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献血员、肝炎患者TTV DNA检测及部分TTV基因序列分析
目的:了解献血员、肝炎患者中的输血传递病毒(TTV)感染状况及基因型别.方法:设计合成引物采用半套式聚合酶链反应(hemi-nestPCR)方法,对195份献血员血清、72份不同型别的肝炎患者血清进行了TTVDNA的PCR检测,并对部分阳性株进行序列测定及计算机分析.结果:①在血清丙氨酸转氨酶(ALT)异常,HBsAg及抗HCV阴性的99份献血员血清标本中,检出TTVDNA阳性标本36份,阳性检出率为36.3%;而在ALT正常的96份献血员血清标本中,检出TTVDNA阳性标本16份,阳性检出率为16.6%,明显低于ALT异常献血者.②在72例不同肝炎患者中,共检出39例TTVDNA阳性血清,总检出率为54.16%,在非甲-非庚型肝炎患者中TTVDNA阳性率为87.5%,而在明确诊断为甲-庚型肝炎的患者中TTVDNA阳性率为50%,两组相比差异显著(P<0.05).对8株阳性株序列分析结果显示,测序的8个分离株与9个G1、G2代表株核酸的同源性为60.4%～99.1%,氨基酸的同源性为55.4%～98.6%.经系统发育分析表明,这8个TTV分离株中有7株可分属于G1、G2两个基因型的5个亚型,而另1株为G1型的新亚型.结论:①献血者中存在TTV感染,提示TTV可以导致感染个体的肝功能异常,TTV可能与HBV感染相似,亦存在"健康携带状态".②非甲-非庚型肝炎患者的TTV感染率明显高于明确病原的甲-庚型肝炎患者,TTV感染与肝炎有关,可能是非甲-非庚型肝炎的病原之一.③8个TTV分离株中7个分属于G1、G2两个基因型中的5个亚型,另有1株为G1型的新亚型.
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原因不明性肝炎患者血清中TTV DNA的检出及其临床意义
目的:研究原因不明性肝炎患者输血传播性病毒(Transfusion transmitted virus,TTV)感染的检出状况及其临床意义.方法:在TTV ORF1保守区设计引物,建立巢式聚合酶链反应(Nested-PCR),检测50例原因不明性肝炎、40例健康人与30例乙肝病毒携带者血清中TTV DNA,比较TTV DNA阳性的肝炎患者的临床特征.结果:50例原因不明性肝炎中16例TTV DNA呈阳性(占32%),比健康人群(2/40,5%)与乙肝病毒携带者(2/30,6.7%)血清中TTV DNA检出率高(P＜0.05),16例TTV DNA阳性患者中以慢性肝炎占多数(12/16,75.5%),临床表现为反复、持续ALT异常.结论:TTV 在原因不明性肝炎中感染率明显高于其他人群,其可能是本地区原因不明性肝炎的致病因子.
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血液透析患者输血传播性病毒感染情况分析
目的:了解维持性血液透析患者输血传播性病毒(TTV)的感染状况.方法:测定91例血液透析患者TTV抗体,对抗体阳性患者的血浆TTV进行聚合酶链反应(PCR),对其产物进行克隆、测序分析.结果:共有12例TTV抗体呈阳性(占13.2%),其中5例(占5.5%)PCR阳性,TTV与HBV或(和)丙型肝炎(HCV)重叠感染者8例(占8.8%),TTV合并HCV感染3例(占3.3%),同时合并HBV和HCV 4例(占4.4%),TTV单独感染者4例(占4.4%).有输血史者TTV 感染明显高于无输血史者.结论:血液透析患者存在TTV感染,TTV可以与HBV和HCV重叠感染,部分TTV感染可能与输血有关.
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TTV研究现状与进展
随着分子生物学技术的发展,甲～庚型肝炎病毒相继被发现,但在临床病毒性肝炎患者中有相当一部分(5%～10%)病例无法用已建立的甲～庚型肝炎的实验室方法进行病原学分析,所以被统称为非甲～非庚型肝炎,或被称之为病毒性肝炎-病因未明.
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大学生中TT病毒感染状况调查
目的:调查TTV在大学生中的感染情况.方法:随机抽取1998年入校新生体检.结果:检查血样70份,TTV阳性14例;其中肝功正常,HBsAg阴性30例,TTV阳性5例,占16.67%;肝功正常,HBsAg阳性共40例,TTV阳性9例,占22.50%.结论:大学生中存在着严重的TTV感染.TTV感染以非血源的方式传播.
