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孤儿核受体RORs的病理生理作用及其调控机制
核受体是一类配体依赖的转录因子超家族.视黄酸相关孤儿受体(retinoid-related orphan receptors,RORs),又称为NF1R,因在基因序列上与视黄酸受体和视黄酸X受体类似而得名.RORs亚家族主要包括RORα、RORβ和RORγ等三个成员.作为核受体家族的一个重要成员,RORs通过调控相关基因表达,在机体发育、免疫反应、生物节律以及细胞代谢等多种生理过程中发挥重要作用.新近研究发现,RORs表达或功能异常还影响诸多病理过程,主要包括肿瘤、免疫炎症性疾病、动脉粥样硬化等心血管疾病.关于RORs的大量研究拓宽了我们对核受体家族生物学特征及其病理生理作用的认识及理解.本综述主要讨论RORs亚家族各成员的生物学特征及其在机体内的病理生理作用及机制.
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由"程序性细胞死亡"透视2002年诺贝尔生理学或医学奖
瑞典卡罗林斯卡医学院于2002年10月7日宣布,将本年度诺贝尔生理学或医学奖授予英国科学家悉尼*布雷内(Sydney Brenner)、美国科学家罗伯特*霍维茨(Robert Horvitz)和英国科学家约翰*苏尔斯顿(John Sulston),以表彰他们在器官发育及程序性细胞死亡的基因调控方面做出的贡献[1].
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寄生虫microRNA研究新进展
microRNA(miRNA)是一类19～24nt左右的内源性单链非编码RNA,其可与特定的mRNA结合,从而抑制靶mRNA的翻译或导致靶mRNA降解,在寄生虫生长发育、形态性别分化、营养代谢及致病等过程中发挥着至关重要的基因表达调控作用.虽然目前寄生虫miRNA的相关研究已取得新进展,但参与寄生虫与宿主相互作用的关键miRNA尚乏报道.本文就近年来寄生虫miRNA的研究进展作一综述,以期为寄生虫致病机制等的深入研究提供思路.
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MicroRNA在慢性淋巴细胞白血病中的研究进展
微小RNA(microRNA,miRNA)是一类长约22个核苷酸的内源性、非编码单链RNA分子,广泛存在于真核生物中,并在多种物种间高度保守.它可通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA并与之3'端非翻译区(3 'UTR)结合,通过降解靶mRNA或抑制其翻译等方式,调节基因的转录后表达水平,影响生物个体生长、发育、疾病发生等过程.慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)是一种B淋巴细胞恶性克隆增殖性疾病,起病隐袭,在发病个体、疾病进展、治疗反应、临床预后等方面存在很大的异质性.目前,越来越多的研究显示,miRNA的突变或者异常表达与CLL的发生、进展、预后、药物疗效等密切相关.复杂多样的miRNA在CLL中可能扮演着癌基因或抑癌基因的角色,某些miRNA甚至有可能成为CLL新的生物学标记物或者治疗靶点.本文就相关miRNA分子在CLL的发病、预后、治疗及耐药问题中的研究进展做一综述.
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MicroRNA与人类血液系统疾病的研究进展
microRNA(miRNA)是一类长约22 nt(19-25 nt)在进化方面属保守的非编码RNAs,miRNA与靶mRNA3'端非翻译区序列不完全互补结合,抑制翻译,在转录后水平调控靶基因的表达.miRNA在人体内发挥着非常广泛而重要的调控作用.本文对miRNA的特征、功能特点及在人类血液系统肿瘤发生中的作用等方面的研究进展进行综述.
