Tau蛋白的表达水平,分析Tau蛋白的表达丰度；蛋白质印迹法检测胃癌细胞株中Tau蛋白表达水平；MTT法分析紫杉醇对胃癌细胞珠的生长抑制作用；流式细胞术检测紫杉醇对胃癌细胞珠的诱导凋亡作用.结果:免疫组化方法检测47例胃癌组织Tau蛋白(3+)表达率为12.77％(6/47),(2+)表达率51.06％(24/47),Tau蛋白高表达率为63.83％.蛋白质印迹法检测结果显示,Tau蛋白在胃癌MKN45细胞株中相对高表达,在BGC823细胞珠中相对低表达,P=0.014 7.MTT法分析发现,不同剂量紫杉醇对细胞珠MKN45和BGC823均有细胞抑制作用,但对Tau蛋白表达低的BGC823细胞株抑制作用更为明显,紫杉醇浓度6、8、10、30、50、70和90 μg/mL,其P值分别为0.051 91、0.000 50、0.021 89、0.002 28、0.002 45、0.549 39和0.022 72.流式细胞术检测结果显示,紫杉醇对两细胞珠均有诱导凋亡作用,且Tau蛋白低表达的BGC823细胞珠凋亡率更明显.结论:Tau蛋白在胃癌细胞中有较高表达,紫杉醇对Tau蛋白表达低的胃癌细胞具有更强的抑制作用,其敏感性更高.
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NP方案治疗CAF方案耐药的晚期乳腺癌临床观察
1998年10月1日-2001年10月31日我院采用NP方案治疗CAP方案耐药的晚期乳腺癌30例,结果总结报道如下.
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人肿瘤坏死因子α逆转原发性肝癌耐药性体内外实验研究
目的:探讨外源性人肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肝癌耐药细胞的逆转作用及对原位种植耐药动物模型抑瘤效应.方法:不同方法检测转染TNF-α后耐药细胞耐药指数及细胞对罗丹明潴留率和细胞P-gp蛋白的变化;建立耐药动物模型,计算肿瘤抑制率及检测肿植瘤的耐药蛋白表达和肝癌细胞凋亡指数的变化.结果:MTT结果显示,TNF-α耐药逆转率范围为21.3%～92.2%,其中对ADM、MMC和5-FU在逆转前后差异有统计学意义,P=0.034 3;罗丹明(Rho123)试验显示,转染细胞内Rh0123的积累明显增加,逆转前后细胞内荧光强度3 h后达到高峰为2.47倍,差异有统计学意义,P=0.009 3.细胞免疫组化结果显示,转染后细胞内P-gp蛋白表达量明显下降,吸光度值TNF组为(10.6士4.6)%,与ADM组(97.9±7.4)%相比,差异有统计学意义,P=0.038 3.与亲本细胞HepG2组(8.6±2.3)%相比,差异无统计学意义,P=0.0573.体内试验显示,转染TNF-α基因的肝癌细胞种植的肿瘤生长明显减慢,移植瘤的体积和质量抑制率在转染TNF-α基因组(TNF组)分别为58%和57%,明显高于耐药细胞组(ADM组)的14%和18%,P=0.028 7,接近于亲本细胞系HepG2种植肿瘤的57%和54%,P=0.065 2.同时,Western blot测定P-gp蛋白表达显示,转染组为(0.12±0.03)%,较耐药组的(0.95±0.26)%显著下降,P=0.028 7;TUNEL法检测细胞凋亡指数,TNF组为21.9±2.1,与ADM组2.3±1.8相比,差异有统计学意义,P=0.008 7;与HepG2组的23.7±2.9相比,差异无统计学意义,P=0.058 7.结论:外源性TNF-α基因能在mRNA和蛋白水平有效逆转肝癌耐药细胞的耐药性,增加耐药肝癌细胞对化疗的敏感性,降低耐药性肝癌的致瘤性.
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乳腺癌耐药蛋白重组腺病毒干扰载体构建及其干扰作用的观察
目的:观察腺病毒加载的RNAi对乳腺癌耐药蛋白(BCRP)介导的多药耐药的逆转.方法:构建干扰BCRP mRNA的腺病毒载体,采用细胞毒性实验和外排实验检测pAd-BCRP感染后,耐药细胞后的逆转情况.结果:pAd-BCRP可将B37/MX细胞对米托蒽醌的耐药指数从978降低至75(92.3%逆转).外排实验结果显示,感染pAd-BCRP和未感染的B37/Mx细胞外排1 h后细胞内的米托蒽醌的荧光强度分别为56.4和12.8.结论:pAd-BCRP能显著降低B37/MX细胞中BCRP的表达并抑制BCRP的功能.
