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犀角地黄汤合银翘散对流感病毒感染小鼠肺组织MLC磷酸化信号通路的影响
目的：以流感病毒感染的小鼠为模型，检测犀角地黄汤合银翘（ XDY）对小鼠肺组织中肌球蛋白轻链（ MLC）磷酸化信号通路的影响，以明确其抗病毒作用的分子机制。方法将50只雄性Balb/c小鼠按体重随机分为5组，每组10只，分别为正常组、病毒组和XDY低、中、高剂量给药组，除正常组小鼠外，其余组用A/FM/1/34（H1N1）病毒株滴鼻感染。1 h后，病毒组蒸馏纯水灌胃，2次/d；其余三组分别用低、中、高剂量的XDY灌胃，2次/d。感染后第4天摘眼球处死小鼠，RT-PCR检测各组小鼠肺组织中病毒RNA水平；Western bolt 检测肺组织MLC、p-MLC、PKC、p-PKC、ROCK-1、ERM、p-ERM蛋白表达水平。结果与病毒组相比，XDY中剂量组病毒RNA含量显著降低，差异有统计学意义（ P﹤0.01），而高剂量组和低剂量组病毒RNA含量则无明显变化。XDY中剂量组Rho/ROCK、PKC以及p-MLC、p-ERM蛋白表达显著降低，差异有统计学意义（ P﹤0.05）。与正常组相比，病毒组小鼠肺组织中ROCK1、PKC表达显著增加，p-MLC、p-ERM蛋白表达显著升高，差异有统计学意义（ P﹤0.05）。结论 XDY可通过抑制Rho/ROCK、PKC信号通路活化，抑制p-MLC蛋白表达，减少流感病毒在体内的复制，从而起到抗病毒作用。
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miR-335调控ROCK1对宫颈癌细胞作用的研究
目的 探讨miR-335调控Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)对宫颈癌细胞侵袭、迁移的影响.方法 选取人正常宫颈细胞系Ect1/E6E7、宫颈癌细胞系SiHa,分别转染miR-335 mimic、miR-335inhibitor、control mimic及control inhibitor,采用RT-PCR检测miR-335表达,Western blot检测ROCK1蛋白表达,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性.结果 与Ect1/E6E7细胞相比较,在SiHa中miR-335表达显著降低,ROCK1蛋白表达显著增高(P＜0.05).转染miR-335mimic后SiHa细胞中miR-335表达显著增高,ROCK1蛋白表达显著降低(P＜0.05);转染miR-335 inhibitor后SiHa细胞中miR-335表达显著降低,ROCK1蛋白表达显著增高(P＜0.05).转染miR-335mimic后SiHa细胞侵袭、迁移能力显著降低,而转染miR-335 inhibitor后则显著增高(P＜0.05).与转染controlmimic相比,共转染miR-335 mimic与野生型ROCK1-WT可使SiHa荧光素酶活性及ROCK1mRNA明显降低(P＜0.05).结论 miR-335可抑制宫颈癌细胞侵袭及迁移,可能通过调控ROCK1发挥作用.
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ShRNA对大鼠心肌细胞ROCK1和ROCK2表达的沉默作用
背景:已有研究发现,ROCK1和ROCK2参与了细胞的凋亡过程,由此假设下调ROCK1和ROCK2表达能抑制心肌细胞凋亡.目的:验证ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA转染能否有效沉默大鼠心肌细胞内ROCK1和ROCK2基因的表达,并筛选沉默效率高的shRNA.方法:以ROCK1和ROCK2为靶基因,分别构建了3个特异性shRNA重组质粒,转染这些shRNA后观察其对SD大鼠心肌细胞中ROCK1和ROCK2的沉默作用,并筛选出沉默效率佳的shRNA.结果与结论:Western Blot结果显示,与对照组相比,3个重组质粒ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染均能明显降低SD大鼠心肌细胞中ROCK1和ROCK2的表达(P < 0.05或P < 0.01),其中ROCK1-shRNA1和ROCK2-shRNA2的沉默效率高(P < 0.05),分别为(82.15±7.53)%和(89.42±5.81)%.这表明ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA转染能有效沉默大鼠心肌细胞内ROCK1和ROCK2基因的表达,并筛选出了沉默效率高的shRNA.