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FLT3基因3'-非翻译区-荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定
为分析FMS样酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine kinase 3,FLT3)基因3'-非翻译区(3'-untranslated region,3'-UTR)可能的微小RNA(miRNA)调控位点,构建FLT3基因3'-UTR-荧光素酶报告载体,与miRNA共转染293T细胞,分析miRNA对其调控作用.采用PCR方法从HepG2细胞基因组DNA中扩增FLT3基因3'-UTR区序列,插入经PstI和FcoRI双酶切的经过改造的荧光素酶报告载体pGL3-control(pGL3-control-m);通过Target Scan 5.1软件预测可能与FLT3基因3'-UTR作用的miRNA;采用FuGENE(R) HD转染试剂包裹荧光素酶报告重组子和miRNA真核表达载体共转染293T细胞,双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性.结果表明,成功构建了含有804 bp的FLT3基因3'-UTR序列的荧光素酶报告重组子,通过酶切和基因测序的方法鉴定正确;miRNA靶位点预测显示,FLT3基因3'-UTR可能是miRNA-15a、miRNA-15b、miRNA-16、miRNA-195、miRNA-424、miRNA-497的作用靶点;与对照组相比,miRNA-15a、15b、195可使荧光素酶报告重组子的荧光素酶活性降低20%左右.结论:成功构建了FLT3基因3'-UTR-荧光素酶报告载体,而niRNA-15a、miRNA-15b、miRNA-195可抑制其荧光素酶活性.
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胚胎期造血干细胞来源及其调控
胚胎干细胞是体内各种组织包括造血组织干细胞的来源,在胚胎干细胞向造血干细胞的分化及造血干细胞自身的发育过程中有着复杂的基因调控.原始造血产生于卵黄囊已被普遍认可,但永久造血产生于何处仍有争论.目前认为,至少有两个独立的部位与永久造血有关,即卵黄囊和胚内的PAS/AGM区.对胚胎期造血及其调控的研究不仅有助于探明某些血液病的发病机制,而且在基因治疗和造血干细胞工程方面也将具有重大作用.
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心理应激对大鼠淋巴细胞凋亡及基因调控的影响
目的:探讨不同心理应激强度对大鼠外周血淋巴细胞凋亡及其调控基因Bcl-2、Bax基因表达的变化.方法:健康的雄性SD大鼠24只,随机分为对照组、中等强度心理应激组、高强度心理应激组,每组8只.分别对大鼠进行3周高、中等强度噪音诱发的心理应激,采用流式细胞仪测定各组淋巴细胞凋亡的情况以及用免疫组织化学法观察调控基因Bcl-2、Bax基因表达的变化.结果:①高强度应激组大鼠淋巴细胞群中存有典型的凋亡细胞,且凋亡细胞发生率明显高于对照组,而中等强度应激组大鼠淋巴细胞凋亡率不显著.②高强度心理应激组大鼠淋巴细胞的Bcl-2表达下调,而Bax的表达量明显增加.结论:高强度心理应激过程中存在着免疫细胞凋亡,而且其发生与相关调控基因的表达一致.
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自噬、凋亡与肿瘤
20世纪60年代,人们开始了对自噬的研究.自噬是一些相关基因调控的真核细胞降解细胞器和蛋白质的高度进化保守的过程.自噬普遍存在于酵母、线虫、果蝇、人体等有机体中,但人们对自噬的认识并不深入.1997年自噬基因的发现促进了人们对自噬本质及其功能的认识[1].由于自噬的过程和调控网络十分复杂,且自噬和凋亡密切相关,其在肿瘤中起着十分重要的作用,本文就自噬、凋亡与肿瘤的关系作一综述.
