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SiewertⅡ和Ⅲ型食管胃结合部腺癌术前受累野照射同期放化疗生存分析
目的 探讨局部进展期SiewertⅡ、Ⅲ型食管胃结合部腺癌(AEG)术前受累野照射同期新辅助放化疗的效果、急性不良反应及生存分析.方法 前瞻性纳入2011年-2015年4月河北医科大学第四医院收治的SiewertⅡ、Ⅲ型局部进展期AEG患者45例,术前受累野照射45 Gy分25次,5次/周,同期行XELOX方案化疗2个周期,6周-8周后进行手术切除,术后化疗6个周期.观察术前新辅助放化疗完成情况、术后病理情况、降期及不良反应,应用Kaplan-Meier法进行生存分析.结果 45例患者均完成术前同期放化疗和手术治疗,完成同期2个周期放化疗39例,1个周期6例.手术中位间隔时间为6周,R0切除率为96%(43/45),pCR率为22%(10/45),TNM降期率为68. 9%.急性放射性食管炎/胃炎的发生率为44%(20/45),放射性肺炎的发生率为7%(3/45). 1、2、3级白细胞、血小板和中性粒细胞计数减低的发生率分别为78%、47%和44%.非血液学不良反应主要为消化道反应,其中恶心、呕吐、食欲不振的发生率分别为62%、24%、71%,未见4、5级血液学及非血液学不良反应.中位随访时间30个月,病死13例(肿瘤死亡11例,肺部感染死亡1例,围手术期治疗相关死亡1例),术后1、2、3年PFS率分别为90%、70%、67%,OS率分别为95%、80%、75%,局部控制率分别为95%、84%、84%,远处转移率分别为7%、25%、25%.结论 SiewertⅡ、Ⅲ型局部进展期AEG术前受累野照射同期放化疗可以实现较高的PFS率、OS率和局部控制率,患者耐受性良好.新辅助放化疗联合手术治疗后需辅助化疗4个周期.
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吉西他滨耐药胰腺癌细胞系的耐药机制
目的探讨吉西他滨耐药胰腺癌细胞系的耐药机制.方法应用免疫组织化学方法和逆转录PCR法(RT-PCR),对吉西他滨耐药细胞系的耐药机制进行了研究.选用沙尔威辛(SAL)进行逆转耐药实验,采用了RT-PCR法、流式细胞仪和MTT法,评估SAL逆转耐药的效果.结果免疫组织化学法显示,耐药细胞SW1990-GEM的P-糖蛋白(P-gp)表达为弱阳性,其亲本细胞SW1990为阴性.多药耐药相关蛋白(MRP)在两细胞系表达均为阴性.SW1990-GEM的多药耐药基因(mdr-1)在mRNA水平上的转录比其亲本细胞系SW1990增强;脱氧胞苷激酶(dCK)基因的转录减少;核苷酸还原酶(RR)基因的转录增强.经过SAL作用后,mdr-1在mRNA水平上的转录减少.流式细胞仪显示,经过4,30,60,90 nmol/L SAL作用后,细胞内罗丹明123的蓄积累分别增加1.04,1.16,1.39,1.72倍.用4 nmol/L SAL进行逆转吉西他滨耐药实验,未接受SAL处理的对照组对吉西他滨的IC50为203.72 μmol/L;经SAL作用1 h后再加吉西他滨组的IC50为121.36μmol/L(P=0.219);经SAL作用24 h后再加吉西他滨组的IC50为121.64μmol/L(P=0.167).结论胰腺癌细胞对吉西他滨耐药的原因与dCK减少有关,同时也与mdr-1和RR升高相关.SAL能够下调SW1990-GEM耐药细胞的mdr-1和P-gp表达,但低浓度的SAL不能逆转SW1990-GEM对吉西他滨的耐药.