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MicRNA-124可能通过PI3K/Akt通路调节缺血脑组织细胞凋亡
目的 探讨脑缺血环境下对micRNA-124表达的影响.方法 采用Western blot、荧光定量PCR技术检测脑缺血后缺血皮质区不同时间点bax、bcl-2、caspase-3、ROCK1、micRNA-124蛋白或基因的表达水平.结果 缺血脑组织细胞micRNA-124基因表达量与调控细胞凋亡指标bax、bcl-2、caspase-3增高一致;bax、bcl-2、caspase-3、ROCK1活化片段蛋白表达量逐渐升高,在随后观察的时点内持续处于高表达状态(P＜0.01).结论 micRNA-124可能参与缺氧致脑组织细胞凋亡的过程,其机制可能是通过PI3K/Akt通路,激活或抑制bax、bcl-2、caspase-3、ROCK1其中一个或是多个基因调节缺氧脑组织细胞凋亡.
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miRNA-145通过下调ROCK1的表达抑制人牙周膜成纤维细胞的迁移
目的:研究微小核糖核酸-145(microRNA-145,miRNA-145)对人牙周膜成纤维细胞迁移的影响及其作用机制.方法:体外采用酶消化法培养人牙周膜成纤维细胞并传代,将其分为对照组和转染miRNA-145组,按50 ng/mL的miRNA-145浓度转染人牙周膜成纤维细胞,转染72 h后提取各组蛋白,用Western blot检测miRNA-145的靶蛋白ROCK1的表达水平的相关变化;采用划痕试验检测各组划痕细胞间距离的相关变化,选取划痕后的0h、24 h、48 h、72 h时间点,测量各时间点划痕细胞间的距离并计算平均值.结果:与对照组相比,转染miRNA-145后,miRNA-145靶蛋白ROCK1的表达量显著降低(p＜0.05);转染24 h、48 h后细胞间距离的均值大于对照组(p＜0.05).结论:miRNA-145可能通过下调ROCK1的表达抑制人牙周膜成纤维细胞的迁移.
关键词： microRNA-145 人牙周膜成纤维细胞 细胞迁移 ROCK1 -
电针刺激对局灶性脑梗死大鼠梗死灶周围皮质ROCK1与ROCK2表达的影响
目的 观察电针刺激对局灶性脑梗死大鼠神经功能及梗死灶周围皮质ROCK1和ROCK2表达的影响,初步探讨其对大脑缺血组织的保护机制.方法 将40只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和电针穴位组,每组10只.用改良Longa法制作大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,在大鼠麻醉苏醒后90 min对电针穴位组大鼠进行电针刺激,每天1次,连续14 d.分别在术后1、3、7、14 d时对各组大鼠进行改良神经功能缺损评分(mNSS).术后14d时,用免疫组化和蛋白质印迹法检测缺血侧大脑皮质中ROCK1、ROCK2蛋白的表达情况.结果 正常组和假手术组未出现神经功能缺损表现.术后7、14 d,电针穴位组mNSS评分较模型组下降(P＜0.05).免疫组化和免疫印迹结果显示,模型组ROCK1和ROCK2蛋白表达上调,电针穴位组ROCK1和ROCK2蛋白表达较模型组减少(P＜0.05).结论 电针刺激促进局灶性脑梗死后大鼠神经功能恢复,可能与其下调ROCK1和ROCK2蛋白表达有关.
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Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1促进肝癌细胞的转移
目的:探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)在肝癌中的表达及在肝癌侵袭中的作用.方法:荧光定量PCR(real-time PCR)检测肝癌及癌旁组织中ROCK1的mRNA表达水平,同时检测肝癌细胞系及正常人肝细胞中ROCK1mRNA表达水平,免疫组织化学染色(IHC)法检测肝癌及癌旁组织中ROCKI蛋白的表达量,并通过在肝癌细胞株中过表达及干扰ROCK1分析ROCK1蛋白对肝癌细胞转移的作用.结果:60对样本中有42对ROCK1的mRNA表达水平在肝癌组织中高于癌旁组织,免疫组织化学染色提示肝癌组织中ROCK1蛋白表达量高于癌旁组织.在体外肝癌细胞的功能实验中,过表达ROCK1能促进HepG2细胞的侵袭和转移,而干扰ROCK1的表达能减少SMMC-7721细胞的侵袭和转移.结论:ROCK1在肝癌组织中高表达,过表达ROCK1能促进肿瘤的侵袭及转移,ROCK1可能成为临床治疗中抑制肿瘤侵袭和转移的靶点.
