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巨噬细胞炎性蛋白4的突变和原核表达
目的探索如何抑制嗜酸细胞的趋化作用,选择β-趋化因子巨噬细胞炎性蛋白4(MIP4)的突变体(Met-MIP4)作为趋化因子受体3的拮抗剂,将Met-MIP4基因在原核细胞中进行表达. 方法设计MIP4基因的PCR引物并进行氨基酸突变,将MIP4 N末端的丙氨酸突变为蛋氨酸. 以正常人肺cDNA文库为模板,PCR方法获取Met-MIP4基因. 克隆入载体pUC19,测序验证序列已得到突变. 将正确的基因插入到GST融合表达载体pGEX-4T中,以IPTG诱导表达. 结果 PCR产物为220 bp左右的片段,连接入pUC19质粒后测序验证获得正确突变. 构建的pGEX-4T融合表达载体在大肠杆菌中表达,经SDS-PAGE凝胶电泳显示有大小约34 kU的新生融合蛋白表达. 结论成功突变并克隆了β-趋化因子MIP4基因. SDS-PAGE表明,与GST融合的Met-MIP4突变体已得到表达,为进一步研究其生物学活性奠定了基础.
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银屑病患者淋巴细胞与中性粒细胞中趋化因子受体CXCR3 mRNA的表达
目的: 了解银屑病患者外周血淋巴细胞与中性粒细胞中CXC型趋化因子受体CXCR3 mRNA的表达水平及其与银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)之间的关系. 方法: 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测进行期斑块型银屑病患者33例及其中16例患者治疗后外周血淋巴细胞及中性粒细胞中CXCR3 mRNA的表达水平,设30例健康人作为正常对照,并将检测结果与PASI进行了相关性分析. 结果: 斑块型银屑病患者外周血淋巴细胞中CXCR3 mRNA表达水平为1.12±0.81,明显高于健康对照组(0.28±0.28, P ＜0.01)与治疗后患者(0.57±0.61, P＜0.05 ),并与PASI之间呈明显正相关(r =0.516, P＜0.05);而中性粒细胞中CXCR3 mRNA表达水平为1.72±1.68,与健康对照组(1.27±1.17)及同一组患者治疗后(1.27±1.01)相比均无明显差异 (P＞0.05). 结论: CXCR3可能主要通过活化与趋化外周血淋巴细胞而参与了银屑病的发病机制.
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趋化因子受体CCR7促进乳腺癌细胞的趋化与侵袭
目的:研究趋化因子受体CCR7的表达对乳腺癌细胞趋化活性与侵袭活性的促进作用.方法:RT-PCR法测定3株乳腺癌细胞MCF-7, MDA-MB-231, MDA-MB-361中CCR7的表达;在CCR7的配体SLC作用下,通过趋化小室法检测不同乳腺癌细胞的趋化活性与侵袭活性;检测CCR7的封闭对乳腺癌细胞趋化活性和侵袭活性的影响. 结果: 3株乳腺癌细胞中均存在不同程度CCR7的表达,其配体SLC对3种乳腺癌细胞均存在不同程度的趋化活性和侵袭活性,CCR7的封闭也能够在不同程度上抑制乳腺癌细胞的这种趋化活性和侵袭活性. 结论: 趋化因子受体CCR7的表达能够促进乳腺癌细胞的趋化与侵袭,从而可能在乳腺癌细胞向淋巴结转移中发挥重要作用.