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非甲非戊型肝炎患者TT病毒感染的检测
目的了解非甲非戊型肝炎患者TT病毒感染状况.方法采用套式PCR方法对44份临床诊断为急慢性非甲非戊型肝炎患者的血清标本,进行TT病毒检测.结果 14例TTV-DNA阳性,检出率31. 8%(14/44).对TTV-DNA阳性标本的PCR产物进行克隆后测序,结果表明该序列与日本株相应位置核苷酸序列同源性为98%.结论推测TT病毒可能为临床急慢性非甲非戊型肝炎病因之一.
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肝细胞癌患者血清TT病毒感染检测分析
目的调查TT病毒在肝细胞癌患者及南通地区正常人群中的感染状况.方法采用巢式聚合酶链反应(n-PCR)法,对145例肝细胞癌患者、143例献血员和375例体检者血清进行了检测分析.结果 145例肝细胞肝癌患者中有48例TTV DNA阳性(33.1%),献血员中有13例TT病毒DNA阳性(9.1%),正常体检人群中有39例TT病毒DNA阳性(10.4%).肝细胞癌患者中TT病毒感染率明显高于献血员和正常人群.结论 TT病毒与肝细胞癌发生有一定的关系,是导致肝癌的一个危险因素.
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预防输血传播病毒的感染
TT病毒属于首次感染人类的圆环病毒,全长3 852个核苷酸,目前通常分成6个基因型.临床感染引起病毒性肝炎,但症状各异;PCR是主要诊断方法.TT病毒感染分布广泛,血制品被认为是主要传播途径;预防措施以加强输血和血制品管理为主,同时须阻断粪→口感染途径.目前要深化TT病毒调查和研究,以控制TT病毒的感染.
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非肝炎口腔科患者血清及唾液中HGV 和TTV感染率的调查
目的检测杭州地区非肝炎口腔科患者血清和唾液标本中庚型肝炎病毒(HGV)和输血传播病毒(TTV)感染率,进一步了解HGV和TTV传播途径和感染的高危人群.方法分别从上述患者血液和唾液标本中提取RNA和DNA,采用逆转录-套式聚合酶链反应(RT-Nested PCR)和半套式聚合酶链反应(Hemi-nested PCR)分别检测HGV5'-NCR RNA和TTV N22区DNA,部分HGV和TTV扩增产物克隆后进行核苷酸序列测定.结果226例血清标本中,仅HGV阳性27例(11.9%)、仅TTV阳性21例(9.3%)、HGV和TTV均阳性7例(3.1%);226例唾液标本中,仅HGV阳性10例(4.4%)、仅TTV阳性9例(3.9%)、HGV和TTV均阳性2例(0.9%);未见血清标本HGV和/或TTV检测结果阴性而唾液标本阳性者.2例患者血清标本及唾液标本HGV和TTV均阳性的扩增产物分别与报道的HGV和TTV核苷酸序列比较,同源性为88.65%～91.49%和65.32%～66.67%,但各自的血清标本与唾液标本HGV和TTV扩增产物同源性分别高达98.58%～99.29%和98.65%～98.20%.结论杭州地区非肝炎口腔科患者HGV或TTV感染率均较高,其中部分携带病毒的患者唾液中均可检出HGV或TTV,提示HGV或TTV可能存在唾液传播途径,口腔科医师则是HGV或TTV感染的高危人群.
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UTR PCR技术对婴儿中TT病毒感染情况的研究
目的对九江市健康婴儿血清中TTV感染情况进行检测,以期阐明TTV在婴儿中的感染状况及传播途径.方法用改良UTR PCR法,检测婴儿血清中TTV DNA.结果:用改良UTR PCR检测86例婴儿中51例(53.5%)TTV DNA为阳性,其中＜30日龄、1～6月龄和7～12月龄婴儿中,TTV DNA检出率分别为0、33.3%、95.0%.结论九江市95%的半岁以上婴儿感染有TT病毒,婴儿中TTV的原发感染可能是出生后从环境中获得,并且随其年龄增长感染逐渐增多.
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滤纸片干血斑检测TT病毒DNA
目的建立一种快速、方便、准确的方法检测TT病毒的基因片段.方法采集被检者全血滴在经EDTA--蛋白酶预处理的滤纸片上,室温干燥后,密封并保存于-20℃,然后进行PCR检测;同时取血清用传统方法作对照.结果在相同时间内,本法测得的结果,与传统方法所得结果无异.结论该方法具有特异、敏感、方便等特点,用此法检测TTV DNA是切实可行的.