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长链非编码RNA MALAT1在骨肉瘤细胞中的表达变化及其对细胞侵袭能力的影响
目的 探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录物1(lncRNA MALAT1)在骨肉瘤细胞中的表达变化及其对骨肉瘤细胞侵袭能力的影响.方法 ①采用qRT-PCR法检测骨肉瘤MG-63细胞及正常成骨细胞系hFOB 1.19中的lncRNA MALAT1表达.②将MG-63细胞随机分为MALAT1沉默组和MALAT1非沉默组,分别转染MALAT1-siRNA质粒及con-siRNA质粒;转染48 h,采用qRT-PCR法检测lncRNA MALAT1表达,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blotting法检测ROCK1蛋白表达.③将MG-63细胞随机分为对照组、MALAT1沉默组、MALAT1沉默+ROCK1对照组及MALAT1沉默+ROCK1过表达组,分别转染con-siRNA质粒、MALAT1-siRNA质粒、MALAT1-siRNA+pcDNA质粒、MALAT1-siRNA+oe-ROCK1质粒;转染48 h检测各组ROCK1蛋白表达和细胞侵袭能力.结果 ①MG-63细胞lncRNA MALAT1相对表达量高于hFOB 1.19细胞(P<0.01).②MALAT1沉默组lncRNA MALAT1相对表达量、细胞侵袭能力及ROCK1蛋白相对表达量均低于MALAT1非沉默组(P均<0.01).③对照组、MALAT1沉默+ROCK1过表达组ROCK1蛋白表达及细胞侵袭能力均高于MALAT1沉默组、MALAT1沉默+ROCK1对照组(P均<0.01).结论 骨肉瘤细胞lncRNA MALAT1表达升高;lncRNA MALAT1可能通过调控ROCK1表达而参与骨肉瘤细胞侵袭.
关键词： 骨肉瘤 长链非编码RNA 肺腺癌转移相关转录物1 细胞侵袭 ROCK1 -
六味地黄丸对糖尿病肾病大鼠肾脏组织RhoA/ROCK1表达的影响
目的:观察六味地黄丸对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)大鼠肾脏组织RhoA/ ROCK1表达的影响.方法:将36只SD雄性大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、六味地黄丸组(六味组)各12只,采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(45 mg·kg-1)的方法建立DKD大鼠模型.造模成功后,空白组、模型组灌服生理盐水,六味组给予六味地黄丸.8周后检测24小时尿蛋白定量、血清白蛋白(serum albumin,ALB)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,ALT)、血肌酐(serum creatinine,Scr)等水平;测量大鼠体质量、肾脏质量,计算肥大指数;苏木精-伊红染色、过碘酸-雪夫氏染色观察肾脏模型组织;酶联免疫吸附法测定检测肾脏组织RhoA、ROCK1的水平.结果:与空白组比较,模型组24小时尿蛋白定量升高,ALB下降,体质量下降,肥大指数升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,六味组24小时尿蛋白定量显著下降,ALB显著升高,体质量升高,肥大指数降低,且RhoA、ROCK1的表达水平显著下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).空白组肾小球、肾小管、肾间质结构大小等均正常完整;六味组与模型组均有不同程度的肾脏病理改变,其中六味组较模型组病理改变减轻.结论:六味地黄丸可能通过影响DKD大鼠肾脏组织RhoA、ROCK1的表达,降低蛋白尿,减轻肾脏病理损害,且对肝肾功能无明显影响.
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丹参酮ⅡA对压力负荷增加大鼠心肌纤维化的改善作用
目的:观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对压力负荷增加大鼠心肌纤维化的改善作用.方法:60只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组,n=8)和手术组(n=52),手术组均行腹主动脉缩窄术制备压力负荷增加心肌纤维化模型,术后4周,存活的32只成模大鼠中8只留作模型组(Model组),余24只分为TanⅡA低剂量组(L-TanⅡA 组,10mg/Kg/天)、TanⅡA高剂量组(H-TanⅡA组,20mg/Kg/天)及阳性对照药物卡托普利组(Captopril组,100mg/Kg/天),每组8例.给药4周后,检测5组大鼠心肌肥厚指数和心肌组织形态、心肌羟脯氨酸(HYP)含量、心肌组织Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和核转录因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白含量.结果:与Sham组比较,Model组大鼠的心肌肥厚指数、心肌HYP含量及心肌组织中ROCK1、TGF-β1和NF-κB p65蛋白含量均显著升高(P均<0.01),组织病理学改变明显;与Model组比较,L-TanⅡA和H-TanⅡA组心肌肥厚指数、心肌HYP含量及心肌组织中ROCK1、TGF-β1和NF-κB p65蛋白含量均降低(P<0.05或P<0.01),组织病理学改变明显.结论:TanⅡA能改善压力负荷增加大鼠心肌纤维化,此作用可能与其抑制ROCK1表达,下调TGF-β1和NF-κB p65水平有关.
