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电针抑制脊髓内趋化因子CX3CL1表达减轻炎性痛的实验研究
目的:通过观察电针对完全弗氏佐剂(CFA)所致大鼠炎性痛急性期脊髓组织内趋化因子CX3CL1(Fractalkine,FKN)及其受体CX3CR1表达的影响,探讨FKN是否可能参与电针镇痛的相关机制.方法:清洁级雄性SD大鼠82只,分两批进行实验.第1批大鼠40只,随机分为4组(n=10):空白对照组(Control组),CFA模型组(CFA组),电针治疗组(EA组)和非穴位电针组(Sham组),其中CFA、EA和Sham组使用CFA足底注射造成炎性痛模型;造模后EA组给予电针刺激双侧“足三里”(30 min,2 Hz连续波,1～2 mA),而Sham组接受非穴位针刺处理;分别于造模前及造模后1～7d观察并测量大鼠机械缩足反应阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)及热缩足反应阈值(paw withdrawal thermal latency,PWTL),观察电针对CFA所致慢性痛的治疗作用.第2批大鼠42只,仍按上述分组方法随机分入7组(其中CFA、EA、Sham组取造模后1、3d两个时间点,Control组取一个时间点),在相应时间点处死实验动物取腰段脊髓组织进行Western Blot检验,观察电针干预对FKN及CX3CR1表达的影响.结果:CFA造模致实验动物PWMT及PWTL显著下降(P＜0.01),提示电针处理部分拮抗了CFA的致痛作用(P＜0.05);Western Blot结果显示,电针处理能够降低CFA所致动物脊髓组织升高的FKN表达,在造模后3d为显著(P＜0.01),但其受体CX3CR1表达无显著性差异.结论:电针刺激大鼠“足三里”能够改善CFA所致炎性痛症状,其中抑制脊髓的FKN表达可能是电针镇痛的机制之一.
关键词： 炎性痛 趋化因子 Fractalkine 电针 大鼠 -
趋化因子CXCL1及受体CXCR2在骨癌痛小鼠背根神经节中的表达变化
目的:观察骨癌痛小鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中趋化因子CXCL1和受体CXCR2的表达变化.方法:单侧股骨内注射前列腺癌细胞RM-1诱导小鼠产生骨癌,用行为学检测小鼠抬爪次数和缩爪时间自发痛情况,用实时定量PCR和免疫荧光染色技术观察小鼠DRG中CXCL1和CXCR2的表达变化和细胞定位.结果:骨癌组小鼠的抬爪次数和缩爪时间,从术后10 d开始均较对照组明显上升(P＜0.05),并持续到21 d以上.骨癌组小鼠同侧L3-5 DRG中CXCL1和CXCR2mRNA在手术后7d时表达较正常小鼠明显增加(P＜0.05),并能持续到21 d以上.CXCL1和CXCR2表达于DRG神经元内,骨癌组同侧L3-4 DRG中CXCL1和CXCR2阳性神经元在手术后7,14 d和21 d时较正常组明显增多(P＜0.05).结论:骨癌小鼠DRG中CXCL1和CXCR2表达增加,DRG中的CXCL1及其受体CXCR2可能参与骨癌痛的调节.
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趋化因子CX3CL1及其受体CX3CR1在神经病理性痛中的调节作用
神经病理性痛是一种复杂的疾病,现已成为困扰全球的健康问题.其发生原因多种多样,包括:病毒感染、肿瘤、外周或中枢神经系统损伤以及糖尿病等伴有周围神经损害的疾病,甚至某些可以导致神经损伤的药物.神经病理性痛是“由躯体感觉神经系统的损伤或疾病而直接造成的疼痛(pain arising as a direct consequence of a lesion or disease affecting the somatosensory system)”[1],常见的症状一般为痛觉过敏与痛觉超敏[2].神经病理性痛不仅造成患者感觉的不适,还可能引发患者认知情绪的失调和损害;而且对整个社会而言,也带来严重的经济与资源的损失.神经病理性痛目前缺少长期有效的治疗方式,传统使用的阿片类镇痛药物在此类疼痛的镇痛中效果并不确切[3,4],而其他药物如抗惊厥药、抗抑郁药、NMDA受体拮抗剂、糖皮质激素乃至部分免疫调节药物都成为人们探索神经病理性疼痛治疗的目标.
