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喉鳞癌微环境乏氧的客观评估及有效改善乏氧对喉鳞癌化疗抵抗的影响浅析
目的:客观评估喉鳞癌微环境乏氧,并探讨有效改善乏氧对喉鳞癌化疗抵抗的影响.方法:选取我院在2012年9月至2013年9月收治的16例喉鳞癌患者的病理组织切片为研究对象,随机分为两组,即观察组和对照组,每组各8例.在细胞培养中,观察组采用低氧培养,对照组采用常氧培养,对比两组的Hep-2细胞和HIF-RNAi-Hep-2细胞的增殖抑制率和凋亡率.结果:①观察组的Hep-2细胞抑制率和凋亡率均显著低于对照组(P＜0.05);②两组的HIT-RNAi-Hep-2细胞增殖抑制率差异较小(P＞0.05),但观察组的HIF-RNAi-Hep-2细胞凋亡率显著低于对照组(P＜0.05).结论:有效改善乏氧,可以提高喉鳞癌患者的Hep-2细胞和HIF-RNAi-Hep-2细胞的增殖抑制率和凋亡率,效果显著,值得临床推广.
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流式荧光杂交法检测咽喉部肿瘤样病变HPV亚型的意义
目的 探讨咽喉部人乳头状瘤病毒(HPV)感染与良、恶性肿瘤样病变的关系.方法 采取25例声带息肉、24例咽喉鳞状上皮乳头状瘤和19例喉鳞状细胞癌临床活检石蜡组织标本,用流式荧光杂交技术检测HPV基因型19种高危亚型和7种低危亚型的表达.结果 HPV感染率在声带息肉组为24%(6/25),咽喉乳头状瘤组为37.5%(9/24),喉鳞癌组为10.5%(2/19).良性病例HPV亚型感染以HPV6和HPV11亚型为主,鳞癌病例仅为HPV16亚型.结论 咽喉部肿瘤样病变的发生与HPV感染密切相关,部分良性病例伴有HPV16亚型感染,可以作为提示恶变倾向的指征.
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5′-核苷酸酶-碱性磷酸酶双重染色法在鉴别微淋巴管和微血管中的应用
我们采用5′-核苷酸酶-碱性磷酸酶(5′-Nase-Apase)双重酶组织化学法[1-5]对40例喉鳞癌新鲜标本冷冻切片进行染色,光镜下观察发现该染色法能在同一切片上将淋巴管染成棕色,血管染成蓝色.因此,可明显地将淋巴管和血管区别开来,特别是能显示HE染色所不能显示的微淋巴管和微血管,为从形态学上研究癌组织微淋巴管和微血管以及转移机制提供了可靠的实验方法.
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喉鳞癌组织中Survivin、Bcl-2与S100A4的表达水平与其临床病理意义
目的 探究喉鳞癌组织中凋亡抑制蛋白(Survivin)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)与S100A4的表达水平与其临床病理意义.方法 选取2013年12月至2015年12月期间收治的、符合纳入标准的喉鳞癌患者50例,所有患者经手术切除后,共获得50份喉鳞癌标本,将其分为高分化组(n=22)、中分化组(n=8)以及低分化组(n=20);另在同一时期将23例喉部声带息肉标本,作为对照组.观察4组Survivin、Bcl-2与S100A4的表达水平以及Survivin、Bcl-2与S100A4的表达水平与淋巴结转移的关系;并观察S100A4与Bcl-2、Survivin与S100A4以及Survivin与Bcl-2之间的表达关系.结果 ①4组Survivin、Bcl-2与S100A4的阳性表达率:与对照组相比,高分化组、中分化组以及低分化组的Survivin、Bcl-2与S100A4的阳性表达率均较高,且差异具有统计学意义(P<0.001).②淋巴结转移关系:Survivin、Bcl-2、S100A4表达水平与在有无淋巴结转移患者之间无显著差异(P>0.05).③相关性分析:S100A4阳性表达率与Bcl-2无明显关系(χ2=0.004,P=0.947).Survivin与S100A4阳性表达两者具有统计学差异(χ2=4.861,P=0.027),呈正相关关系(r=0.541,P<0.05).Survivin与Bcl-2阳性表达具有统计学差异(χ2=8.026,P=0.005),呈正相关关系(r=0.482,P<0.05).结论 Survivin、Bcl-2与S100A4可作为喉鳞癌早期诊断的重要三个指标,可为喉鳞癌的诊断、治疗以及预后提供依据.