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慢性粒细胞白血病治疗中克服伊马替尼耐药的新策略
慢性髓系白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)是以恶性髓系祖细胞克隆性增殖为特征.95%CML患者的造血干细胞中存在BCR-ABL融合基因,它是由9号和22号染色体相互易位而形成t(9;22)(q34;q11),细胞遗传学上可见缩短的22号染色体[1].BCR-ABL融合基因编码的BCR-ABL蛋白为胞浆蛋白,具有持续活化的酪氨酸激酶活性,可导致自身酪氨酸残基磷酸化及许多重要的底物蛋白磷酸化,从而激活多条信号传导途径,使细胞转化、增殖、分化和凋亡受阻.BCR-ABL能激活许多信号传导途径和下游的靶点,如Ras途径、PI3K途径、JAK/STAT途径及STATs途径,其中主要的是Ras途径.
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拉莫三嗪治疗精神分裂症和双相抑郁及重性抑郁症耐受性与敏感性的文献分析
目的 分析拉莫三嗪在精神分裂症、双相抑郁和重性抑郁症急性期治疗中耐受性与敏感性.方法 选择符合急性期、随机双盲、安慰剂对照的关于拉莫三嗪治疗急性期精神分裂症、双相抑郁和重性抑郁症的临床试验进行分析;以不良事件引起治疗终止发生率为拉莫三嗪的耐受性指标,以皮疹和头痛为敏感性指标.分别计算拉莫三嗪(200 mg/d)事件发生率相对于安慰剂事件发生率增加(ARI),以及拉莫三嗪(200 mg/d)治疗相对于安慰剂治疗所致1例不良事件发生前需要治疗的患者数(NNH);显著性检验以95%可信区间(95%CI)表示.结果 (1)难治性精神分裂症4项、双相抑郁4项、难治性双相抑郁1项和重性抑郁症3项临床试验被分析;(2)在难治性精神分裂症、双相抑郁及难治性双相抑郁、重性抑郁症的急性治疗期,与安慰剂比较,拉莫三嗪(200 mg/d)相关不良事件引起治疗终止NNH(95%CI)依次为323(-23～20)、-47(-17～60)、-34(-10～22)和-32(-14～158)例,皮疹依次为133(-51～29)、-46(-18～83)、51(-16～10)和-31(-15～1208)例,头痛依次为-26(-11～61)、-168(-16～19)、-28(-6～9)和53(-24～13)例,差异无统计学意义(95%CI包括0).结论 拉莫三嗪单药或增效治疗精神分裂症、双相抑郁和重性抑郁症具有良好的耐受性与安全性.
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双类似物鼻黏膜耐受对实验性自身免疫性重症肌无力预防作用机制的研究
目的观察双类似物(Lys262-Ala207)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠进行鼻黏膜耐受预防性给药后临床、免疫指标的变化并评价疗效,探讨鼻黏膜耐受对EAMG的预防作用机制.方法建立Lewis大鼠EAMG模型,并在致敏前10 d(A组,10只)及致敏当日(B组,10只)鼻腔给药,评价给药后A、B组及相应对照组CA组(10只)、CB组(10只)大鼠的临床症状并检测肌肉中乙酰胆碱受体(AChR)含量,测定致敏第42天血清抗AChR抗体IgG含量、第50天淋巴结单个核细胞(MNC)中针对AChR等特异性抗原的淋巴细胞增殖反应和CD4+及CD4+CD25+ T细胞.结果 (1)A、B组急性期和慢性期临床症状明显轻于相应对照组,A组慢性期临床症状轻于B组;(2)A、B组慢性期血清抗AChR抗体IgG含量[分别为(22.0±3.4)μg/ml和(29.4±4.6)μg/ml],明显低于相应对照组[CA组(42.6±4.4)μg/ml、CB组(43.2±5.5)μg/ml],且A组低于B组(均P<0.01);(3)A、B组大鼠肌肉AChR含量丢失明显低于相应对照组(均P<0.01),且A组低于B组(P<0.05);(4)A、B组较各自对照组针对AChR等特异性抗原的淋巴细胞增殖反应均明显受抑(均P<0.01);(5)A、B组淋巴结中的CD4+CD25+ T细胞含量均明显高于各自对照组,且A组高于B组.结论 Lys262-Ala207鼻黏膜预防耐受不仅可有效地抑制临床症状,且特异性抑制T细胞、B细胞免疫功能;预防耐受的疗效与自身免疫启动前或启动同时耐受有关,免疫前优于免疫同时;Lys262-Ala207鼻黏膜预防耐受给药有效、途径方便安全,为采用该途径防治人类MG提供了依据.