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HTLV-1 Tax 蛋白对T细胞中HMGB1调控的影响
目的探讨人T淋巴细胞白血病1型病毒（human T-cell leukemia virus 1，HTLV-1）Tax蛋白对人高迁移率族蛋白1（ high mobility group box 1，HMGB1）基因转录调控的影响。方法提取TaxN和TaxP细胞总RNA和蛋白质，通过real-time PCR和Western blot分析HMGB1 mRNA和蛋白质的表达情况；利用脂质体介导方法，将6个含有不同长度HMGB1调控序列的pGL3-HMGB1-luc瞬时转染至TaxN 和 TaxP 细胞，观察 HMGB1基因在不同 T 细胞中的转录活性；pCMV-Tax 与 pGL3-HMGB1-luc瞬时共转染至Jurkat细胞，观察Tax蛋白对HMGB1基因的转录调控影响；染色体免疫共沉淀（ ChIP）找寻Tax蛋白影响HMGB1基因转录调控的区段。结果 TaxP细胞中HMGB1 mRNA和蛋白质表达水平高于TaxN细胞。 TaxN和TaxP细胞中HMGB1调控趋势基本相似，均表现出3号质粒（pHLuc3，含有-504～＋83 HMGB1区段）的相对荧光素酶活性（HMGB1/neo）高，但是6号质粒（含有-1163～＋83 HMGB1区段）却表现出 TaxP 细胞 HMGB1的转录活性明显高于 TaxN 细胞。pCMV-Tax与pGL3-HMGB1-Luc报告基因共转染到Jurkat细胞也显示，6号质粒（pHLuc6）中Tax促进HMGB1基因的转录。 ChIP分析证实了Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段。结论-504～-383可能是HMGB1基因转录激活的关键启动子区，Tax蛋白可能富集在HMGB1的-1163～-1043区段促进HMGB1基因转录。
关键词： 成人T细胞白血病病毒1型 TAX蛋白 高迁移率族蛋白1 T淋巴细胞 基因调控 -
NF-κB结合位点在NOD2基因调控中的作用
目的 探讨NF-κB结合位点在NOD2基因调控中的作用.方法 以人基因组DNA为模板,PCR扩增含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子序列,以切除启动子的pEGFP-N3作为框架结构,将这段序列进行酶切并定向克隆入表达载体pEGFP-N3中,构建含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子驱动的绿色荧光蛋白(GFP)载体,将构建的重组质粒经脂质体LipofectAMINETM2000介导瞬时转染HeLa细胞,在倒置荧光显微镜下观察其能否在NOD2基因启动子的调控下表达报告基因GFP.用突变试剂盒将重组质粒pEGFP-N3-NOD2wt中的NF-κB结合位点缺失突变,将构建的突变重组质粒mpEGFP-N3-NOD2瞬时转染HeLa细胞,观察绿色荧光蛋白的表达情况.结果 pEGFP-N3-NOD2wt和mpEGFP-N3-NOD2经酶切鉴定和序列测定证实重组质粒构建成功,并且NF-κB结合位点突变成功.细胞转染结果表明,构建的重组质粒pEGFP-N3-NOD2wt转染HeLa细胞,在倒置荧光显微镜下能看到绿色荧光,而突变质粒mpEGFP-N3-NOD2荧光强度明显减弱,与未转染质粒相近.结论 成功构建了含有NF-κB结合位点的人NOD2基因启动子的重组质粒和含有NF-κB结合位点缺失突变的重组质粒;NF-κB结合位点突变重组质粒在HeLa细胞巾绿色荧光表达明显减弱,说明NF-κB结合位点在NOD2基因调控中发挥了正调节作用;为进一步研究NOD2基因表达及调控机制奠定了良好的基础.
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以伯氏疏螺旋体为载体菌研究梅毒螺旋体的基因功能
目的：利用体外可培养的伯氏疏螺旋体作为载体菌，将梅毒螺旋体的基因转入相应的伯氏疏螺旋体菌株进行功能性表达，进而对梅毒螺旋体的基因功能进行研究。方法构建一个携带梅毒螺旋体基因tp0111的大肠埃希菌-伯氏疏螺旋体穿梭质粒，利用电转化法，将质粒转入相应的伯氏疏螺旋体菌株中，通过观察伯氏疏螺旋体的表型和相关基因表达变化，来研究梅毒螺旋体的基因功能。结果成功将梅毒螺旋体基因tp0111转入伯氏疏螺旋体rpoN突变株内，一定程度上回补了伯氏疏螺旋体突变株的表型缺陷。结论首次证明tp0111是梅毒螺旋体的rpoN基因，同时验证了伯氏疏螺旋体可以作为载体来研究梅毒螺旋体的致病因子及其基因调控系统。
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细胞凋亡与多器官功能障碍综合征的研究进展
细胞凋亡是由于外来因素触发了细胞内预存的死亡程序而引发的主动的自杀过程,受基因调控,有一系列形态学和生物化学改变,对机体有重要的生理和病理意义.凋亡失调是许多疾病的发病机制之一.
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运动性心肌细胞凋亡研究进展
心肌细胞凋亡是在一系列基因调控下进行的程序化细胞死亡,其实质是生理性细胞死亡.笔者对心肌细胞凋亡的生物学特征、发生机制进行了分析和总结,并对运动与心肌细胞调亡的相关研究进展进行了总结,以期为科学训练及运动员心脏的保护提供借鉴.