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慢性阻塞性肺疾病相关性肺动脉高压患者外周血单核细胞Rho激酶水平测定
目的:通过比较Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 1,ROCK1)在不同研究对象外周血单核细胞中的表达规律,探讨RhoA/Rho激酶信号通路在慢性阻塞性肺疾病相关肺动脉高压中的作用.方法:选取2010年12月至2011年4月在长沙市第三医院体检的健康不吸烟者10人(A组),同期同院呼吸内科住院的慢性阻塞性肺疾病不合并肺动脉高压者10人(B组),以及同期同院呼吸内科住院的慢性阻塞性肺疾病相关性肺动脉高压患者10人(c组).分别抽取各研究对象静脉血20 mL,以percoll非连续密度梯度离心沉降法分离单个核细胞,并培养使单核细胞贴壁.刮下贴壁细胞裂解后取上清液,用ELISA法分别检测3组ROCK1水平.所有研究对象经肺功能仪检查肺功能,以彩色多普勒测定肺动脉收缩压.结果:1)3组研究对象中c组肺动脉收缩压显著高于A组与B组,(均P＜O.01).2)3组研究对象中c组外周血单核细胞ROCK1水平高于A、B两组(均P＜0.05)；B组外周血单核细胞ROCK1水平高于A组(P＜0.05).3)3组研究对象中外周血单核细胞中ROCK1水平与肺动脉收缩压呈正相关关系(r=0.661,P＜0.05).4)3组研究对象中外周血单核细胞中R.CK1水平与肺功能FEV1％无相关关系(r=0.131,P＞0.05).结论:Rho激酶在肺动脉高压发病机制中具有重要意义；单核细胞中ROCK1水平可能反映慢性阻塞性肺疾病相关肺动脉高压患者的病情严重程度.
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RhoA/ROCK1在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义
目的 探讨RhoA/ROCK1在多发性骨髓瘤(MM)中的表达及其临床意义.方法 以20例免疫性血小板减少症患者骨髓为对照组,46例MM患者骨髓为实验组,并根据骨质破坏程度分为轻度组(1、2级)和严重组(3级),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测骨髓上清液中RhoA、ROCK1蛋白的表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测骨髓单个核细胞中RhoA、ROCK1 mRNA的表达水平,并分析MM患者RhoA、ROCK1与临床参数间关系.结果 实验组的RhoA、ROCK1的蛋白与mRNA表达水平高于对照组(P<0.05).3级的RhoA的蛋白与mRNA水平高于1、2级(P<0.05).3级中ROCK1的mRNA表达水平高于1、2级(P<0.05),蛋白的表达水平在两组间有升高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05).RhoA与αCa、骨质损害分级、β2-mg、ISS分期、D-S分期呈正相关,与Hb呈负相关;ROCK1与αCa、骨质损害分级、β2-mg呈正相关,与Hb呈负相关.结论 RhoA/ROCK1表达水平在MM患者中呈高表达状态,并与MM骨质破坏进展程度呈正相关,这可能为骨髓瘤骨病的临床治疗提供新线索.