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喉鳞癌中组织蛋白酶D与血管内皮生长因子D对淋巴管生成和转移关系的研究
目的 探讨组织蛋白酶D( cathepsin D,Cath -D)与血管内皮生长因子- D( VEGF - D)在喉鳞状细胞癌组织中的表达情况及其与淋巴管生成、淋巴结转移之间的关系.方法 随机选择我院2008年1月～ 2010年12月拥有完整病理资料的96例喉鳞癌患者的手术切除标本做为观察组,同时选择50例正常喉黏膜组织作为对照组,通过免疫组化sp法对Cath -D,VEGF-D,D2-40的表达进行检测,并分析其与其它病理因素的关系.结果 喉鳞癌中Cath -D与VEGF-D、D2-40的高表达,正常组织中无表达在.VEGF-D与Cath -D、D2-40的表达呈正先关,Cath -D与D2-40的表达呈正相关.喉鳞癌中有淋巴转移的Cath -D与VEGF-D、D2-40的阳性率明显高于非淋巴转移组.结论 组织蛋白酶D,血管内皮生长因子-D,D2-40可能是喉鳞癌淋巴转移的重要指标,且其有相关性,联合检测可能对判断肿瘤的预后有参考价值.
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全喉切除术后局部复发38例临床分析
全喉切除术是治疗喉癌的主要方法之一,但术后局部复发是一个直接影响患者预后的因素,回顾于1990～1997年间接诊的因喉鳞癌行全喉切除术,术后复发的38例病例临床资料,并对其进行随访,随访时间为3个月至3年,总结如下:
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喉鳞癌中碱性成纤维细胞生长因子及其双受体系统的研究
碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)通过由4个高亲合力酪氨酸激酶受体(fibroblast growth factor receptor, FGFR)和细胞表面的硫酸乙酰肝素蛋白多糖(heparan sulfate proteoglycans,HSPG)组成的双受体系统发挥生物活性[1],其中串珠素(perlecan)是一种重要HSPG,是bFGF的辅助受体,并且bFGF与perlecan的结合是bFGF与其高亲合力受体相结合的必要条件.
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喉癌组织中人乳头状瘤病毒感染与p15和p16蛋白的表达
人乳头状瘤病毒(human papillomavivus,HPV)与喉鳞状细胞癌(简称喉鳞癌)的发生有相关性已被肯定.我们采用原位杂交方法与免疫组化方法,分析HPV感染与p15、p16蛋白表达之间的相关性,以进一步明确喉鳞癌的病因及发病机制.
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PTEN在喉鳞癌中的表达
目的 探讨抑癌基因PTEN在喉鳞癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组化SP法及RT-PCR法,检测喉癌组织中PTEN蛋白及mRNA的表达情况.结果 PTEN蛋白表达及mRNA相对表达量与喉癌组织的发生呈负相关,与局部淋巴结转移亦呈负相关.结论 喉癌组织中PTEN蛋白及mRNA的表达变化在喉癌的发生发展中起到重要作用,检测癌组织中PTEN蛋白及mRNA的表达情况,有助于了解喉组织肿瘤的生物学行为.
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血管内皮细胞生长因子、凋亡抑制基因蛋白的表达与喉鳞癌的关系
目的探讨喉鳞癌组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、凋亡抑制基因(bcl-2)蛋白的表达情况及其与喉鳞癌肿瘤微血管形成及临床病理的关系.方法用免疫组织化学法检测47例喉鳞癌石蜡包埋组织中VEGF及bcl-2蛋白的表达,同时用第Ⅷ因子抗体标记血管内皮细胞.结果VEGF阳性表达率为78.7%,bl-2的阳性表达率为85.10%.VEGF阳性表达与微血管密度(MVD)之间有相关性(P＜0.05),bcl-2阳性表达与MVD无相关性(P＞0.05),VEGF\bcl-2阳性表达与喉鳞癌病理分级及临床分期有明显的相关性.结论喉鳞癌中VEGF与肿瘤血管的形成有明显的相关性.VEGF、bcl-2蛋白的阳性表达与喉鳞癌的浸润、转移及预后有相关性.