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超声介入复方中药"99-克星"活性组分诱导肝癌细胞凋亡及机制
目的 探讨超声引导瘤内注射用复方中药"99-克星"的活性组分AG-05诱导体外培养肝癌HepG2细胞凋亡作用及相关机制.方法 不同浓度AG-05作用于体外培养肝癌HepG2细胞后,应用荧光显微镜观察细胞形态学改变,流式细胞术分析细胞凋亡率变化,Western blotting方法 检测细胞bcl-2、caspase-3蛋白表达的改变.结果 AG-05作用48 h后肝癌HepG2细胞出现染色质边集、凋亡小体形成等典型的凋亡形态学改变,细胞凋亡率明显升高,10、20 μg/ml组分别为(13.5±2.1)%和(20.1±4.3)%;AG-05具有抑制肝癌细胞bcl-2表达,活化caspase-3的作用,并且呈一定的量效、时效关系.结论 复方中药"99-克星"活性组分AG-05可诱导肝癌细胞凋亡,其作用机理与抑制bcl-2蛋白表达,活化caspase-3有关.
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慢性阻塞性肺疾病发病机制中白细胞介素及相关基因调控的探讨
慢性阻塞性肺疾病是危害人类健康的常见病、多发病，其具体的发病机制尚未完全明确，目前尚无根治策略，进一步明确其发病机制可以对以后的临床工作中的检验、诊断、治疗提供新方法，对靶向性治疗提供新思路。本文通过慢性阻塞性肺疾病发病机制中产生的炎症因子和相关基因进行归纳，探讨不同炎症因子及相关基因在该病发病过程中产生的作用。
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微小RNA在皮肤发生和疾病中的作用
基因的表达在DNA、RNA和蛋白水平上受到调控.近二十年来,人们对于RNA介导基因调控的认识日新月异,小分子RNA(small RNAs)在哺乳类动物发育和疾病发生中的调控作用受到广泛关注.微小RNA(microRNAs,miRNAs)是先被发现的调控性小分子RNA,可以是潜在的治疗靶点和诊断的生物标记,是近年来生命科学领域的一个研究热点.
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血糖异常、凋亡与心肌梗死
细胞凋亡（ apoptosis ）是指由于内外环境变化或死亡信号触发以及在基因调控下所引起的细胞主动死亡的过程，这一过程对消除机体内老化和具有潜在性异常生长的细胞，以及保持机体处于稳态（homeostasis）起着重要的作用［1］。研究发现，心肌细胞凋亡参与了心肌梗死（ myocardial infarction ， MI ）后心室重塑、心力衰竭的一系列病理生理变化，心肌细胞凋亡是MI范围扩大的一个重要因素，不仅影响MI面积，而且诱导心肌重构［2］。葡萄糖代谢异常是MI的常见危险因素，对MI的预后具有重要影响。无论高血糖还是低血糖均可导致MI的死亡率增加，但其机制尚不十分明确，尤其是轻、中度低血糖［3-5］。由于细胞凋亡是各种疾病导致机体损伤和修复的重要细胞学机制之一，本文主要围绕细胞凋亡在心肌梗死中的作用及血糖异常对梗死心肌细胞凋亡的调节作用及其机制进行综述。
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肝星状细胞活化机制研究进展
肝纤维化不是一个独立的疾病,而是许多慢性肝病共同的病理过程,且为终发展为肝硬化、肝癌的必经阶段.近年来,大量实验业已证实,肝星状细胞(HSCs)是致肝纤维化的主要效应细胞,HSCs的活化是肝纤维化形成的关键因素[1].本综述将从主要信号转导通路和基因调控方面着手阐明HSCs的活化、增殖与肝纤维化发生的关系.一、肝星状细胞活化的关键路径(一)细胞因子信号通路
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肿瘤表观遗传学的研究进展
表观遗传学(epigenetics)是研究不涉及DNA序列改变的基因表达和基因调控的可遗传因素,探索从基因到表型变化的一门新学科.它将传统的遗传学和环境因素相结合,也将遗传信息和复杂的生命活动相关联,使人们从一个全新的角度研究生命现象.