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小胶质细胞参与神经病理性痛机制的几个信号通路
神经病理性痛是指由于外周或中枢神经系统病变、功能障碍或短暂的脏器损伤所致的疼痛,也可以是糖尿病、癌症或传染因素带来的继发损伤症状;其特征性临床表现有疼痛过敏、异常疼痛和自发疼痛等,对于患者的身心健康有极为严重的影响,而现有的治疗方法疗效均不理想.因此,认识神经病理性痛形成机制对于发展新的有效的疗法必小可缺.神经病理性痛的形成机制包括外周神经系统和中枢神经系统(CNS)对感觉信息的处理变化.对外周神经损伤产生神经病理性痛的研究发现,除了神经元的重要作用外,胶质细胞一尤其是损伤神经所对应的脊髓节段中活化的小胶质细胞在神经病理性痛的发病机制中起到了重要作用[1-3].本文同顾了目前对于神经病理性痛中小胶质细胞作用机制相关的部分文献,重点围绕神经病理性痛小胶质细胞的CCL2/CCR2信号通路、组织蛋白酶S-fractalkine-CX3CRl通路、ATP相关信号通路和TLR4相关信号通路分别进行论述,为进一步了解神经病理性痛的机制提供线索.
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新生大鼠海马神经干细胞表达趋化因子受体CCR5的体外研究
目的 探讨体外培养神经干细胞足否表达趋化因子受体CCR5.方法 采用无血清方法分离、培养新生大鼠海马神经干细胞,细胞免疫荧光方法检测神经干细胞标志巢蛋白(nestin)表达及干细胞多向分化为神经元及胶质细胞的能力;后通过细胞免疫荧光及逆反转录酶-聚合酶链反应(RTPCR)方法检测神经干细胞表达趋化因子受体CCR5的情况.结果 体外培养新生大鼠海马神经干细胞呈nestin阳性,可分化为神经丝蛋白200(NF200)阳性神经元、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性星形胶质细胞及2,3-环核苷酸磷酸二酯酶(CNP)阳性少突胶质细胞,CCR5细胞免疫荧光及RT-PCR证实神经干细胞表达趋化因子受体COB5.结论 新生大鼠海马神经干细胞表达趋化因子受体CCR5,为进一步研究其体内、外迁移提供理论依据.
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慢性特发性荨麻疹患者外周血单核细胞CCR3和CX3CR1mRNA的表达
目的 探讨趋化因子受体CCR3和CX3CR1在慢性特发性荨麻疹(CIU)患者外周血单核细胞(PBMC)中的表达及其与疾病的相关性.方法 确诊为CIU的患者45例和正常人对照30例,收集其PBMC,提取RNA.应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测入选者的CCR3和CX3CR1 mRNA表达水平.结果 CCR3 mRNA表达水平比较,CIU患者组(0.69±0.22)高于正常对照组(0.51±0.26),差异有统计学意义(P＜0.01).而CX3CR1 mRNA表达水平比较,CIU患者组(0.55±0.27)与正常对照组(0.53±0.14)的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CIU患者CCR3 mRNA表达水平比正常对照组增高,而CX3CR1 mRNA表达水平与正常对照组差异不显著.提示CCR3可能参与CIU的发生机制.
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窄谱中波紫外线对银屑病患者CCR2 mRNA表达的影响
目的 探讨窄谱中波紫外线(NB-UVB)治疗对银屑病患者趋化因子受体CCR2 mRNA的影响.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测36例斑块型银屑病患者NB-UVB治疗前、后皮损部位、外周血淋巴细胞中CcR2 mRNA的表达水平,30例正常人设为对照组,将检测结果与银屑病皮损面积、严重程度指数(PASI)及外周血白细胞中该受体的表达水平与皮损部位的表达水平间的相关性分别进行分析.结果 CCR2 mRNA表达水平:银屑病患者治疗前淋巴细胞中为1.87±0.65,明显高于正常人对照组(0.31±0.19,P＜0.001)及同组患者治疗后(0.79±0.31,P＜0.05);在皮损部位表皮中为1.69±0.26,明显高于正常人对照组(0.89±0.37,P＜0.01)与治疗后患者(0.91±0.32,P＜0.01).在皮损部位真皮中为1.75±0.43,明显高于正常人对照组(0.79±0.28,P＜0.001)及治疗后患者(0.98±0.26,P＜0.01).结论 CCR2可能主要通过参与活化、趋化淋巴细胞而在银屑病的发病机制及病理状态的维持中起到重要作用,NB-UVB对银屑病的治疗作用可能通过调节CCR2的表达而实现.