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恶性胶质瘤化疗新进展
我们对在恶性胶质瘤的药物治疗中药物耐受性、目前开展的化疗、给药方法的选择和治疗的新进展作一综述.
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降低Twist1表达可以增加鼻咽癌细胞系HNE1对紫杉醇的敏感性
目的 研究降低Twist1表达可否改变鼻咽癌细胞系HNE1对紫杉醇的敏感性.方法 用包含Twist1小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列的表达质粒转染HNE1细胞,以新霉素(400 μg/ml)筛选阳性克隆,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹法鉴定Twist1蛋白的低表达.通过Annexin V-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)-碘化丙啶(propidium iodide,PI)双标法和观察DNA降解的方法分析si-Twist1 HNE1细胞对紫杉醇的敏感性,采用实时PCR技术分析凋亡相关基因的表达,流式细胞周期分析和叫甲基偶氮唑蓝(MTT)方法分析降低Twist1表达是否影响HNE1细胞增殖.结果 Annexin V-FITC-PI双标法检测结果显示,10 ng/ml紫杉醇处理后,si-Twist1 HNE1细胞的凋亡率为40.2%,显著高于对照siRNA组的24.3%,差异有统计学意义(t=56.999,P=0.000);恢复Twist1蛋白的表达,紫杉醇引起的凋亡率在低Twist蛋白表达组为44.80%±4.80%(x±s,下同),在高表达组为27.00%±2.91%,差异有统计学意义(t=4.374,P=0.049).实时PCR实验结果显示,紫杉醇处理的HNEI细胞中si-Twist组凋亡相关蛋白B淋巴细胞(bcl)-2的相对表达量为0.28±0.05,显著低于对照siRNA组的0.57±0.08,差异有统计学意义(t=6.710,P=0.021);而bax和bcl-XL基因的转录水平没有明显改变(t值分别为2.000和1.502,P值均>0.05).MTT实验和流式细胞术检测显示Twist表达降低没有影响HNE1细胞增殖(P值均>0.05).结论 降低Twist1表达可能是通过诱导凋亡提高了细胞对化疗药物敏感性,提示Twist蛋白可望成为一项新的鼻咽癌治疗靶标.
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口腔鳞癌P-gp、GST-π表达与化疗药物耐受性
目的探讨P-糖蛋白(P-glycoprotein ,P-gp)和谷胱甘肽S转移酶π(glutathione transferase-π,GST-π)表达与化疗药物耐受性的关系.方法采用免疫组化过氧化物酶标记法检测口腔颌面部鳞癌和正常口腔粘膜组织样本中P-gp和GST-π的表达,结合MTT药敏检测结果分析.结果 P-gp和GST-π在恶性肿瘤中阳性表达率分别为57.1%和53.6%,在正常组织中未见表达;P-gp的表达与化疗药物总体耐受性有关;GST-π的表达与患者对顺铂耐受性有关.结论 P-gp和GST-π的阳性表达提示患者有化疗药物耐受倾向.P-gp和GST-π检测对判断口腔颌面部恶性肿瘤化疗耐药性有指导意义.
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134例结核杆菌5种耐药基因的检测
应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法分析134例临床分离株的5种结核杆菌(MT)耐药基因突变情况.结果表明,耐吡嗪酰胺(PZA)pncA基因,耐链霉素(SM)rpsL基因,耐利福平(REP)rpoB基因,耐异烟肼(INH)katG基因,耐乙胺丁醇(EMB)embB基因的突变率分别为42.7%,71.7%,78.9%,68.6%,43.9%.证实MT存在多种耐药基因突变的情况.但MT药敏实验与5种耐药基因突变率并不一致,说明MT的耐药除基因突变外,尚有其他影响因素存在.