关键词： 喉鳞癌 血管内皮细胞生长因子 凋亡抑制基因 -
p53基因联合化疗治疗喉鳞癌的实验研究
目的:研究喉癌细胞系Hep-2中腺病毒介导的p53与顺铂及紫杉醇联合应用在体内及体外的协同效应,指导进一步临床应用.方法:将以腺病毒为载体的p53基因与顺铂及紫杉醇等药物联合应用于喉癌细胞系Hep-2,通过细胞增殖分析,流式细胞仪细胞周期分析,集落形成实验,观察其对喉癌细胞系的作用机制.结果:p53基因联合化疗治疗组肿瘤生长明显受到抑制,肿瘤生长速度显著慢于单纯基因治疗组及单纯化疗治疗组.结论:腺病毒介导的p53基因治疗联合顺铂及紫杉醇的化疗方案可显著提高喉鳞癌的治疗效果.
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Snail蛋白及其mRNA与喉鳞癌生物学特性及预后关系
目的 观察Snail蛋白及其mRNA在喉鳞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系,并探讨它在喉鳞癌发生发展和浸润转移中的作用及其与预后关系.方法 应用原位分子杂交检测Snail mRNA和免疫组织化学S-P法检测Snail蛋白分别在60例喉鳞癌、20例癌旁组织中的表达.结果 ①Snail蛋白及其mRNA的表达与喉鳞癌的T分期、TNM分期、甲状软骨累及、淋巴结转移和远处转移有关(P均＜0.05),但Snail mRNA的表达与病理分级无关(P＞0.05),而Snail蛋白与病理分级有关(P＜0.05),它们均与性别、年龄无关((P＞0.05);②Snail蛋白与Snail mRNA在喉鳞癌组织中的表达明显正相关(r=0.362,P＜0.05);③Snail蛋白阳性患者生存率明显低于阴性患者,其比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Snail高表达可能是喉黏膜恶性转变以及喉鳞癌发生浸润转移的重要生物学标志,其高表达预示肿瘤有较高的侵袭性和不良预后.
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RECK和MMP-9在喉鳞癌中的表达及其临床意义
目的 探讨癌基因MMP-9和抑癌基因RECK在喉癌组织中的表达与喉癌临床特征的关系,了解喉癌的生物学行为,并研究两种基因的表达相关性. 方法 分别采用PV9000免疫组织化学两步法及RT-PCR方法检测38例喉磷癌组织及对应癌旁正常组织中MMP-9 和 RECK蛋白的表达及mRNA转录情况,同时取10例喉乳头状瘤作为对照. 结果 ①MMP-9在喉鳞癌组织中蛋白阳性表达率为92.11%,显著高于癌旁组织中表达(P<0.01);而RECK在癌组织中蛋白阳性表达率为60 53%,显著低于癌旁组织中表达(P<0.01);②MMP-9与RECK在癌组织中的mRNA相对表达量均与癌旁组织中的表达相比有显著差异(P<0.01);③MMP-9和RECK在喉鳞癌组织中的表达水平与患者临床分期和肿瘤病理学分级分别呈正相关和负相关.MMP-9在伴颈淋巴结转移组中的表达水平明显高于非转移组,而RECK则正好相反;④MMP-9的基因表达水平与RECK基因表达呈负相关(r=-0.907,P<0.01). 结论 ①MMP-9和RECK两因子在喉鳞癌组织中的表达水平与喉鳞癌患者的临床病理参数密切相关;②MMP-9和RECK可能共同参与了喉鳞癌的发生、发展,并与喉鳞癌的浸润及转移有密切关系.