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哮喘患者血浆类胰蛋白酶、IL-8和嗜酸性粒细胞趋化因子水平与类糜蛋白酶活性测定及相关性分析
目的: 探讨哮喘患者血浆类胰蛋白酶(tryptase)、白介素-8(IL-8)、嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)水平和类糜蛋白酶(chymase)活性及相关性. 方法: 分别取健康人、哮喘急性期中度和重度患者各30例,静脉抽取抗凝血. 在UniCAP 100 全自动体外变应原检测仪上进行tryptase测定,采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(SELISA)检测血浆IL-8, eotaxin水平. Chymase活性测定:使用琥珀酰-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-酰苯氨(SAAPP)做为底物,采用酶标仪在410 nm连续监测吸光度的变化. 结果: 急性期哮喘患者血浆tryptase (2.8 μg/L)值与对照组(1.2 μg/L)比较明显升高(P<0.05);IL-8值(141.5 μg/L)显著高于对照组(6.5 μg/L)(P<0.05);Eotaxin值(154.9 μg/L)显著高于对照组(49.9 μg/L)(P<0.05). 18.3 %的哮喘患者血浆chymase活性[(109.9±132.0) nkat]高于对照组(0 nkat),其活性可被类胰蛋白酶抑制剂SBTI和α1-AT分别抑制87.0%和88.2%. IL-8与Eotaxin之间存在弱相关性(r=0.4, P=0.046);Tryptase, Eotaxin, IL-8与血涂片中的嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞之间均无明显相关性. 结论: 肥大细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及其介质均参与中、重度哮喘的发生与发展过程. 其中,肥大细胞既可通过其分泌的介质如tryptase和chymase直接在哮喘的慢性气道炎症中起作用,也可分泌一些趋化因子如IL-8,eotaxin等,通过募集嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞等其它炎症细胞而间接起作用,肥大细胞在哮喘的发生与发展过程起重要作用.
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溃疡性结肠炎患者肠粘膜中趋化因子和核转录因子的变化
目的: 研究溃疡性结肠炎(UC)患者肠粘膜中趋化因子IL-8, MCP-1和核转录因子NF-κB的变化. 方法: 患者30例经柳氮磺胺吡啶和糖皮质激素治疗前后与正常人比较. RT-PCR法半定量检测肠粘膜中IL-8, MCP-1的变化;采作凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法检测肠粘膜细胞核内核转录因子NF-κB的变化. 结果: UC急性期IL-8/G3PDH的比率为1.09±0.22,缓解期为0.49±0.21,与正常对照组0.14±0.10相比均有明显增加(P<0.05),治疗前后有显著差异(P<0.05); MCP-1/G3PDH的比率为急性期0.89±0.23,缓解期为0.81±0.19,与正常对照组0.07±0.04相比均有明显差异(P<0.01),但治疗前后无明显差异. 肠上皮细胞核内NF-κB亦明显增加. 结论: UC的发生发展与IL-8, MCP-1等趋化因子的变化密切相关,它的表达由细胞核内NF-κB调控. 柳氮磺胺吡啶和糖皮质激素可能通过抑制NF-κB的合成达到抗炎目的.
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CXCL12/CXCR4轴在胰腺癌-神经交互作用中的研究
目的 本研究旨在阐述CXCL12/CXCR4轴对胰腺癌神经相互作用的影响,探讨CXCL12/CXCR4在胰腺癌嗜神经过程中的相关分子机制.方法 体外培养胰腺癌Panc-1、Miapaca-2细胞,实验分为空白对照组、外源性CXCL12组及CXCR4受体特异性阻断剂AMD3100组.采用RT-PCR检测胰腺癌细胞CXCR4及CXCL12 mRNA的表达,检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及人尿激酶型纤溶酶原激活物(human urokinase plasminogen activator,uPA) mRNA的表达;采用Transwell侵袭实验观察各实验组中细胞侵袭性的变化;提取大乳鼠脊髓背根神经节,建立胰腺癌细胞Miapaca-2与脊髓背根神经节(DRG)共培养模型,倒置显微镜成像系统动态观察不同实验组中神经轴突生长差异.结果 胰腺癌细胞Panc-1、Miapaca-2细胞存在CXCR4 mRNA的表达,而CXCL12 mRNA无表达;两种胰腺癌细胞之MMP-2、MMP-9及uPAmRNA在AMD3100组、对照组、CXCL12组中的表达差异具有统计学意义(P＜0.01);Transwell细胞侵袭性实验中,外源性CXCL12明显增强Panc-1、Miapaca-2细胞的侵袭性,而AMD3100有效抑制肿瘤细胞的侵袭能力,组间存在显著差异(P＜0.05).胰腺癌细胞与脊髓背根神经节共培养模型中,外源性CXCL12明显增强神经轴突的生长,促使胰腺癌细胞与神经轴突接触,而AMD3100有效抑制神经轴突生长及与肿瘤细胞接触;细胞共培养144h后各组神经生长轴突数差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CXCL12/CXCR4一方面增强胰腺癌细胞的侵袭能力,促进胰腺癌细胞神经浸润;另一方面,神经元与施万细胞等构成神经纤维分泌CXCL12并通过化学趋化作用,诱导表达CXCR4的胰腺癌细胞向神经迁移,导致神经浸润的发生.
