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北五味子多糖对中性粒细胞炎性因子白细胞介素-6及细胞凋亡的影响
目的 探讨北五味子多糖对脂多糖(LPS)处理的中性粒细胞炎性因子白细胞介素(IL)-6含量及细胞凋亡的影响.方法 实验分为空白对照组、LPS组及北五味子多糖组,使用酶联免疫吸附法(ELISA) 检测LPS处理的中性粒细胞的IL-6含量及原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡.结果 北五味子多糖可以抑制IL-6的分泌,随浓度的增加抑制作用增强,与LPS组相比,随时间延长抑制作用增强,16 h抑制作用好,与LPS组相比IL-6的含量显著降低(P<0.05).LPS可使中性粒细胞凋亡延迟,作用16 h,LPS组凋亡指数与对照组相比显著降低(P<0.05);北五味子多糖组凋亡指数随时间延长和浓度增加而增加,5 mg/ml北五味子多糖作用16 h促凋亡作用好,与LPS组相比显著升高(P<0.05).结论 北五味子多糖可减少LPS处理的中性粒细胞IL-6的含量,并可促进中性粒细胞凋亡.
关键词： 北五味子多糖 中性粒细胞 白细胞介素(IL)-6 凋亡指数 -
杞菊地黄丸对青光眼模型大鼠视网膜结构的保护作用及其机制
目的:探讨杞菊地黄丸对青光眼大鼠模型视网膜结构的保护作用,并阐明其作用机制.方法:50只SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,低、中和高剂量杞菊地黄丸组(n=10);除空白对照组外各组大鼠通过烙闭大鼠巩膜上静脉制作青光眼动物模型,低、中和高剂量杞菊地黄丸组大鼠分别灌胃给予剂量为1、2和4 g·kg-1的杞菊地黄丸,空白对照组和模型组大鼠分别灌胃给予等体积生理盐水,每天1次.12周后处死大鼠,取眼球制石蜡切片,行HE染色;TUNEL染色检测视网膜神经节细胞的凋亡情况,采用实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测各组大鼠视网膜组织中B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (caspase-3) mRNA表达水平,采用免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜组织中Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达水平.结果:与空白对照组比较,模型组大鼠视网膜神经纤维排列不整齐,纤维间质水肿,细胞层呈空泡样,视网膜神经节细胞数且明显减少;与模型组比较,高剂量杞菊地黄丸组大鼠眼视网膜神经节细胞数目增多,低和中剂量杞菊地黄丸组大鼠眼视网膜神经纤维细胞排列整齐且神经节细胞形态正常.与模型组比较,低、中和高剂量杞菊地黄丸组大鼠视网膜神经节细胞凋亡指数明显减少(P＜0.05),Bcl-2mRNA及蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),Bax和caspase-3 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).结论:杞菊地黄丸通过调控Bcl-2、Bax和caspase-3 mRNA和蛋白的表达,抑制视网膜神经节细胞的凋亡,对青光眼大鼠视网膜起保护作用.
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针药联合抑制缺血再灌注大鼠 PI3K/Akt信号通路的相关性研究
目的:通过检测缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡情况,以及磷酸化Akt(p-Akt)等指标,探讨中药预处理联合针刺后对缺血再灌注心肌细胞的大鼠模型影响及作用机制.方法:健康清洁级wistar大鼠24只,随机分为6组:缺血再灌注组、心脑通络液预处理组、针刺后处理组、心脑通络液预处理组+针刺后处理组.建立缺血再灌注损伤模型.免疫组化检测p-Akt、RT-PCR检测AktmRNA水平、Western blot检测Akt、p-Akt的变化.结果:应用PI3K/Akt信号通路阻断剂渥曼青霉素后,心脑通络液加针刺降低心肌细胞凋亡指数的作用被抑制,p-Akt、p-Akt/Akt表达减少(P＞0.01),而AktmRNA含量未见明显变化.结论:1)心脑通络液预处理联合针刺后处理没有改变缺血再灌注大鼠心肌中AktmRNA含量.2)心脑通络液预处理联合针刺后处理使大鼠心肌中p-Akt、p-Akt/Akt表达增多,应用PI3K/Akt信号通路阻断剂渥曼青霉素后,心脑通络液预处理联合针刺后处理降低心肌细胞凋亡的作用被抑制,p-Akt、p-Akt/Akt表达减少,说明心脑通络液预处理联合针刺后处理的心肌保护作用是通过PI3K/Akt通路介导实现的.