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ROCK1在地塞米松抑制中性粒细胞释放和单核细胞黏附中的作用
目的 探讨ROCK1在地塞米松(dexamethasone,Dex)抑制中性粒细胞释放和单核细胞黏附中的作用.方法 检测地塞米松和法舒地尔( Fasudil,Fas)抑制佛波脂(PMA)诱导的中性粒细胞释放超氧化物阴离子(O2-)和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)以及U937单核细胞黏附的程度,并检测ROCK1和RhoA的表达和活性改变.此外观察糖皮质激素受体拮抗剂——米非司酮(mifepristone,M)和蛋白质合成抑制剂——放线菌酮(cycloheximide,C)对地塞米松这些作用的影响.实验分组:对照组、PMA组、PMA+Dex组、PMA+ Dex+M组、PMA+ Dex+C组和PMA+ Fas组.结果 地塞米松可以显著抑制中性粒细胞释放O2-和MPO[(1.25 ±0.10) vs (1.95 ±0.10)；(1.07±0.06) vs (1.75±0.08),P＜0.05],而法舒地尔对其无明显抑制作用(P＞0.05).地塞米松和法舒地尔均可抑制U937细胞黏附[(0.09±0.01) vs (0.08±0.01) vs (0.28 ±0.06),P＜0.05].米非司酮和放线菌酮并不能影响地塞米松的这些作用(P＞0.05).结论 地塞米松以非ROCK1依赖方式抑制中性粒细胞释放；以ROCK1依赖方式通过非基因组效应抑制U937单核细胞的黏附.
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地塞米松和法舒地尔对油酸致小鼠急性肺损伤伤情的影响
目的 探讨地塞米松和法舒地尔(fasudil)对油酸致小鼠急性肺损伤的影响及ROCK(Rho-associated coiledcoil forming kinase)在其中的作用.方法 采用油酸致C57小鼠急性肺损伤模型,观察伤后24 h各组肺组织病理及肺含水率、ROCK活性、ROCK1和ROCK2蛋白含量及IL-1β mRNA的变化.结果 地塞米松和法舒地尔均可显著减轻油酸肺组织中炎性细胞浸润、肺出血等病理变化,降低肺含水率(P<0.05),抑制肺组织ROCK活性(P<0.05).降低IL-1β mRNA的表达水平;地塞米松对ROCK1的表达水平无影响,但可增强ROCK2的表达,法舒地尔对ROCK1和ROCK2的表达水平均无影响.结论 地塞米松和法舒地尔均可通过抑制肺组织内炎性细胞浸润明显减轻油酸引起的急性肺损伤,而地塞米松的治疗作用可能与对其ROCK活性的抑制有关.
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尪痹片对关节炎小鼠骨髓RhoA和ROCK1的影响
目的 探讨尪痹片对关节炎小鼠骨髓细胞悬液RhoA、ROCK1的影响.方法 雄性昆明小鼠50只,随机分为5组,即空白组、模型组、尪痹片组、仙灵骨葆组、甲氨蝾呤组,每组10只.构建小鼠佐剂关节炎模型,给药28 d后取小鼠骨髓细胞悬液,检测RhoA mRNA、ROCK1 mRNA、RhoA、ROCK1蛋白的表达.结果 模型组的RhoA mRNA(1.96士0.02)、ROCK1 mR-NA(2.22±0.01)、RhoA蛋白(0.36±0.02)、ROCK1蛋白(0.61±0.02)均较空白组有明显升高;尪痹片组的RhoA mRNA(0.68±0.02)、ROCK1 mRNA(1.21±0.03)均低于模型组和仙灵骨葆组,同时RhoA蛋白(0.66±0.03)、ROCK1蛋白(1.18±0.03)表达均高于其他各组.结论 尪痹片抑制关节炎症的机制可能与下调骨髓中某些细胞的RhoA mRNA、ROCK1 mRNA相关,增加骨密度的机制可能与上调骨髓中某些细胞RhoA蛋白、ROCK1蛋白相关.
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横纹肌肉瘤组织中ROCK1的表达及预后分析
目的:探讨Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(Rho associated coiled coil forming proteinkinase l,ROCK1)在横纹肌肉瘤组织中的表达及与患者预后的关系.方法:收集36例横纹肌肉瘤组织与23例正常横纹肌组织,运用免疫组织化学技术检测ROCK1蛋白的表达水平;运用Kaplan-Meier、Log-rank检验与Cox回归分析方法分析ROCK1蛋白表达与患者预后的关系.结果:横纹肌肉瘤组织中ROCK1的表达率为72.2％,明显高于正常横纹肌组织的表达率(4.3％),差异具有统计学意义(χ2=26.3,P<0.05).患者预后分析显示,ROCK1低表达患者预后明显好于高表达患者.ROCK1蛋白表达水平、组织学类型、淋巴结转移以及远处转移都是影响横纹肌肉瘤患者预后的相关因素(P值均<0.05).结论:ROCK1在横纹肌肉瘤中呈高表达趋势,并且高表达ROCK1的患者预后较差.
