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瑞替普酶溶栓活性测定方法的比较研究
目的 评估测定瑞替普酶溶栓生物活性的4种方法.方法 分别使用凝块溶解法、平板溶圈法、发色底物法及气泡法4种方法,测定同一批瑞替普酶样品的生物活性.结果 4种测活方法的误差分别为10%,3%,3%和6%,表明测定瑞替普酶体外生物活性的4种方法均有可比性.结论 平板溶圈法和发色底物法测活的重复性较好,特异性好,灵敏度高,较适合测定瑞替普酶活性的要求.
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肝病患者血浆AT-Ⅲ活性检测及意义
目的探讨抗凝酶Ⅲ(AT-Ⅲ)活性在肝脏疾病患者中的变化及临床意义.方法用发色底物法测定212例肝病患者和40例健康志愿者血浆中的AT-Ⅲ活性.结果不同类型的肝病患者血浆AT-Ⅲ活性较对照组明显降低(P<0.01),其中慢性轻度肝炎、慢性中度肝炎、慢性重度肝炎、重型肝炎、肝硬化、肝癌AT-Ⅲ活性分别为101.2%±19.5%、89.9%±15.4%、33.4%±17.9%、30.4%±17.2%、39.6%±19.6%和51.2%±9.7%.AT-Ⅲ活性与凝血酶原时间(PT)相关分析,两者呈负相关(r=-0.864,P<0.01).结论血浆AT-Ⅲ活性可以反映肝功能受损的程度,在一定程度上肝细胞坏死越严重,则AT-Ⅲ活性越低.
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重组突变巴曲酶酶动力学及活性分析研究
目的 对重组突变巴曲酶进行酶动力学初步研究,并建立一种蛇毒类凝血酶活性测定方法 .方法使用可控温(37℃)紫外分光光度计,采用酶动力学测定法,测定重组突变巴曲酶的米氏常数,优化活性测定方法的反应时间和线性范围,验证此方法精密度,并用发色底物法与血浆凝集法同时测定不同蛇种来源的类凝血酶活性.结果 重组突变巴曲酶的米氏常数(37℃)Km值为256.28μmol/L、Vm值为0.005077μmol/min.该法呈现相应的剂量关系曲线,反应时间优选为0~20 min,线性范围优选为1~16.8 nmol/L,拟合度R2≥0.99,方法精密度的变异系数≤5.0%.两种不同方法测定不同蛇种来源类凝血酶的活性单位比例范围为3.3~3.7(发色底物法/血浆凝集法),比例关系一致.结论 建立的蛇毒类凝血酶活性测定方法拟合度优,精密度高,可测定不同来源的类凝血酶活性,并可替代传统血浆凝集活性测定法.
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TECo COATRON Ⅳ-plus血液凝固仪评价及正常值确定
德国TECo公司COATRON Ⅳ-plus血液凝固仪,融传统的血液凝固分析法和现代的发色底物法检测原理于一体,操作简易而功能多样,适应现代临床医学的发展需要.本研究着重对COATRON Ⅳ-plus仪器的检测重复性、稳定性、线性、抗生物干扰物质功能进行观察和评价,并与美国ACL-200血液凝固仪血凝指标的检测结果进行相关分析,同时确立了本室该仪器PT、APTT、TT、Fbg的正常参考值.报道如下.
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血浆PLG、α2-PI测定及临床应用
纤溶酶原(PLG)和α2-纤溶酶抑制物(α-PI)由肝脏合成,为纤溶系统组成成分,测定其血浆水平可反映机体纤维蛋白溶解系统活性.在肝病时,其活性多有所下降,而其下降的严重程度与肝细胞的损害及其功能的异常呈正相关关系[1].因此,研究肝病患者机体纤溶机制的异常对防治其出血、判断预后和降低病死率均有一定的理论价值和临床意义.现以ACL-200型自动血凝仪、采用发色底物法测定正常健康人和肝病患者血浆中的PLG和α2-PI活性,并对这两个指标的临床意义进行初步探讨.
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CA-7000全自动凝血仪报警原因及处理方法
CA-7000是日本 Sysmex公司推出的一台功能强大的全自动凝血分析仪,是目前世界上测试速度快的全自动凝血仪之一。该仪器集凝固法、发色底物法、免疫法等多种检测功能于一身,采用了散射光加百分比凝固测定原理,从而有效地避免了溶血、脂血及黄疸标本对凝固时间分析测定的干扰[1]。采用先进的高频振荡混匀技术,确保了样本和试剂之间能够充分混匀。我科自2013年添置该仪器以来,为血栓以及出血性疾病的治疗、预后判断等提供了快速准确地实验依据,有力地保证了患者口服抗凝剂剂量的安全性。该仪器在操作中出现了一些报警提示,其中有些报警是根据仪器提示无法排除的,是我们通过不断摸索和分析才得以解决。现将 CA-7000在工作中遇到的报警原因及处理方法分述如下。
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Sysmex CA-1500自动血凝仪的故障与排除
我科于2004年引进日本Sysmex CA - 1500自动凝血分析仪,要用于各项血液凝固指标的体外检查.利用凝固法、发色底物法、免疫比浊测定方法来检测分析,能快速高精度的分析大量标本,测定结果重复性好且测试速度快.在多年的使用过程中笔者发现和总结了一些经验.现将我们工作中遇见的故障和处理方法报告如下,以期同行借鉴.
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4.百草枯中毒大鼠早期急性肝损伤
目的:观察百草枯中毒大鼠肝细胞的凋亡和炎症介质的表达及其机制。
方法:将40只wistar系大鼠编号并分成对照组(n=8)和实验组(n=32)。实验组大鼠腹腔内按30mg/kg注射浓度为20%的百草枯,对照组大鼠注射生理盐水。分别观察0.5、1、3、7天后,实验组有8只大鼠死亡。分别收集两组大鼠下腔静脉和肝脏组织中的血液。通过运用ELISA方法测定IL-1β和TNF-α水平。运用RT-PCR测定IL-1β、TNF-α、iNOS和p53的mRNA表达量。在干预第3天时,用发色底物法测定肝脏组织中caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12的表达含量。通过HE染色观察肝脏组织病理学改变。