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舌癌转移淋巴结中舌癌细胞耐药性的实验研究
目的:观察舌癌淋巴结转移模型中舌癌细胞耐药特性,探讨舌癌转移与耐药相关性.方法:在建立舌癌淋巴结转移模型的基础上,取淋巴结转移的舌癌细胞进行HE染色与免疫组化检测P-gp和LRP耐药相关蛋白,并分离纯化其细胞进行耐药特性检测,包括半数抑制浓度(IC50)、耐药倍数(resistance index,RI)与细胞内多柔比星荧光强度.结果:转移淋巴结中舌癌细胞表达P-gp和LRP蛋白,其分离纯化的子代细胞对多柔比星IC50为(1.86±0.026)＞g/mL,对照的亲本(Tca8113)舌癌细胞IC50为(0.26±0.005)μg/mL,RI为7.15;进一步检测淋巴结转移舌癌细胞内多柔比星浓度,其多柔比星荧光强度为6.13±2.48,明显低于亲本Tca8113舌癌细胞的12.36±3.59,P＜0.05.结论:淋巴结转移的舌癌细胞有一定的耐药特性.
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汉防己甲素抑制恶性腹腔积液中原代肿瘤细胞作用的观察
目的:研究中药单体汉防己甲素对恶性腹腔积液中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用.方法:体外培养肿瘤细胞系BGC-823、LOVO和SMMC-7721,WST-8法检测汉防己甲素在细胞系中的抗肿瘤作用.收集21例经病理确诊的恶性腹腔积液并分离原代肿瘤细胞,用WST-8法检测原代肿瘤细胞中汉防己甲素及化疗药的药物敏感性,荧光定量RT-PCR法检测汉防己甲素对凋亡相关蛋白基因Survivin及Bcl-2 mRNA表达的作用.结果:汉防己甲素对21例恶性腹腔积液中原代肿瘤细胞IC50平均值为32.96μm,与三株细胞系中的IC50差异无统计学意义,P>0.05.汉防己甲素对胃癌、大肠癌及其他消化道肿瘤来源的腹水中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用差异无统计学意义,P>0.05.2例对汉防己甲素耐药的原代肿瘤细胞对多西紫杉醇、氟尿嘧啶和顺铂存在交叉耐药,而对化疗药物耐药的原代肿瘤细胞对汉防己甲素无交叉耐药.汉防己甲素对部分细胞系及原代细胞中凋亡相关蛋白Survivin及Bcl-2 mRNA有明显下调作用,P<0.05.结论:汉防己甲素对恶性腹腔积液原代肿瘤细胞,尤其对化疗药物耐药的肿瘤细胞有一定的抗肿瘤作用.
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DNA修复基因XPD751基因多态性与肺癌化疗敏感性关系的研究
目的:研究DNA修复基因XPD751基因多态性与肺癌化疗敏感性的关系.方法:收集经病理学确诊的肺癌234例,所有病例化疗前抽静脉血,提取白细胞DNA,用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析技术检测XPD751基因型.所有患者均经铂类药物为基?幕品桨钢瘟啤＝峁?1)在24例肺癌患者中,XPD751 Lys/Lys、Lys/Gln和Gln/Gln基因型分别为192(82.1%)、40(17.1%)和2(0.8%)例.经化疗后,110例患者有效,总有效率为47.0%.2)XPD751Lys/Lys、Lys/Gln和Gin/Gin基因型有效率分别为50.0%(96/192)、30.0%(12/40)和100%(2/2),三者相比差异有统计学意义,X2=7.59,P=0.022 5.在调整性别、年龄、临床分期、细胞学类型和化疗方案的影响后,发现携带XPD751 Lys/Gln基因型患者化疗失败的可能性是Lys/Lys基因型患者的2.28倍,OR=2.28,95%CI为1.05～4.91.3)携带Lys/Lys基因型患者的恶心呕吐反应和脱发程度均高于Lys/Gln和Gin/Gin基因型患者,X2值分别为4.504和4.011,P值分别为0.034和0.045.结论:XPD751基因多态性与肺癌对铂类药物为基础的化疗敏感性相关,检测XPD751基因型可以预测肺癌化疗的敏感性.