关键词： 分枝杆菌 药物耐受性 基因 聚合酶链反应-单链构象多态性 -
顺铂体外诱导的人肝癌耐药细胞株(QGY/DDP)的建立
目的 建立顺铂(DDP)诱导的人肝癌耐药细胞株(QGY/DDP),研究其生物学特性和耐药机制.方法 采用间歇诱导法,逐步递增DDP浓度,获得耐药细胞株QGY/DDP;MTT法测定药物敏感性;细胞计数法计算倍增时间,流式细胞术检测细胞周期;原子吸收光谱法测定细胞内铂离子蓄积量,流式细胞仪测定P-糖蛋白(P-gp)和谷胱甘肽S-转移酶-π(GST-π)的表达水平.结果 成功建立了顺铂诱导的人肝癌耐药细胞株QGY/DDP,耐药指数为10.81,与5-氟尿嘧啶、长春新碱等抗癌药有明显的交叉耐药;与QGY细胞相比,QGY/DDP细胞增殖减慢、倍增时间延长,G0/G1期细胞增多、S期与G2/M期细胞减少,细胞内Pt含量降低,GST-π的表达升高,而P-gp无明显变化.结论 QGY/DDP细胞具有耐药表型及耐药细胞的生物学特性;其耐药机制与细胞内Pt含量降低和GST-π过表达有关,而与P-gp无关.
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ZNRD1基因的克隆及其反义核酸对胃癌耐药细胞阿霉素蓄积的影响
为获得ZNRD1基因的编码区序列,构建反义真核表达载体,通过检测ZNRD1基因反义核酸转染对胃癌长春新碱耐药细胞SGC7901/VCR阿霉素(ADM)积蓄能力的影响,评价ZNRD1在抗胃癌细胞多药耐药性方面的应用前景.用PCR方法扩增目的基因序列,PCR产物经DNA序列测定证实后,采用分子克隆技术,将所获目的基因全长cDNA片段按反方向克隆入真核表达载体pcDNA3.1+的多克隆位点之间,对重组质粒进行酶切鉴定.用脂质体介导法将ZNRD1反义核酸转染SGC7901/VCR,流式细胞仪(FACS)检测SGC7901/VCR细胞内阿霉素的蓄积量.结果应用PCR反应扩增出特异性片段,经DNA序列分析,证实与文献报道的ZNRD1基因编码区序列一致;构建了反义真核表达载体pcDNA3.1-ZNRD1;转染SGC7901/VCR细胞后,可提高细胞内ADM蓄积量.ZNRD1反义核酸转染后,胃癌多药耐药细胞株SGC7901/VCR对抗肿瘤药物ADM的积蓄作用提高,提示ZNRD1反义核酸具有提高耐药细胞株细胞内药物浓度、恢复其药物敏感性、逆转多药耐药性的作用.
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三种结核分枝杆菌耐药基因检测的临床应用和评价
采用聚合酶链反应-单链构像多态性分析(PCR-SSCP)检测结核分枝杆菌耐药基因(rPOB、katG和rPSL),评估它的临床应用价值.通过Bactec-960快速培养、PCR-SSCP和药物敏感试验了解123例肺结核病人结核分枝杆菌耐药情况,分析了临床治疗效果.近1/3的初治肺结核病人至少耐一种抗结核药物,RFP、INH和SM敏感株rPOB、katG和rPSL基因突变率分别为6.2%、10.8%和25.4%,耐药株基因突变率分别为60.2%、48.0%和61.5%,耐药基因突变率随着耐药浓度增高而增高.药敏试验联合耐药基因检测指导治疗效果满意.耐药基因检测指导治疗是一种新探索,与药敏试验联合应用可互相弥补,有可能成为临床指导用药的较好方法.
关键词： 结核 抗结核药 药物耐受性 耐药基因 聚合酶链反应-单链构像多态性 -
抗血小板治疗药物耐受机制的研究进展
抗血小板治疗是心血管病抗栓治疗的基础,阿司匹林和氯吡格雷已经成为心肌梗死(myocardial infarction,MI)等冠状动脉疾病关键的一、二级预防和治疗药物.在急性冠脉综合征中,联合使用氯吡格雷可增强阿司匹林的抗血小板作用,减少约20%的冠脉事件~([1]).然而,全世界几百万接受抗血小板治疗的患者中,每年仍有很大比例出现明显的血管相关事件.