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STAT3在喉鳞状细胞癌及手术切缘组织中的表达及临床意义
目的:探讨信号转导子和转录激活子-3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)在喉癌组织中的表达与喉癌临床特征的关系,从细胞和基因水平探讨喉癌手术安全切缘的范围.方法:分别采用PV-9000免疫组织化学两步法及RT-PCR检测38例喉鳞癌组织及距癌组织边缘2、5、10 mm组织中STAT3的表达及其mRNA转录情况.同时取距离癌组织边缘20 mm以上的正常黏膜作为对照.结果:STAT3表达依癌组织→癌旁2 mm→癌旁5 mm→癌旁10 mm→正常黏膜顺序递减.结论:STAT3在喉鳞癌组织中及癌旁各距离组织中的表达情况表明喉癌手术切除范围以距肿瘤边缘5 mm作为安全切缘的标准较为适宜.
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喉鳞癌中三磷酸腺苷酶家族蛋白2、抗磷酸化致癌基因和张力蛋白同源的磷酸酶基因的表达及意义
目的：检测喉鳞癌中三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)、抗磷酸化致癌基因(C-MYC)和张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN)的表达,分析其临床价值。方法收集2012年3月~2014年2月经宁波市鄞州第二医院诊断并行喉鳞癌根治术的患者99例,选择术中留取的癌组织标本作为观察组,选择其中78例患者癌旁正常组织标本为对照组。采用免疫组化检测二组中ATAD2、C-MYC和PTEN的表达。结果观察组中ATAD2(63.64%比12.82%)和C-MYC(70.71%比16.67%)表达的阳性率明显高于对照组,PTEN的表达明显低于对照组(20.20%比82.50%),差异有高度统计学意义(P<0.01)。观察组中ATAD2、C-MYC和PTEN表达的阳性率与肿瘤体积、淋巴结转移、脉管浸润和Ki67的表达有关(P<0.05)。相关性分析显示观察组中ATAD2与C-MYC的表达呈正相关(r=0.43,P<0.05),ATAD2与PTEN的表达呈负相关(r=-0.46,P<0.05)。结论喉鳞癌组织中ATAD2、C-MYC高表达、PTEN低表达,对肿瘤的发生和进展有促进作用,ATAD2与C-MYC、PTEN可能具有一定的协同作用。
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趋化生长因子受体4和基质金属蛋白酶-13在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义的研究
目的 探讨趋化生长因子受体4(CXCR4)及基质金属蛋白酶-13(MMP-13)在喉鳞状细胞癌中的表达,并研究其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法和RT-PCR方法检测喉鳞状细胞癌组织及远离肿瘤组织的正常喉黏膜组织中CXCR4和MMP-13的蛋白及mRNA表达.结果 CXCR4和MMP-13在喉癌组织中呈过度表达,而自身正常喉黏膜弱表达或不表达;在肿瘤组织中,CXCR4的表达与患者的年龄、性别无关(P > 0.05),而与临床分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移相关(P < 0.05);MMP-13的过度表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移相关(P < 0.05).蛋白表达水平情况与基因表达水平相一致.CXCR4和MMP-13在喉鳞状细胞癌的蛋白及mRNA表达水平呈显著正相关.结论 CXCR4和MMP-13可能参与了喉鳞状细胞癌的发生,在喉鳞癌的侵袭和转移中发挥着重要作用,联合检测 CXCR4和MMP-13有望成为喉鳞状细胞癌早起诊断和预后判断的分子指标之一.
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RECK和MMP-9在喉鳞癌中的表达及相关性研究
目的:探讨伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在喉鳞癌和癌旁不同距离组织中的表达及其与临床的关系.方法:用采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测38例喉鳞状细胞癌及癌旁不同距离组织中RECK和MMP-9的表达情况,并分析其与临床病理参数的关系.结:RECK在喉鳞癌组织、癌旁0.2cm、0.5cm及1.0cm的组织中表达强度及表达率依次增高,组间比较有显著统计学差异(P<0.001);MMP-9在喉鳞癌组织、癌旁0.2cm、0.5cm及1.0cm的表达强度及表达率依次降低,组间比较有显著统计学差异(P<0.001).RECK和MMP-9在癌组织分别与癌旁0.5cm和1.0cm的组织比较及在癌旁0.2cm分别与癌旁0.5cm和1.0cm的组织比较,表达均有统计学差异(P<0.05);但癌组织与癌旁0.2cm的组织中比较及癌旁0.5cm与癌旁1.0cm的组织中比较,表达均无统计学差异(P>0.05).RECK和MMP-9的表达呈负相关(P<0.05).喉鳞癌中不同临床分期、病理组织学分级、淋巴转移情况,二者的表达有统计学差异(P<0.05).结论:RECK在喉鳞癌组织中呈低表达,而MMP-9在喉鳞癌组织中则为高表达;喉鳞癌的安全切缘当以≥0.5cm作为参考标准.