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人多药耐药基因mdr1野生型mRNA转导脐血干细胞提高其对化疗耐药性的体外研究
目的:将人类多药耐药基因(mdr1)全长野生型mRNA转导至人脐带血干细胞,分析其P糖蛋白的表达及干细胞的耐药性.方法:通过体外转录方法经人野生型mdr1基因全长cDNA制备相应的mRNA,经脂质体介导转染人造血干细胞,采用RT PCR和Western blot检测转染效果,流式细胞仪检测蛋白表达、体外培养及细胞活率计数观察耐药性.结果:转染后P糖蛋白表达丰度为9.05%,对照组为1.01%;转染后具有Rhodamin-123排泌功能的细胞占98.72%,对照组为66.83%;转染后细胞耐药性明显增强,P＝0.002.结论:通过脂质体介导,将人类mdr1基因野生型全长mRNA转导入脐血干细胞,增加了P糖蛋白的表达,提高了细胞的耐药性.该系细胞可用于缓解和治疗恶性肿瘤化疗带来的骨髓抑制.
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MRP及GST-π在胰腺癌中的表达及临床意义
目的:了解胰腺癌中多药耐药相关蛋白及谷胱甘肽-S-转移酶π2种多药耐药基因产物的表达与其临床意义.方法:采用免疫组化的方法检测胰腺癌中上述2种蛋白的表达.结果:多药耐药相关蛋白、谷胱甘肽-S-转移酶π在胰腺癌中的阳性率分别为81%和59%,并且多药耐药相关蛋白与谷胱甘肽-S-转移酶π的表达具有相关性,二者的表达与临床分期、病理分型、病理分级及淋巴结转移无明显相关,同时有2种蛋白阳性者的生存期短于相应阴性者.结论:多药耐药相关蛋白及谷胱甘肽-S-转移酶π在胰腺癌的多药耐药现象中占有重要地位.
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NDRG2 siRNA对宫颈癌Hela细胞顺铂化疗敏感性影响的研究
目的:探讨人源N-myc下游调节基因2(N-Myc downstream-regulated gene 2,NDRG2)小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对宫颈癌Hela细胞的化疗增敏作用.方法:利用化学合成的针对NDRG2特异性siRNA借助脂质体转染宫颈癌Hela细胞.采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测NDRG2 mRNA和蛋白在宫颈癌Hela细胞的表达情况.通过MTT法检测该细胞在顺铂作用下的体外存活率.结果:化学合成的NDRG2特异性siRNA oligomer可使Hela细胞的NDRG2表达水平明显降低,增强了顺铂对Hela细胞体外生存的抑制能力.转染Negative-control oligomer的Hela细胞与转染NDRG2 siRNA oligomer HSS126269的Hela细胞相比,其存活情况出现明显差异,IC50值分别为(6.69±0.33)和(1.69±0.25) μg/L,差异有统计学意义,t=17.311,P=0.003.结论:抑制NDRG2表达可以提高宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性,具有一定的临床应用前景.
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人肺腺癌移植瘤多药耐药模型建立及生物学特性的研究
目的:建立耐药特性稳定的肺腺癌移植瘤裸小鼠动物模型,为进行耐药机制研究及逆转药物筛选提供实验模型和实验基础.方法:A549/DDP细胞接种于小鼠右侧腋下,观察肿瘤成瘤情况及生长特性；MTT法检测耐药倍数；RT-PCR和免疫组织化学染色检测小鼠移植瘤多药耐药1( MDR1)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)的基因及蛋白表达.结果:移植瘤细胞和原代细胞对DDP的耐药倍数无差异.移植瘤成瘤率均为100％,于第6～9天成瘤(体积＞100 mm3).与A549移植瘤相比,A549/DDP移植瘤成瘤潜伏期短(P=0.002),生长速度快.移植瘤中MDR1和MRP1 mRNA及P-糖蛋白(P-gp)和MRP1蛋白的相对表达量均升高,差异有统计学意义,P=0.000.结论:以A549/DDP细胞建立的肺癌多药耐药裸小鼠移植瘤模型,保持耐药活性和基因表型.