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96例急性乙型肝炎患者HBV多聚酶区的耐药变异分析
目的 检测未接受过核苷(酸)类似物(NA)治疗的急性乙型肝炎患者感染的HBV是否存在耐药变异.方法 收集96例急性乙型肝炎患者住院早期血清,提取HBV DNA,采用巢式PCR方法扩增HBV反转录酶(RT)全基因,对PCR产物进行DNA双向测序,对RT/S基因序列进行分子进化树分析反基因分型,对rt80、rt173、rt180、rt181、rt184、rt202、rt204、rt236和rt250等位点上的耐药相关变异进行分析,并用克隆测序法进行验证,每个样本测定10～20个克隆.结果 用直接测序法检出NA耐药变异8例(8.3%),C型6例,B型2例.其中6例为拉米夫定(LAM)耐药变异,包括4例rtM204I、1例rtL80I+rtM204I和1例rtL180M+rtM204I;另2例检出与阿德福韦酯(ADV)耐药相关的rtA181V变异.变异株多数与野生型病毒株共存.克隆测序法的结果与直接测序法的结果大体相符,部分样本中有2种或多种耐药变异株共存,其中1例患者的样本中除LAM变异株外,还检出了ADV和恩替卡韦(ETV)耐药变异株,变异形式分别为rtA181T+rtN236T和rtL180M+rtS202G+rtM204V.结论 未接受过NA治疗的急性乙型肝炎患者可以感染NA耐药株病毒,NA耐药病毒可以在人群中传播引起急性乙型肝炎,变异病毒的传播致病不只局限于LAM耐药株.
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乙型肝炎病毒多聚酶区rt229突变的流行特点及其对病毒复制力的影响
目的 评价乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶反转录酶(RT)功能域rt229突变对HBV复制力的影响.方法 从慢性HBV感染患者血清中提取HBV DNA,使用PCR扩增RT区及前C区基因,采用直接测序法分析耐药相关位点的突变;克隆患者HBV全长基因组,获得S445-3及S869-4克隆并作为定点突变母本,以产生rt229突变的各种模式.使用无载体介导的方法将含有rt229突变的全长HBV基因组转染入HepG2细胞系中,转染3d后采用Real-Time PCR法定量检测HBV复制中间体水平.结果 在受检的6000例患者中,394例(6.57%)存在rt229突变,与拉米夫定(LAM)治疗相关的占78.93%,明显高于其他患者[包括接受阿德福韦酯(ADV)治疗、初治和用药不详者]所占的21.07%.其中rtL229V、rtL229W和rtL229M单独突变分别占全部rt229突变的12.44%、1.78%和4.57%,未发现rtL229F单独突变株;rtL229V、rtL229W、rtL229M、rtL229F与LAM耐药突变共存分别占43.65%、9.14%、9.64%和14.97%;rtL229V、rtL229M与ADV耐药突变共存分别占2.54%和1.27%.复制力评价结果显示,相对于前C区G1896A单独突变株(S869-4),rtL229V、rtL229W、rtL229M和rtL229F突变将HBV复制力降低至2.92%、8.79%、26.04%和34.80%;相对于LAM耐药株(S445-3),伴随有rtL229V、rtL229W、rtL229M和rtL229F的LAM耐药株的复制力增加了1.18、2.29、2.49和2.51倍.结论 rt229位点的突变可降低HBV的复制力,增强LAM耐药株的复制力;rt229突变可能为LAM耐药突变的补偿突变.