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Toll样受体参与类风湿性关节炎发病机制的研究进展
类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)作为一种自身免疫性疾病,其病情迁延,是造成我国人群劳动力丧失与致残的主要病因之一.因此,对其病因和发病机制的阐明就显得尤为重要.近年来,Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)在RA和实验性关节炎中的作用机制受到了广泛关注.已经发现RA患者的滑膜组织(细胞)、免疫细胞等都存在某些TLR表达的改变.这些TLR可介导滑膜成纤维细胞的细胞因子、趋化因子、基质金属蛋白酶等的产生,同时参与巨噬细胞、树突状细胞、T细胞、B细胞等免疫细胞的功能调节,也能通过对血管内皮细胞及软骨细胞的功能调节,促进血管生成和软骨破坏,从而参与RA及实验性关节炎的进展.总之,多种TLR在不同细胞中协同或拮抗发挥作用,共同参与并影响了关节炎的发病过程,相关的研究为RA的早期预防、诊断、治疗及特异性药物的开发提供了实验依据.
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趋化因子结合蛋白在肿瘤中的作用及临床意义
趋化因子及其受体与肿瘤的发生、发展过程密切相关,针对趋化因子受体的抗体及小分子拮抗剂可能具有抗肿瘤作用.然而肿瘤微环境中的趋化因子为数众多,相互关系极其复杂,有必要确立针对趋化因子网络的多靶点调控策略.DARC、D6、CCX-CKR、Evasins、US28等趋化因子结合蛋白(CKBP)可以同时捕获肿瘤微环境中的多种促肿瘤性趋化因子,管控肿瘤细胞的生物学行为,已经或正在呈现出广阔的应用前景.
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糖皮质激素对支气管哮喘患者嗜酸性粒细胞趋化因子作用临床探讨
目的:探讨糖皮质激素对支气管哮喘患者血清、痰液中嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)表达量的影响及其临床意义.方法:选取哮喘急性发作患者30例作为观察组,随机选取10名健康对照.通过对观察组用药前、后以及健康对照组所采集的血清以及诱导痰液上清中的嗜酸性粒细胞中趋化因子进行检测,并与哮喘患者肺功能进行相关性分析.结果:哮喘急性发作组,血清以及诱导痰液中eotaxin表达水平明显高于健康对照组,使用糖皮质激素控制症状后,eotaxin显著性下降,用药前后比较差异有显著性.哮喘发作组血清eotaxin浓度与FEV1%相关系数为r=-0.51127,两者呈现负相关.痰液eotaxin浓度与FEV1%相关系数为r=-0.4276,两者呈现负相关.结论:经糖皮质激素治疗后,哮喘患者eotaxin指标明显下降,eotaxin与FEV1%呈负相关,说明糖皮质激素控制哮喘炎症反应的机制,可能与eotaxin下降有关,从而起到治疗哮喘的作用.
关键词： 哮喘/病理生理学 糖皮质激素类/药物作用 趋化因子 嗜酸细胞/分析 -
婴幼儿哮喘53例外周血Leptin、Eotaxin、总IgE检测及其临床意义
目的:探讨外周血Leptin (瘦素)、Eotaxin (嗜酸粒细胞趋化因子)及TIgE(总IgE)在婴幼儿哮喘发病中的作用及其相互关系.方法:选择53例婴幼儿哮喘患儿及42例健康同龄儿童为研究对象,采用放射免疫分析法检测Leptin、酶联免疫吸附法(ELISA)检测Eotaxin及荧光酶联免疫法检测TIgE水平.结果:①婴幼儿哮喘急性发作期与临床缓解期及健康对照组血清Leptin、Eotaxin及总IgE水平比较均具有显著性差异(P<0.05).②婴幼儿哮喘患儿急性发作期、临床缓解期Eotaxin与TIgE呈正相关关系(P<0.05);Eotaxin与Leptin、Leptin与TIgE无相关性(P＞0.05).结论:外周血Eotaxin可作为评判婴幼儿哮喘病情严重程度的客观指标;Leptin可能参与婴幼儿哮喘的发病.