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自噬基因Beclin1在喉鳞癌患者中的表达及临床意义
目的：探讨自噬基因Beclin1在喉鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学SP法检测77例喉鳞癌组织和22例正常组织中Beclin1的表达，分析Beclin1的表达与喉鳞癌生物学行为的关系。结果：Beclin1表达主要位于细胞浆，与正常组织比较，喉鳞癌组织中Beclin1的蛋白表达阳性率明显降低（P<0.05）；Beclin1表达与喉癌的临床分型无关（P>0.05），与喉癌的T分期、分化程度及淋巴结转移相关（P<0.05）。结论：Beclin1表达缺失可能是喉鳞癌形成过程中的重要机制之一，可能成为探讨肿瘤发生和抑制肿瘤浸润转移研究的新靶点。
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喉鳞癌组织中Caspase-3蛋白与Survivin蛋白的表达水平及相关性
目的：探讨喉鳞癌组织中Caspase-3蛋白与Survivin蛋白的表达水平及相关性。方法采用免疫组织化学法测定喉鳞癌组织及正常喉黏膜组织中Survivin蛋白与Caspase-3蛋白表达水平，并分析其相关性。结果正常喉黏膜组织中Survivin蛋白检测阳性率为10.0%（8/80），明显低于喉鳞癌组织[42.5%（34/80）]，Survivin蛋白表达与年龄、性别、病变部位无关（P＞0.05），而与TNM分期、淋巴结转移、病理分级相关（P＜0.05）。正常喉黏膜组织中Caspase-3蛋白阳性表达率[86.7%（26/30）]明显高于喉鳞癌组织[30.0%（24/80）]，差异具有显著性（P＜0.05），Caspase-3蛋白表达与年龄、性别、病变部位、病理分级、有无淋巴结转移、TNM分期无关（P＞0.05）。Survivin蛋白与Caspase-3蛋白表达呈负相关。结论 Survivin蛋白不但参与原位癌的发生进展，还可能参与癌细胞转移。Survivin蛋白高表达预示肿瘤有较高的侵袭性和不良预后。Survivin蛋白可能通过抑制Caspase-3蛋白的表达抑制细胞凋亡，可能为肿瘤形成的分子机制之一。
关键词： 喉鳞癌 Caspase-3蛋白 Survivin蛋白 -
S100A4与MMP-9在喉鳞癌中的表达和相关性研究
目的:分析正常喉组织、喉鳞癌组织中S100A4和MMP-9的表达及临床意义,探讨其在喉鳞癌发生发展中的作用及相关性.方法:采用免疫组织化学SP法检测S100A4和MMP-9蛋白的表达并分析二者的相关性及其与临床病理因素的关系;采用Western blot法检测S100A4和MMP-9蛋白的表达.结果:免疫组化结果表明S100A4和MMP-9蛋白在癌旁喉组织和喉鳞癌中的阳性表达率均呈升高趋势,分别为8.6%和14.3%,63.8%和71.3%,并且二者表达均与喉鳞癌淋巴结转移相关.统计学结果显示80例喉鳞癌组织中,S100A4和MMP-9蛋白表达呈正相关(P<0.01,r=0.440).Western blot结果表明S100A4和MMP-9蛋白在喉鳞癌组织中表达高于癌旁喉组织.在喉癌细胞系Hep-2中干扰S100A4蛋白的表达后,MMP-9的蛋白水平下调.结论:S100A4和MMP-9在喉鳞癌发生发展中均存在异常,并且S100A4基因抑制后能够显著下调MMP-9的表达.