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Fractalkine和其受体Cx3CR1在寻常性银屑病中的表达及意义
目的 探讨Fractalkine/Cx3CR1在寻常性银屑病发病中的作用.方法 应用免疫组化SABC法分别检测寻常性银屑病(进展期)皮损26例、皮损周边0.5 cm皮肤8例和正常皮肤15例中Fractalkine/Cx3CR1的表达情况.分析其与PASI(疾病严重度评分)之间的关系.结果 寻常性银屑病患者角质形成细胞和真皮浅层血管内皮细胞中Fractalkine/Cx3CR1阳性率较皮损周围0.5 cm范围皮肤明显增强(P＜0.05),正常皮肤中未见Fractalkine/Cx3CR1表达.寻常性银屑病皮损中Fractalkine的表达与PASI呈正相关(γ=0.6097,P＜0.01),Cx3CR1的表达与PASI无相关性(γ=0.2965,P＞0.05).结论 Fractalkine/Cx3CR1的异常表达可能在寻常性银屑病发病中发挥重要作用.
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Tregs细胞CCR4的表达变化在复发性生殖器疱疹患者发病中的意义
目的 探讨复发性生殖器疱疹(RGH)患者趋化因子受体CCR4在外周血Tregs细胞的表达和皮损局部的表达及其意义,并分析其与血清内趋化因子CCLI7和CCL22水平的关系.方法 应用流式细胞术、免疫组织化学法和EMSA法检测RGH和正常对照外周血Tregs细胞的水平和其表面CCR4受体表达的情况,局部皮损中Foxp3和CCR4的表达及血清中趋化因子CCL17和CCL22的浓度.结果 RGH患者外周血Tregs细胞及其上表达的趋化因子受体CCR4的百分数比正常对照高,差异有统计学意义(P＜0.05);趋化因子CCL17和CCL22的血清水平也高于正常对照,差异有统计学意义(P＜0.05);组织中Foxp3和CCR4表达也较正常对照差异有统计学意义(P＜0.05).在临床指标中,趋化因子受体CCR4与RGH患者的HSV-2 DNA有明显相关关系.结论 外周血和局部皮损的Tregs细胞趋化因子及其受体水平的表达可能和RGH疾病病情发展有关.
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阿维A对寻常性银屑病患者外周血中Th细胞相关趋化因子的影响
目的 通过对阿维A治疗前后银屑病患者血清中的T辅助细胞相关的CXCL9,CXCL10,CCL17,CCL20,CCL22浓度影响,探讨阿维A治疗银屑病的作用机制.方法 采集健康对照组和寻常性银屑病患者治疗前后的外周血样本,检测其中的CXCL9,CXCL10,CCL17,CCL20,CCL22浓度变化.结果 治疗前患者血液样本中的CXCL9浓度为3 089.98±1 020.89pg/mL,CCL10浓度为1 523.49±817.98pg/mL,CCL20浓度为2 560.41±750.69 pg/mL,都明显高于正常对照组.而用药前后,患者血液样本中的CXCL9浓度为2640.56±563.12 pg/mL,CXCL10浓度为882.86±203.49 pg/mL,CCL20浓度为914.56±230.65,与治疗前相比有明显下降(P＜0.01).而CCL17、CCL22浓度变化差异无统计学意义.结论 银屑病患者血清中各类T辅助细胞相关因子浓度上升揭示了银屑病是系统性炎症疾病.而阿维A作用机制在于针对Th1和Th17细胞进行相关调节,而对Th2细胞无相关作用.
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趋化因子RANTES与皮肤病
调节活化正常T细胞表达与分泌的趋化因子(RANTES)是CC型趋化因子成员之一,对多种白细胞具有趋化和活化作用,对人类免疫缺陷病毒既有抑制病毒复制又有增强病毒复制的效应.有报道RANTES在多种皮肤病包括某些炎症性和免疫性皮肤病以及病毒、真菌、寄生虫感染甚至皮肤肿瘤的发病中发挥作用,对设计新的治疗方案和阐明药物的作用机理也有重要的意义.
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葡萄膜炎相关细胞因子与趋化因子基因多态性的研究进展
葡萄膜炎是一组累及虹膜、睫状体、脉络膜或三者同时受累的炎症性病变.尽管目前对葡萄膜炎的诊断和治疗有了很大的进展,仍有35%～45%患者视力终丧失.其病因和发病机制仍不太清楚,可能与环境及免疫遗传因素有关.很多研究显示人类组织相容性抗原基因多态性在葡萄膜炎的发病中起重要作用;近年来,非人类组织相容性抗原基因包括细胞因子和趋化因子基因亦被报道在葡萄膜炎的发病机制中起重要作用.本文对葡萄膜炎相关的细胞因子和趋化因子基因多态性的研究进展进行综述.