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趋化因子及其受体与免疫细胞关系研究进展
在初次免疫应答中,携带抗原的树突状细胞从外周组织迁移到富含T细胞的淋巴结,与naiveT细胞相互作用,引导它们的增殖和分化,产生的效应T细胞具有迁移到外周炎症组织的能力.
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趋化因子的研究进展
趋化因子(Chemokine)是能使细胞发生趋化作用的细胞因子总称,早发现于哺乳动物、鸟类及鱼类动物体内,为一类结构、功能相似,分子量8～10Kda小分子量蛋白质,由中性粒细胞、单核细胞等多种细胞分泌产生.趋化因子与其受体相互作用,在多种炎性疾病中起重要作用.本文仅对趋化因子的分类、结构、功能及其在疾病转归中的作用进行综述.
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白介素5和趋化因子eotaxin在鼻息肉中的表达及其意义
目的:研究白介素5和趋化因子eotaxin在鼻息肉中的表达,及与嗜酸性粒细胞(EOS)浸润状态的相关性.方法:运用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)结合半定量分析方法检测20例鼻息肉和8例下鼻甲黏膜组织(对照组)中白介素5和eotaxin的mRNA的表达水平.同时运用HE染色、免疫组织化学方法检测两组中EOS的分布及白介素5和eotaxin的蛋白表达情况,比较两组间差异,分析每组中EOS浸润数目与白介素5和eotaxin表达的相关性.结果:①20例鼻息肉组织中以EOS浸润阳性(+)以上者有75%(15例),明显高于8例对照组的12.5%(1例).且鼻息肉组织中的浸润EOS率21.64±4.33明显高于对照组1.15±0.68(P< 0.01);②鼻息肉组织中白介素5和eotaxin的蛋白表达阳性细胞数明显高于对照组(P <0.01);③白介素5和eotaxin的mRNA在鼻息肉组织中的表达明显高于正常对照组(P <0.05).④白介素5和eotaxin的表达与EOS浸润相关(P <0.01),且两种因子之间也呈正相关关系(P <0.05).结论:从基因水平和蛋白水平均表明在鼻息肉组织中白介素5和eotaxin含量明显升高,而且与组织中EOS浸润呈明显相关性,提示白介素5和eotaxin是鼻息肉病变中重要的EOS趋化因子,并增强该细胞的局部作用,参与了鼻息肉的发病机制,且二者有协同作用.
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子宫颈癌中CXCR4与CD44v6表达的临床病理学意义
目的:研究CXCR4和CD44v6 在子宫颈癌中表达的相互作用及其与子宫颈癌生物学行为的关系.方法:应用免疫组化方法分析79例子宫颈癌患者肿瘤组织中CXCR4和CD44v6的表达水平.结果:CXCR4和CD44v6在子宫颈癌组织阳性表达率为59.49%和69.62%.CXCR4和 CD44v6阳性表达与子宫颈癌细胞病理分化程度和临床分期有密切关系(P＜0.05).有淋巴结转移的CXCR4和CD44v6蛋白表达均显著高于无淋巴结转移组(P＜0.01),而与患者的病理分型,年龄无关(P＞0.05).结论:CXCR4和CD44v6在子宫颈癌生长、侵袭和转移过程中起重要作用.