关键词： 心脑通络液预处理 针刺后处理 缺血再灌注 PI3K/Akt信号通路 凋亡指数 -
心脑通络液预处理联合针刺后处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡的影响
目的 通过检测缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡指数,探讨心脑通络液预处理联合针刺后处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞的影响.方法 健康清洁级wistar大鼠36只,随机分为6组 正常组、假手术组、缺血再灌注组、心脑通络液预处理组、针刺后处理组、心脑通络液预处理组+针刺后处理组.以结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD) 30min,再灌注120 min建立缺血再灌注损伤模型.TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡.结果 心脑通络液预处理组、针刺后处理组、心脑通络液预处理+针刺后处理组较缺血再灌注组大鼠心肌细胞凋亡指数减小,其中心脑通络液预处理+针刺后处理组与心脑通络液预处理组、针刺后处理组比较,具有显著性差异(P＜0.05).结论 心脑通络液预处理、针刺后处理可减轻缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡,说明其具有减轻缺血再灌注损伤的作用,心脑通络液预处理联合针刺后处理效果优于心脑通络液预处理、针刺后处理.
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乙烯利对青春期大鼠睾丸组织病理及生精细胞凋亡的影响
目的:探讨乙烯利对青春期大鼠睾丸组织病理及生精细胞凋亡的影响.方法:青春期雄性25日龄SD大鼠,分别以乙烯利浓度为2000 mg/kg、1000 mg/kg、500 mg/kg和生理盐水连续灌胃14和21天,分别取睾丸固定、包埋,以HE染色、末端转移酶标记技术(TUNE法)光镜观察睾丸的组织形态学变化、检测生精细胞凋亡情况.结果:低剂量组较对照组相比生精小管萎缩,生精细胞排列紊乱;中剂量和高剂量组较低剂量组相比,生精小管更加萎缩,生精细胞排列明显紊乱;接触乙烯利14天后高剂量组生精细胞凋亡指数与低剂量、对照组相比具有显著统计学差异(P＜0.01);高剂量与中剂量组相比无统计学差异(P＞0.05);中剂量和低剂量与对照组相比有显著统计学差异(P＜0.01);接触乙烯利21天后各组间比较均具有显著性差异(P＜0.01).结论:乙烯利可导致大鼠生精细胞凋亡增加,生精能力下降,这可能是导致青年不育的原因之一.
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原发性肝癌肿瘤微血管密度及凋亡指数的表达
目的探讨原发性肝癌中肿瘤微血管密度(MVD)与细胞凋亡的关系,以及二者与肿瘤生物学行为的关系.方法选择32例原发性肝癌手术标本,采用免疫组织化学方法测定Ⅷ因子的蛋白表达,采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法测定肿瘤细胞凋亡指数(AI).结果原发性肝癌中肿瘤微血管密度(MVD)为30.96±12.32;肝癌组织的凋亡指数11.69±4.24,且二者的表达呈负相关.结论肿瘤微血管密度在原发性肝癌的生长和转移中起到重要的作用.