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趋化因子与口腔疾病
趋化因子(chemokine)是一组70～90个氨基酸组成的小分子量(Mr 8×103～10×103)蛋白质,它们具有4个保守的半胱氨酸(cysteine,c)残基.趋化因子能特异地趋化白细胞,还参与免疫、造血及血管形成过程,与某些器官的发育也有关系.口腔中多种组织和细胞,如牙龈上皮细胞、牙龈成纤维细胞、成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞、口腔黏膜细胞等都能表达和分泌多种趋化因子.趋化因子通过趋化激活白细胞、促进血管生长等作用方式参与口腔组织的多种疾病,如牙髓炎、牙周炎、口腔黏膜扁平苔藓等疾病的病变过程.
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大肠杆菌表达人MCP-1的活性
0 引言 趋化因子在人类肿瘤的发生及其生物学行为中所起的作用越来越为人们重视. 利用原核表达载体pGEX-4T-1在大肠杆菌中重组表达人单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1），并在体外和体内实验中对其生物学活性进行了初步的研究.
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重组疫苗E.coli LLO/OVA诱导树突状细胞成熟并表达趋化因子及受体
目的:探讨重组疫苗E. coli LLO/OVA诱导树突状细胞成熟和表达趋化因子及其受体的作用.方法:采用基因芯片杂交及RT-PCR检测经E. coli LLO/OVA刺激后小鼠骨髓树突状细胞(BMDC)的NF-KB信号通路相关分子和趋化因子及其受体mRNA的表达,流式细胞分析BMDC活化状况及趋化因子受体CXCR4的表达.结果:未成熟BMDC表达趋化因子基因Cc12,Cc14,Cc16,Cc19,Cc117,Ccl22,Cxc12,Cxc14和趋化因子受体基因Ccr2,Ccr5和Ccr7.经E. coli LLO/OVA刺激后4-8 h,BMDC明显上调表达基因Myd88,Nf-Icbl,Cc13,Cc15,Cc17,Cc122,Cxc11,Cxc19和Ccr2,同时下调表达趋化因子受体基因Ccr2和Ccr5,但持续表达Ccr7.经该疫苗刺激后8 h,BMDC上调表达基因Tlr2,Myd88,Nf-kbl和Cxcr4.该疫苗刺激后12 h,BMDC下调一系列趋化因子和趋化因子受体基因表达,仅持续表达基因Ccl5和Cxcr4.经疫苗刺激24 h后BMDC上调表达CD40,CD80,CD86,MHC-II类分子及CXCR4.结论:重组疫苗E. coli LLO/OVA可能通过Myd88/NF-KB信号途径诱导了小鼠骨髓树突状细胞成熟并表达一系列趋化因子及趋化因子受体基因,尤其上调了趋化因子受体CXCR4的表达.
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趋化因子受体CCR7在不同类型肺癌组织中的表达及其临床意义
目的:探讨趋化因子受体CCR7在不同类型肺癌组织中的表达及其临床意义.方法:采用免疫组织化学方法检测110(鳞癌40,腺癌40,小细胞癌30)例肺癌和30例癌旁正常肺组织中CCR7的表达.结果:在110例肺癌组织中有77例CCR7表达阳性(70.0%),30例癌旁正常肺组织中仅5例表达阳性(16.7%,P＜0.05).鳞癌、腺癌及小细胞癌CCR7阳性率分别为60.0%,92.5%,53.3%(P＜0.01);腺癌CCR7阳性率明显高于鳞癌和小细胞癌(分别P＜0.01,P＜0.01).68例伴淋巴结转移的病例CCR7阳性率83.3%,42例不伴淋巴结转移的病例CCR7阳性率47.6%(P＜0.01).Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期肺癌病例CCR7阳性率分别为59.5%,76.2%,69.2%,100.0%(P＜0.05).不同性别患者肺癌组织中CCR7阳性率分别为男66.7%,女80.8%(P＞0.05).小于等于60岁和大于60岁年龄组肺癌组织中CCR7阳性率分别为70.3%,69.6%(P＞0.05).结论:CCR7上调表达是肺鳞癌、腺癌及小细胞癌的一个普遍特征,高水平的CCR7表达与肺癌的淋巴结转移和高TNM分期有关,而与年龄、性别无关.