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HBV表型耐药方法的建立及临床分离株的表型耐药分析
目的 建立HBV表型耐药分析方法,体外培养慢性乙型肝炎患者血清HBV分离株并系统分析其对拉米夫定(LAM)的敏感性.方法 从1例LAM耐药慢性乙型肝炎患者血清中提取HBV DNA,PCR扩增RT基因,克隆到pGEM-Teasy载体中,随机挑选10个克隆进行DNA序列测定,并分析RT区LAM耐药相关的突变位点.用Xho Ⅰ和Nco Ⅰ双酶切pGEM-Teasy-RT及pTriEx-HBV(C),构建1.1倍HBV野生株和LAM耐药突变株的重组载体pTriEx-wRT和pTriEx-mRT,转染人肝癌细胞系HepG2细胞.转染60h后加入不同浓度(0、0.01、0.1、1、10、100μmol/L)的LAM,药物连续作用5d后,抽提病毒核心颗粒HBV DNA,通过实时荧光PCR及Southern blotting检测不同药物浓度作用下HBV DNA的复制水平.结果 成功建立体外HBV表型耐药分析方法.野生未突变株重组载体pTriEx-wRT转染HepG2细胞后,随着LAM浓度的升高,HBV DNA水平明显下降,而突变株重组载体pTriEx-mRT转染HepG2细胞后,HBV DNA水平无明显下降,IC50值与野生株相比增加了2500倍.结论 建立的HBV表型耐药分析方法对监测HBV耐药性具有可行性.
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DNA损伤修复与肿瘤烷化剂化疗
DNA损伤修复能够使肿瘤细胞耐受化疗药物造成的DNA损伤而存活,因此,调节某种特殊的DNA修复路径可以增强化疗药物的疗效.另外,有些DNA修复路径在一些肿瘤细胞中是失活的.目前,以DNA修复蛋白O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)和错配修复蛋白作为调节靶标,提高化疗效果的联合用药策略正在进行各期临床实验.靶向DNA修复机制增强抗肿瘤化疗药物的疗效、克服肿瘤耐药正成为肿瘤个体化化疗研究的一个重要领域.
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人膀胱癌非P-糖蛋白介导的多重抗药性
目的:建立人膀胱癌耐阿霉素细胞系及研究它们的生物学特性及药物耐受性的机制.方法:采用人膀胱癌细胞系EJ,经递增阿霉素剂量的方法,历时一年,建立一株耐药亚株EJ/DOR,对其生物学特性及耐药机制进行了研究,并应用反转录PCR检测了MDR1、MRP和DNA TopoⅡ基因的表达.结果:EJ/DOR对阿霉素的相对耐受度较亲本细胞提高了14.3倍;对蒽环类、长春花属生物碱及DNA TopoⅡ靶制剂足叶乙甙有明显的交叉耐药性,但对顺铂、丝裂霉素无明显的交叉耐受性;耐药细胞对柔红霉素的细胞内聚集量显著减少;EJ/DOR并不表达MDR1基因,而MRP基因过表达,但细胞内DNA TopoⅡ基因表达低于亲本细胞.结论:细胞内DNA TopoⅡ基因表达下降及MRP基因过表达是EJ/DOR表现为多耐药受性亚型的主要原因,这种非P-gp介导的非经典型多耐药受性细胞为寻求包括阿霉素在内的化疗方案提供了良好的实验模型.
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产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检测及耐药性分析
目的 研究产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检测及耐药性,指导临床合理应用抗菌药物. 方法 采用初筛试验和确证试验对临床分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌进行检测,以确定产ESBLs菌株,并进行抗生素耐药性分析.结果产ESBLs菌在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的检出率分别为44.8%和23.6%,对亚胺培南为敏感,对头孢唑啉和氨苄西林耐药. 结论 临床对产ESBLs细菌治疗以碳青霉烯类药物为首选,含酶抑制剂复合药物部分有效.
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肠道门诊急性腹泻患者病原学调查及耐药性分析
急性腹泻是春、夏季的高发病,病程短、病情急.通常仅在门诊进行诊断和治疗,由于门诊的特殊性,故缺乏系统的病原学检测及耐药性分析,在治疗上存在一定的盲目性.为了研究门诊急性腹泻病人的病原学特点及药敏趋势,我们对北京市繁华地区某医院1 724例门诊腹泻病人进行了较为系统的病原学检测及耐药性分析,拟为今后门诊急性腹泻病人的治疗提供实验室前瞻性的分析依据.