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两种新辅助化疗对局部晚期宫颈癌分子疗效的研究
目的 探讨异环磷酰胺联合顺铂(IP组)和紫杉醇联合顺铂(TP)治疗局部晚期宫颈癌(locally advanced cervix cancer,LACC)分子疗效,为临床选择治疗方案及评价疗效的分子标志物提供理论依据.方法 选取局部晚期宫颈鳞癌40例,分两组进行2个疗程IP或TP新辅助化疗,以流式细胞术检测化疗前后的宫颈鳞癌组织中增殖细胞指数Ki-67的表达,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡指数(AI),S-P免疫组化法进行Survivin基因表达检测.结果 组内NACT前后Ki-67降低,AI、Survivin基因表达检测升高,组间比较,NACT前后Ki-67、AI、Survivin基因表达检测无统计学意义.结论 两种方案新辅助化疗均能显著降低局部晚期宫颈癌肿瘤细胞增殖、增加凋亡,但TP组接受治疗时间及住院时间均短,患者依从性好,值得临床推广应用.
关键词： 局部晚期宫颈癌 新辅助化疗 细胞增殖指数 凋亡指数 Survivin基因 -
功能失调性子宫出血和细胞凋亡与bcl-2及bax基因表达的关系
目的 研究功能失调性子宫出血与细胞凋亡及其相关基因表达产物的关系.方法 应用TUNEL技术检测30例正常月经周期的增生期子宫内膜,28例简单增生,2例复杂增生子宫内膜标本的凋亡指数(AI).应用免疫组化方法检测bcl-2及bax基因在子宫内膜的表达.结果 简单增生和复杂增生子宫内膜AI比正常增生期AI高(P＜0.05);bcl-2基因在正常增生期表达比在简单增生和复杂增生表达略高,差异无显著性(P＞0.05);bax基因在简单增生和复杂增生表达比在正常增生期表达高(P＜0.05).结论 功能失调性子宫出血的发病与细胞凋亡有关,且与bcl-2,bax表达相关.
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外源野生型p53正向细胞凋亡调控因子基因对人胰腺癌PC-3细胞生长的作用
p53正向细胞凋亡调控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)是新近发现的Bcl-2家族BH 3亚家族中的成员,是p53的靶基因,可被内外源性p53快速诱导,具有强大的促凋亡作用[1,2].研究发现,PUMA基因在许多肿瘤细胞系中低或不表达,转染外源性PUMA基因后,细胞凋亡被促进,动物移植瘤的生长明显受到抑制.在前期的工作中,我们检测了胰腺癌组织中PUMA表达情况发现,PUMA在肿瘤组织中的阳性表达明显低于瘤旁组织,并且肿瘤组织中细胞凋亡指数低于对照组,说明PUMA低表达引起的细胞凋亡抑制在胰腺癌的发生中起重要作用.本试验旨在观察PUMA基因转染抑制体外胰腺癌细胞的生长的效果.
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NF-κBp65、Bcl-2、Bcl-xL蛋白在胰腺癌中的表达及其与P53和凋亡指数的关系
背景与目的:核因子κB通过调控下游bcl-2家族基因表达参入细胞凋亡调节过程,而p53除了参入细胞周期调节外也参入依赖bcl-2基因的细胞凋亡调控.在胰腺癌中NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达与p53和凋亡的关系还不清楚.本研究系统地分析了核因子κBp65及其下游的bcl-2和bcl-xL抑凋亡基因在胰腺癌(PC)中的表达以及与P53蛋白表达和凋亡指数(AI)的关系.方法:免疫组化法检测25例胰腺导管腺癌(PC)和9例正常胰腺组织(NP)中P53蛋白表达;Western印迹法分析NF-κBp65蛋白表达;RT-PCR分析Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达,TdT酶介导的原位缺口标记(TUNNEL)法了解胰腺癌细胞凋亡情况(AI).结果:P53在PC组织阳性率(56%,14/25),高于NP组织阳性率(P＜0.00);NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-xL在PC组织表达相对值分别为:1.06±0.16、0.79±0.13、0.76±0.24,分别高于NP组织:0.23±0.016、0.23±0.074、0.18±0.026(分别P＜0.05);14例p53阳性PC中,NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-Xl表达相对值分别为:1.32±0.23、0.92±0.33、0.82±0.21;11例p53阴性PC中,NF-κBp65、Bcl-2和Bcl-xL表达相对值分别为:0.78±0.15、0.54±0.19、0.71±0.28(分别P＜0.05,P＜0.05,P＞0.05);NF-κBp65和Bcl-2分别与P53表达有明显的正相关性(分别P＜0.01,P＜0.05),Bcl-xL与P53无相关性(P＞0.05),NF-κBp65与Bcl-XL表达正相关(P＜0.01),而NF-κBp65与Bcl-2表达无相关性(P＞0.05);胰腺癌平均AI为(15.4±6.48)%,NF-κBp65表达与AI负相关(r=-0.297,P＜0.05),而Bcl-2、Bcl-xL与AI无相关性(r=-0.203,P＞0.05:r=-0.156,P＞0.05).结论:胰腺癌中抗凋亡因子表达上调,凋亡指数主要决定于NF-κBp65蛋白水平;NF-κBp65通过对下游bcl-xL基因表达的调控参与胰腺癌凋亡过程;p53在凋亡调节过程中起重要作用.