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肝病患者肝组织及血清中TT病毒对比分析
TT病毒是继甲-庚型肝炎病毒后新近发现的又一种肝炎相关病毒[1].其在肝病患者、血液透析者、静脉药瘾者及职业供血者血清中都有较高的检出率[2,3],但其在肝组织中的检测鲜见报道.为明确TT病毒的致病性及嗜肝性,我们采用套式PCR对54例肝病患者肝组织及血清进行了TTV-DNA检测,现对比分析如下.
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TT病毒在人类肝病中的感染状况分析
目的了解各类肝病患者TT病毒(transfusion-transmitted virus,TTV)的感染率,分析TT病毒与已知肝炎病毒的交叉感染情况,探讨TT病毒与肝硬化、肝癌的关系以及是否是非甲～非庚型肝炎患者的主要致病因子.方法采用微板双探针核酸杂交酶免疫方法对TTV基因扩增产物进行定性检测.结果东营地区不同人群TT病毒阳性率分别为,甲肝患者37.50%(6/16),乙肝患者40.00%(18/45),丙肝患者44.44%(24/54),戊肝患者31.25%(10/32),不明原因转氨酶升高患者25.93%(7/27),肝硬化患者47.06%(24/51),肝癌患者31.91%(15/41).结论东营地区TT病毒存在与已知病毒性肝炎的合并感染,并且血源性传播肝炎的TT病毒感染率明显高于健康志愿人群.是已知肝炎病毒的辅助因子,并可能是肝硬化潜在的致病因子.
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输血相关病毒(TTV)研究的现状
在人类目前已认识的甲、乙、丙、丁、戊和庚型肝炎病毒(HGV)之外,似存在其他的非甲～非庚型肝炎致病因子.1997年12月,日本学者Nishizawa et al[1]应用代表性区别分析(RDA)技术,从1例输血后非甲～非庚型肝炎病人(TT)血清中获得1个新的DNA病毒阳性克隆(N22),将此病毒核苷酸序列与GenBank中已登记的序列比较,未发现相同的基因序列,分子流行病学的研究证实了N22与输血后肝炎有一定的相关性,表明它有可能是一种新型的肝炎相关病毒,遂以病人名字命名为TT病毒,同时又与经输血传播病毒(Transfusiontransmitted virus,TTV)3个英文名词相巧合,故暂时命名为TTV.从而揭开了TTV研究的序幕,并在国内外掀起研究的热潮.本文就有关TTV研究的现状作一概述.
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献血者中TT病毒DNA及IgG抗体检测结果的探讨
目的:了解献血者中输血传播病毒(TTV)的感染状况.方法:应用套式PCR(nested-PCR)和ELISA方法同步检测了388份献血者、168份非肝炎住院患者(对照组)的血清TTV DNA和抗TTV IgG.结果:TTV基因检出率分别为献血者15.46%(ALT正常组13.37%,ALT异常组41.38%,P<0.05),对照组24.40%(ALT正常组23.78%,ALT异常组50.00%,P<0.05);556份受检血清中TTV DNA检出率为18.17%,ALT正常组16.60%,ALT异常组42.31%,P<0.05两者存在显著性差异.抗TTV IgG检出率分别为献血者13.14%(ALT正常组11.70%,ALT异常组31.03%,两者存在显著性差异,P<0.05),对照组为27.98%(ALT正常组26.83%,ALT异常组75%,P<0.05),献血者组与对照组相比TTV DNA及抗TTV IgG均存在显著性差异(P<0.05).结论:献血者组和对照组中存在TTV感染,TTV感染与ALT异常有关,提示TTV可能有一定的致病性.TTV感染和输血安全性有待进一步研究.抗TTV IgG可用于检测TTV感染.
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不同人群TT病毒的检测及部分核苷酸序列分析
目的:了解不同人群TTV感染状况及基因型别.方法:采用TTV(N22)区核苷酸序列设计引物,建立半巢式(nPCR)方法,对健康人群、不同型别肝炎病人、非甲-非戊型肝炎、肝硬化患者等7组人群血清进行TTV DNA检测,并对部分阳性标本进行序列测定和分析.结果:TTV在非甲一非戊型肝炎、肝硬化患者、丙型肝炎、急性甲型肝炎、急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎和健康人群中感染率分别为75.00%(15/20)、75.oo%(27/36)、61.90%(13/21)、58.06%(18/31)、52.78%(38/72)、45.61%(26/57)和38.89%(28/72).肝硬化患者及非甲-非戊型肝炎感染率明显高于健康人群(P＜0.01),也明显高于急、慢性乙型肝炎患者(P＜0.05).5个阳性株序列分析结果显示:4株属于G1基因型,1株属于c2基因型.结论:TTV在河北地区肝病患者中有较高的感染率,TTC感染与不明原因ALT升高有一定的关系,基因型以G1型为主.