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早期肺癌患者免疫及肿瘤相关基因的定量PCR检测
本研究选取8例确诊的早期肺癌患者和10例健康对照,用定量PCR方法检测血液中多个炎症相关因子和肿瘤相关因子的表达变化。结果表明原癌基因c-myc、周期基因cyclin-D的表达在肺癌患者中明显升高,而P53、PTEN、cdc2、JNK、PCNA表达被明显抑制。促炎症反应因子检测中,白介素1β(interleukin 1β,IL-1β),IL-6,IL-8,IL-12,TNF-α,β-干扰素(Interferonβ,IFN-β)的表达明显升高,而CCL7,CCL24的表达被明显抑制。本研究表明肿瘤相关基因及促炎症反应因子的表达水平变化可用于肺癌早期诊断及病程监测。
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髓样细胞表达的触发因子受体-1的研究现状及临床应用
髓样细胞表达的触发因子受体-1（triggering receptors expressed on myeloid cel s-1,TREM-1）分子是Bouchon[1]等于2000年首次确认的一种与炎症级联放大密切相关的免疫球蛋白超家族中的一员，其主要表达于髓系细胞如中性粒细胞、CD14+单核/巨噬细胞的表面。多种细菌成分、创伤等均能使TREM-1分子的表达上调，并能与TREM-1分子的内源性配体一起激活其受体，促进炎症反应细胞因子和趋化因子的释放，放大炎症反应。近发现还存在TREM-1分子的可溶性形式（sTREM-1），其是由金属蛋白酶（MMPs）使细胞膜上的TREM-1分子外功能区脱落而形成的[1]，sTREM-1分子与多种炎症性疾病密切相关，同反应炎症的其它指标相比具有明显的优越性，可作为炎症性疾病的早期诊断和预后判断的新指标。
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子宫内膜异位症发病的研究进展
子宫内膜异位症（EM）是妇科常见疾病之一，在育龄期妇女中的发病率高达10~15%，活性非常强的子宫内膜组织出现在子宫腔以外的位置，主要症状为慢性盆腔炎症、痛经以及不孕不育等方面的临床表现，对妇女的身心以及生育功能造成了较大的不良影响，且该病的发病率呈现逐年上升的发展趋势。关于子宫内膜异位挣的具体发病机理目前尚未完全明晰，虽然目前已经有很多关于子宫内膜异位症发生与发展的发病机制，但是其确切的发病机制仍然未完全阐明，为常见的病因学解释为炎性反应以及免疫异常等。近期，相关临床研究结果证实，趋化因子、细胞凋亡以及遗传因素等因子参与到子宫内膜异位症的发生及发展过程之中，其对凋亡的感受性显著降低，HOX10基因参与雌性生殖系统的发育，这在子宫的正常发育过程中发挥着非常重要的作用。故予以综述。
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CCR7生物学轴在原发性肝癌形成中的作用研究进展
目的：趋化因子属于细胞因子家族，其受体属于G蛋白偶联受体。近年来，趋化因子及其受体在原发性肝癌（以下简称肝癌）发生、发展中的作用逐渐受到广泛关注。研究发现，趋化因子受体CCR7与疾病的发生、发展、治疗及预后密切相关。本研究就趋化因子受体CCR7在肝癌发生、发展过程中的作用作如下综述。
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炎症反应与动脉粥样硬化的关系
过去一般认为动脉粥样硬化的过程就是动脉壁中大量脂质的积聚.然而越来越多的研究发现,动脉粥样硬化斑块中不仅含有脂质,而且有大量炎症细胞浸润旧,以血管壁积聚了大量的单核细胞和淋巴细胞为特征,其中的触发机制可能包括氧化修饰的低密度脂蛋白(LDL)堆积、感染、血流动力学异常及性激素水平等因素刺激内皮细胞产生促炎因子,包括黏附分子和生长因子[3,4].
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变应性鼻炎与细胞因子的关系及意义
变应性鼻炎是发生于鼻黏膜的变态反应性疾病,近年发病率有上升趋势,国内外对该病发病机制研究已经深入到了分子水平,随之而来的免疫诊断和治疗已在变应性鼻炎治疗中起到不容忽视的作用,因此有必要对与变应性鼻炎相关的细胞因子及其作用进行综述,以利于我们今后的研究.