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生长抑素受体在结直肠癌和正常黏膜表达及与细胞增殖和凋亡的关系
目的:研究生长抑素受体 (SSTR)在结直肠癌和相应正常黏膜中的表达以及与临床病理的关系,指导临床结直肠癌病人应用生长抑素及其类似物治疗. 方法:应用免疫组化法分别检测42例结直肠癌及其附近正常黏膜生长抑素受体,并同时检测细胞凋亡指数和增殖指数. 结果:免疫组化结果表明,结直肠癌中生长抑素受体蛋白表达率为83.3%(35/42),正常黏膜为92.9%(39/42),<0.001,表达阳性率差异无显著性意义,但表达强度差异明显,结直肠癌生长抑素受体表达明显低于正常黏膜,生长抑素受体表达阴性或弱阳性的肿瘤,相应的正常黏膜生长抑素受体表达中等强度或强阳性,而生长抑素受体中等强度阳性或强阳性表达的肿瘤,相应的正常黏膜均呈强阳性表达.而且不同表达强度的结直肠癌增殖指数和凋亡指数差异有显著性意义(P<0.001,P<0.001).生长抑素受体的表达强度与肿瘤病理分期、分化程度相关(P<0.001,<0.001),与病人年龄、性别、肿瘤大小无显著相关性(P=0.682,P=0.789,P=0.342). 结论:生长抑素受体在结直肠癌中有阳性表达,但表达强度明显低于相应正常黏膜.
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术前热疗联合灌注化疗对肺癌细胞凋亡及相关基因的影响
目的 探讨术前热疗联合灌注化疗对非小细胞肺癌细胞凋亡及相关基因表达的影响. 方法 A组37例接受术前热疗联合灌注化疗,B组31例术前灌注化疗,C组15例直接手术治疗.检测手术前后癌细胞的凋亡指数(AI)、癌组织中PCNA、bcl-2和p53蛋白的表达和增殖指数(PI),比较3组上述指标治疗前后变化. 结果 A组术后癌细胞AI较治疗前增加,PI下降；bcl-2、p53蛋白阳性表达均较治疗前下调.B组癌细胞Al较治疗前增加；PI较治疗前下降;bcl-2、p53蛋白阳性表达均较治疗前下调.治疗后组间比较,A组的AI高于B组,PI低于B组; bcl-2、p53蛋白阳性表达A组较B组下降. 结论 术前热疗联合灌注化疗可使中晚期肺癌癌组织AI增加,P1下降,bcl-2、p53蛋白阳性表达下调.