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河南TT病毒全基因序列测定及TTV感染检测方法的研究
目的: 为了分析河南省TTV的基因结构、特征及基因变异,建立适合我国人群的诊断方法.方法: 采用巢式聚合酶链式反应(PCR)技术从河南省血液中心献血员TTV阳性血清中扩增TTV全基因;用PCR方法扩增ORF2片段,进行原核表达,并转化大肠杆菌,进行诱导表达.用SDS-PAGE分析表达产物.结果: 在国内较早地克隆测定了一株TTV河南分离株的基因序列;建立了检测TTV感染的PCR检测方法;在国内较早地表达出TTV重组蛋白抗原,抗原具有良好的活性.结论: 用表达的抗原初步建立了检测血清抗-TTV IgG抗体的间接ELISA方法,可有效地应用于TTV感染的检测.
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泛昔洛韦治疗TTV型肝炎的临床研究
目的:观察泛昔洛韦治疗TTV型肝炎的临床疗效.方法:将40例TTV型肝炎患者随机分成治疗组和对照组各20例;治疗组:泛昔洛韦250mg/次,3次/d;对照组:常规护肝治疗.疗程均为3个月.结果:治疗1个月后,对照组:ALT、AST复常率20.0%,TTV DNA转阴率0%;治疗组:ALT、AST复常率达70.0%,TTV DNA转阴率达60%.治疗2个月后,对照组:ALT、AST复常率30.0%,TTVDNA 0%;治疗组:ALT、AST复常率达90.0%,TTV DNA阴转率达85.0%.治疗3个月后,对照组:ALT、AST复常率40.0%、TTV DNA阴转率0%;治疗组:ALT、AST复常率达95.0%,TTV DNA阴转率95.0%.两组患者治疗前后比较,差异显著(P＜0.05).结论:泛昔洛韦能有效改善TTV型肝炎患者的肝功能,且对TTV DNA阴转有较好的作用.
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TTV单独及重叠HBV感染的临床研究
目的:了解输血传播病毒(Transfusion Transmitted Virus,TTV)单独及重叠乙肝病毒(HBV)感染的临床特征,探讨其致病性.方法:用套式聚合酶链反应检测血清中TTV DNA,用ELISA法和/或PCR法对其他肝炎病毒标志物进行血清学检测.结果:肝病患者TTVDNA总的阳性率为21.9%(107/489).从临床分型来看,TTV单独感染者以急性肝炎(AH)为多见,占75%(12/16),明显高于重叠HBV感染者13%(2/15)(x2=11.9,P＜0.01);而重叠感染者以慢性肝炎(CH)居多,占67%(10/15),明显高于单独感染者19%(3/16)(x2=7.3,P＜0.01).结论:TTV单独感染多表现为急性肝炎,重叠HBV感染时对病情的影响不明显,提示TTV具有一定的致病性.
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TTV感染与原发性肝癌关系的病例对照研究
目的:了解TTV与PHC的关系.方法:对82例PHC、40例非肝癌恶性肿瘤病人(对照组1)、40例正常人(对照组2)进行病例对照研究.结果:PHC组中,HBsAg、抗-HBe、HBeAg、HBV-DNA、HBV-M的阳性率分别为75.6%、51.2%、19.5%、28.0%、82.9%,显著高于两对照组,TTV-DNA阳性率26.8%(22/82)也显著高于两对照组.HBV感染率(82.9%)显著高于TTV的感染率(26.8%),在14例HBV阴性的PHC中,TTV-DNA阳性率达35.7%(5/14).PHC病人中,若按HBV与TTV感染情况进行年龄分层,发现有HBV或TTV感染的病人,其发病年龄有提早的倾向;单纯HBV感染和与TTV混合感染其比值比(OR值)较两对照组明显升高.结论:广东地区TTV感染与PHC有关,TTV可能是PHC的一个致病因子,但HBV感染仍是主要的因素.