关键词： 肺肿瘤 趋化因子受体CCR7 趋化因子 淋巴结转移 -
HIV-1辅受体配体的逆转录病毒载体的构建和表达
目的: 构建HIV-1辅受体的配体-趋化因子RANTES和SDF-1的逆转录病毒载体,并观察在NIH3T3细胞的表达.方法: 从重组质粒pCMV-R-K-S-K中获取RANTES-KDEL-SDF-KDEL基因片段,构建RANTES和SDF-1的逆转录病毒载体pLNCX-R-K-S-K,酶切鉴定并测序.采用标准的磷酸钙共沉淀法转染包装细胞Bing, G418筛选克隆细胞,制备重组病毒液,继之感染NIH3T3细胞,计算病毒滴度.间接免疫荧光检测NIH3T3细胞中RANTES、SDF-1的表达.结果: pLNCX-R-K-S-K逆转录病毒载体酶切和测序结果与预期一致,筛选出抗性克隆,制备了高滴度的重组病毒液,间接免疫荧光证实RANTES和SDF-1可表达于转染细胞.结论: HIV-1辅受体的配体、趋化因子RANTES和SDF-1的逆转录病毒载体构建成功,重组病毒可以感染NIH3T3细胞,为下一步HIV-1感染实验打下了基础.
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大鼠角膜缘移植后角膜缘上皮中RANTES和MCP-1表达的意义
目的:研究RANTES和MCP-1在大鼠角膜缘移植模型中的动态表达,探讨其与移植排斥反应发生的关系. 方法:将大鼠随机分为同种异体移植组(AG组)、自体移植组(SG组),并以健康大鼠作为正常对照组(N组),用定量竞争性RT-PCR的方法,在术后(POD)1, 4, 7, 11, 14, 21和30 d分别检测各组大鼠RANTES和MCP-1 mRNA的含量,并观察大鼠眼表变化,判断排斥反应的发生. 结果:术后5 d开始AG组出现排斥反应,8~10 d达到高峰. RANTES和MCP-1 mRNA含量术后均大幅增加(P<0.05),RANTES于POD7达峰,MCP-1于POD11达峰,随后均持续下降. POD1, 4 AG组与SG组RANTES与MCP-1 mRNA含量无差异,POD7～30均有明显差异. 结论:动态检测RANTES和MCP-1 mRNA含量,可能有助于临床上对角膜缘移植排斥的诊断和对预后的估计.
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趋化因子受体拮抗剂对大鼠小肠移植的影响
目的:观察趋化因子受体拮抗剂Met-RANTES对同种异体大鼠异位小肠移植术后移植物的存活时间和组织病理学改变的影响,以及与小剂量他克莫司(FK506)的协同效应. 方法:选用成年雄性SD和Wistar大鼠进行异位小肠移植(SD→Wistar).将动物分为3组,每组30只:第1组,未治疗对照组;第2组,Met-RANTES治疗组(200 μg/d,ip);第3组, Met-RANTES(200 μg/d,ip)+小剂量FK506治疗组[0.5 mg/(kg*d), im].观察移植大鼠的一般状况和存活时间,并于术后第1,3,5,7日取各组动物移植肠标本进行组织病理学检查和组间比较. 结果:第1组大鼠存活时间中位数为7.2 d (1.5),全部死于急性排斥反应及感染;组织病理学检查显示移植后第3,5,7日分别符合轻、中、重度排斥反应.第2组大鼠存活时间中位数为19.2 d (16.4),与第1组相比存活时间明显延长(P＜0.01). 第3组大鼠存活时间中位数为30.9 d (9.0),与第1,2组显著延长(P＜0.01).第2,3组组织病理学检查无明显排斥反应征象,可长期存活. 结论:Met-RANTES能明显抑制小肠移植急性排斥反应,有效保护移植肠功能,显著延长移植物的存活时间,并可增强小剂量FK506的免疫抑制作用.
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MIP4的突变体构建及其对嗜酸粒细胞趋化的抑制
目的: 为研究MIP4(巨噬细胞炎性蛋白4)的突变体在拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用中的活性,构建MIP4突变体(Met-MIP4)并进行原核表达和纯化,体外观察其拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用. 方法: 将Met-MIP4基因片段插入到pRSET-A融合表达载体中.诱导表达后,表达工程菌经超声裂菌后鉴定可溶性,细菌裂解上清经镍螯合亲和层析纯化.采用葡聚糖沉淀法分离和纯化嗜酸粒细胞,利用24孔Transwell双层板鉴定融合表达蛋白的趋化和抗趋化活性.结果: 构建入融合表达载体pRSET A的基因在大肠杆菌中得到表达.裂菌后鉴定显示融合蛋白可溶部分占80%,经镍螯合亲和层析纯化后纯度达87%.分离的嗜酸粒细胞纯度达到90%.拮抗嗜酸粒细胞趋化活性实验表明,纯化的Met-MIP4蛋白具有明显拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用.结论: Met-MIP4突变体基因在pRSET A融合表达载体中获得可溶性表达和纯化,生物学活性实验表明融合的pRSET-Met-MIP4蛋白具有拮抗嗜酸粒细胞的趋化作用的活性, 为进一步开发其临床应用奠定了基础.