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氧化苦参碱对银屑病模型雌激素周期小鼠阴道上皮细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨氧化苦参碱对银屑病模型雌激素周期小鼠阴道上皮细胞增殖和凋亡的影响.方法:采用注射雌激素刺激小鼠阴道上皮组织增生的方法复制银屑病小鼠动物模型,同时给予不同剂量的氧化苦参碱干预,实验10 d 后,应用免疫组化法和末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术分别检测各组小鼠阴道上皮细胞细胞增殖性核抗原(PCNA)表达水平和凋亡情况.结果:与正常组相比,模型组PCNA 表达显著增加(P < 0.01),细胞凋亡指数明显增加(P < 0.01),氧化苦参碱80、40 和20mg/kg 组PCNA表达显著减少(P < 0.01),凋亡指数显著增加(P < 0.01).结论:氧化苦参碱对实验性银屑病具有保护作用,该作用可能与其降低表皮细胞PCNA 表达水平,促进表皮细胞凋亡有关.
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叔丁基对二苯酚对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用
目的：探讨叔丁基对二苯酚（tBHQ）对蛛网膜下腔出血（SAH）所致的早期脑损伤的保护作用。方法40只正常成年健康雄性SD大鼠，随机分为对照组，SAH组，安慰剂组以及tBHQ处理组，经大鼠自体尾动脉或股动脉非肝素化动脉血注入视交叉池致蛛网膜下腔出血模型。tBHQ通过灌胃给药，剂量为12.5mg/kg，分别在SAH后2h、12h、36h给药，在蛛网膜下腔出血48h后处死。取大鼠血凝块周围的皮层脑组织（额颞底）做标本，测定水肿指数，凋亡及坏死指数。结果与对照组相比，SAH组及安慰剂组的脑水肿指数、凋亡及坏死指数明显增高（P<0.05），而SAH组与安慰剂组差异无统计学意义（P>0.05）。且tBHQ组水平较对照组SAH组和安慰剂组的水肿指数、凋亡和坏死指数则显著下调（P<0.05）。结论 tBHQ对蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤具有保护作用。
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新辅助化疗诱导乳腺癌细胞凋亡与化疗疗效关系
[目的]探讨乳腺癌采用CEF方案新辅助化疗肿瘤组织标本中凋亡指数(apopto-sis index,AI)及其与化疗疗效的关系.[方法]确诊乳腺癌58例患者经予3个周期CEF方案新辅助化疗.化疗前后均检测AI值资料完整的42例.凋亡指数测定采用原位细胞末端转移标记法(TUNEL法).[结果]CEF方案化疗有效率为62.1%.化疗后AI值显著降低(P＜0.05).AI变化和术前化疗疗效密切相关(P＜0.05).[结论]化疗后凋亡指数高低可以作为预测新辅助化疗效果的指标.
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激光共聚焦显微镜对反义VEGF寡核苷酸转染TE-1及SKOV3细胞系的荧光检测
[目的]应用激光共聚焦显微镜检测转染至食管癌TE-1细胞及卵巢癌SKOV3细胞内反义VEGF寡核苷酸上荧光物质含量及转染对细胞凋亡的影响.[方法]传代培养食管癌TE-1细胞及卵巢癌SKOV3细胞,取VEGF反义寡核苷酸,按0.1 μmol/L组、0.3 μmol/L组及0.5μmol/L组转染两种细胞,正义寡核苷酸0.31μmol/L同时转染作为对照.激光共聚焦显微镜观察VEGF寡核苷酸转染荧光图像,比较反义 VEGF寡核苷酸的不同浓度在两种细胞摄入情况.流式细胞术检测不同浓度转染两组细胞的凋亡差异.[结果]食管癌TE-1细胞及卵巢癌SKOV3细胞不同浓度寡核苷酸转染24h荧光强度分别为32.69士2.94、51.48±5.76、56.62±1.2和72.56±2.01、96.42±3.21、98.54±2.07,两组荧光强度与对照组相比均有显著性差异(P<0.01),TE-1细胞及SKOV3细胞0.31μmol/L组及0.5μmol/L组之间荧光强度无显著性差异.TE-1细胞各浓度组凋亡指数较对照组有显著差异,而SKOV3细胞中凋亡指数较对照组无显著性差异.[结论]激光共聚焦显微成像技术能进行活细胞水平转染效率的定量检测,对选择合适转染浓度有帮助,提示不同癌细胞使用相同浓度抗血管生成药物可能效果有差异.