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维生素E琥珀酸酯诱导耐药白血病K562/ADM细胞凋亡的研究
目的:研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate , VES)对多药耐药白血病K562/ADM细胞的诱导凋亡作用及分子机制.方法:以体外培养的K562/ADM细胞为研究对象,采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT) 比色法检测细胞增殖活性,Wright-Giemsa染色、DNA凝胶电泳和流式细胞术(flow cytometry, FCM)检测细胞凋亡;FCM测定细胞Fas、Bcl-2和p53蛋白表达水平.结果:VES可显著抑制K562/ADM细胞的生长及增殖,P=0.004.光镜下可见K562/ADM细胞呈典型凋亡的形态学改变.DNA凝胶电泳显示典型的凋亡DNA梯形条带.FCM细胞周期分析显示,G1期阻滞,亚G1期细胞比例增高,P=0.005;Fas蛋白表达明显上调,P=0.002;Bcl-2蛋白表达下调,P=0.000;p53蛋白表达无明显变化.结论:VES可诱导K562/ADM细胞凋亡,作用机制可能与其上调Fas表达和下调Bcl-2表达有关.
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培美曲塞联合铂类一线治疗晚期NSCLC疗效与安全性Meta分析
目的:采用Meta分析的方法,评价培美曲塞联合铂类(PPC方案)一线治疗晚期非小细胞肺癌(non-small celllung cancer,NSCLC)的疗效和安全性.方法:计算机检索PubMed、EMBASE、Cochrane数据库、中国期刊全文数据库和中国生物医学文献数据库等,纳入PPC方案治疗初治的晚期NSCLC随机对照试验(randomizd controlled trail,RCT), 2位研究者独立评估试验质量和提取数据;使用RevMan 5.2软件进行Meta分析.结果:共纳入6项RCT,包括3 057例晚期NSCLC患者.Meta分析结果显示,PPC方案治疗晚期NSCLC患者与其他含铂方案(PBR方案)比较,有效率(OR=1.18,95％CI:0.77～1.81,P=0.45)和1年生存率(OR=1.11,95％CI:0.82～1.49,P=0.51)差异无统计学意义;无疾病生存时间(progression free survival,PFS)差异无统计学意义(HR=1.01,95％CI:0.93～1.11,P=0.75);但在总的生存时间(overall survival,OS)方面,PPC方案略有优势(HR=0.92,95％CI:0.84～1.01,P=0.07),尤其是非鳞癌患者更能从中获益(HR=0.87,95％CI:0.77～0.99,P=0.03).与PBR方案相比,PPC方案治疗晚期NSCLC患者3～4级白细胞减少、中性粒细胞减少以及粒缺性发热方面发生率较低,但3～4级消化道反应更为常见.结论:PPC方案一线治疗晚期NCSLC患者具有较好的疗效和安全性,尤其适合非鳞癌的患者.
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环孢素A逆转白血病多药耐药的临床探讨
目的探讨环孢素A(CsA)逆转复发难治性急性白血病(AL)多药耐药(MDR)的临床疗效.方法对45例复发难治性急性白血病患者进行P-170检测,并对其中30例P-170阳性患者随机分为治疗组(CsA+化疗)和对照组(单用化疗)进行逆转MDR的研究.结果 P-170在复发难治性急性白血病中有高表达(66.7%),治疗组总有效率(60.0%)明显高于对照组(26.7%),差异有显著性(P＜0.05).结论 CsA能够逆转难治性白血病耐药性,在治疗复发难治性急性白血病方面具有良好的临床应用价值.
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肺癌组织P-糖蛋白表达与原位细胞凋亡、增殖、凋亡相关基因关系及其临床意义
目的探讨肺癌组织P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达与细胞凋亡、增殖及凋亡相关基因的关系及其预后意义.方法应用末端脱氧核糖核酸转移酶法(TUNEL)检测凋亡细胞,免疫组织化学检测耐药及凋亡相关基因蛋白表达.结果非小细胞肺癌(NSCLC)P-糖蛋白阳性率22.2%,小细胞肺癌(SCLC)阳性率11.5%.凋亡指数(Apoptosis index,AI)和增殖指数(PCNA-labeling index,PCNA-LI)呈高度负相关(r=-0.7358,P<0.01).P-gp阳性者,AI和PCNA-LI高于P-gp阴性者,PCNA-LI差异有显著性(P<0.01).P-gp与bcl-2表达相关(r=0.5637,P<0.05),与P21WAF1/CIPI无关(r=0.2405,P>0.05).多因素Cox回归分析显示,P-gp及AI有预后意义.结论 P-gp与细胞凋亡、增殖、凋亡相关基因相关,且具预后意义.