关键词： 食管肿瘤 卵巢肿瘤 激光共聚焦显微镜荧光强度 凋亡指数 -
凋亡相关性microRNA及其靶基因蛋白在心肺复苏后大鼠心肌中的表达变化
目的:探讨凋亡相关性微小RNA (microRNA,miRNA)在心肺复苏(CPR)后大鼠心肌中的表达变化.方法:雄性SD大鼠16只,随机分成对照组(A组)和复苏组(B组),每组8只,采用窒息法建立心搏骤停(CA)大鼠模型.以脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测自主循环恢复后(ROSC)后24 h的心肌细胞凋亡指数(AI)；实时荧光定量法检测miRNA-1和miRNA-133a的表达情况；免疫组化染色法检测Bc1-2、Bax蛋白表达.结果:B组ROSC后24 h AI、miRNA-1、miRNA-133a、Bc1-2及Bax蛋白表达比A组高(P＜ 0.01),Bc1-2/Bax值比A组低(Jp＜0.01),miRNA-1、miRNA-133a分别和Bc1-2、Bax的变化有相关性.结论:大鼠心搏骤停/心肺复苏后存在明显的心肌细胞凋亡,凋亡相关的miRNA变化可能是其机制之一.
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幕上星形细胞瘤细胞凋亡及bcl-2表达的临床意义
目的探讨幕上星形细胞瘤的细胞凋亡以及凋亡抑制基因(bcl-2)表达的临床意义.方法对56例幕上星形细胞瘤的病理标本采用免疫组化TUNEL法检测凋亡细胞、SP法检测bcl-2.结果细胞凋亡指数(AI)随着肿瘤级别的增高而增加,各级别肿瘤间AI的差别均有显著性意义(均P＜0.01),死亡组与存活组AI的差别有显著性意义(P＜0.01),AI＞0.5%组与AI＜0.5%组术后1年生存率的差别有显著性意义(P＜0.05).bcl-2阳性组与阴性组的AI、1年生存率的差别均无显著性意义(均P＞0.05).结论AI可以作为提示预后的独立性指标,并对判断幕上星形细胞瘤的生物学行为及肿瘤分级有指导意义;bcl-2在幕上星形细胞瘤凋亡中的作用有待于进一步探讨.
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幕上星形细胞瘤的细胞凋亡及其与增殖的关系
目的为揭示幕上星形细胞瘤的细胞凋亡及其与增殖的关系.方法采用TUNEL法检测肿瘤凋亡细胞、HE染色检测分裂相肿瘤细胞.结果肿瘤细胞凋亡指数(AI)随着肿瘤的恶性程度的增加而增大;AI值越大,预后越差;凋亡指数/分裂指数(AI/MI)在高与低级别肿瘤间的差别有显著性意义(P＜0.01);多因素分析年龄分组、AI、AI/MI、放疗与预后关系密切(均P＜0.05).结论AI是提示幕上星形细胞瘤预后的重要指标,亦是肿瘤分级的重要辅助指标,但多个指标的结合更有利于对预后的判断.
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星形胶质细胞瘤恶性程度与细胞凋亡、细胞增殖的相关性研究
目的:探讨星形胶质细胞瘤的恶性程度与细胞凋亡、细胞增殖的相关性.方法:利用DNA凝胶电泳确定34例肿瘤细胞群体中细胞凋亡的存在,使用体视学方法计数凋亡指数(AI)、增殖指数(MI)、AI/MI比率.结果:DNA凝胶电泳26例显示特征性的DNA梯带, AI、MI分别随肿瘤恶性程度增加而递增,且AI与MI呈正相关,但AI/MI随恶性度增高而降低.结论:肿瘤细胞群体中存在细胞凋亡,恶性肿瘤中细胞的增殖远活跃于细胞凋亡.AI/MI比率提示了细胞凋亡与增殖的关系.
