玻连蛋白对肝癌细胞株凋亡的抑制效应及可能的机制

目的 了解玻连蛋白(Vitronectin,VTN)对肝肿瘤细胞株SMMC 7721生长的影响及其对抗3,3’-二吲哚甲烷(3,3’-diindolylmethane,DIM)诱导SMMC 7721凋亡的作用,并初步探讨该过程中所涉及的信号分子.方法 采用细胞增殖试剂观察VTN对细胞增殖率的影响,采用激光共聚焦显微镜观察VTN微管蛋白形态的影响,采用流式细胞术和Western Blotting观察VTN对抗植物化学物诱导SMMC 7721细胞凋亡及所涉及的信号分子表达变化.结果 VTN可以剂量依赖的方式促进肿瘤细胞的生长,并可抑制细胞凋亡诱导剂对细胞诱导凋亡的作用.结论 体外实验条件下,VTN有助于肝癌细胞株SMMC 7721生长并可保护SMMC7721细胞,使其免予受到凋亡诱导剂的作用,提示VTN在肝癌发生过程中可能具有促进肿瘤细胞生长、抑制化学物诱导凋亡的生物学作用.

溶酶体的细胞死亡通路

在溶酶体膜通透化(LMP)之后的细胞急性死亡中,或者在溶酶体催化水解酶释放到细胞外间隙之后的组织浸润过程中,溶酶体水解酶参与溶酶体与自噬小体触合后的自噬物质的消化降解过程.经典的凋亡刺激、细胞内第二信使如自由基、鞘氨醇以及嗜溶酶体毒素等都能诱导LMP,继而LMP又导致线粒体外膜通透化(MOMP)和半胱天冬酶的激活.MOMP和半胱天冬酶激活是细胞凋亡的标志.癌细胞溶酶体不同于正常细胞,参与组织浸润和肿瘤生长的溶酶体酶高表达,热休克蛋白过表达能局部阻止LMP.部分细胞质和细胞器的自噬隔离,参与了细胞对营养缺乏和亚细胞死亡损伤的适应,因此在某种情况下自噬可防止细胞死亡;但凋亡被抑制时,高度自噬又是细胞死亡的效应因子.

去铁胺激活半胱天冬酶3诱导HL-60凋亡

为了研究铁螯合剂-去铁胺(deferoxamine,DFO)诱导人白血病细胞株HL-60凋亡时半胱天冬酶-3(caspase-3)活性的变化并探讨DFO诱导凋亡的可能机制.HL-60细胞经HE染色,在光学显微镜下观察其形态结构变化,用TUNEL法和流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测caspase-3活性,原位杂交法检测凋亡基因bax的转录水平.结果表明,HL-60经去铁胺处理后,典型的细胞形态改变、DNA末端原位标记和FCM检测均证实DFO可诱导细胞凋亡,凋亡率与药物剂量和作用时间呈依赖性.在DFO诱导HL-60凋亡过程中,caspase-3活性明显升高,凋亡基因bax的转录水平均较对照组增高(P＜0.05).caspase广谱抑制剂Z-AVD可明显降低DFO诱导的细胞凋亡率.结论:DFO通过激活caspase-3和增强bax活性而诱导HL-60凋亡.

低剂量拓扑替康诱导肺癌脑转移HTB-56/DDP细胞株凋亡机制的研究

目的 探讨低剂量拓扑替康(TPT)治疗肺癌脑转移的机制.方法 采用体外培养耐顺铂肺腺癌细胞HTB-56/DDP,并用Annexin V-FITC染色法检测细胞的早期凋亡;PI单染色法检测细胞周期.结果 Caspase-3、8特异性抑制剂和TPT联用组与单用TPT组相比其存活率较高(P＜0.05); TPT组(6.4μmol·L-1)于12 h出现早期凋亡,caspase抑制剂组出现延迟,凋亡率降低;流式细胞仪检测到细胞周期发生改变,G1期细胞较对照组增多(P＜0.05),S期细胞减少(P＜0.05).结论 低剂量TPT治疗肺癌脑转移的机制可能与其诱导肿瘤细胞凋亡相关,该过程与caspase-3、8的相关活化过程有关.

淫羊藿甙对辐照小鼠的抗凋亡作用与半胱天冬酶活性的相关性研究

目的:观察淫羊藿甙抗辐射损伤作用,并探讨其抗辐射损伤机制.方法:KM种小鼠于60Co γ射线照射前48,24h及照后即刻灌胃淫羊藿甙,剂量分别为1,10,100mg/kg,照射剂量8.0Gy,观察受照射小鼠30d存活率和死亡动物平均存活时间.另外观察淫羊藿甙对KM种小鼠受5.5Gy 60Co γ射线照射后小鼠胸腺、脾脏和骨髓细胞凋亡率、半胱天冬酶-3(caspase-3)和半胱天冬酶-8(caspase-8))活性的影响.结果:中剂量淫羊藿甙组30d存活率较照射对照组提高50%,死亡动物平均存活时间延长2.5d.照射对照组胸腺、脾脏和骨髓细胞在照射后6,12和24h均有凋亡.胸腺和脾脏于照射后12h凋亡率高,骨髓于照后6h凋亡率高.照射24h后,3种组织的凋亡率均明显降低.中剂量淫羊藿甙可降低照射后6,12h胸腺、脾脏、骨髓细胞凋亡率和照射后24h脾脏、骨髓细胞凋亡率,抑制照射后6h caspase-3活性,对半胱天冬酶-8活性无影响.结论:淫羊藿甙具有抗辐射损伤作用,其机制之一可能是通过抑制caspase-3活性降低细胞凋亡率.

以半胱天冬酶家族为治疗靶点的研究进展

半胱天冬酶(caspase)家族是细胞凋亡事件中的核心因子,其异常表达或活性失衡与许多急慢性病理状态关系非常密切.一些天然及合成的caspase活性调节剂能通过影响该家族成员的活性或表达而发挥抑制或诱导凋亡作用,达到改善疾病状态的目的.本文将简要介绍国内外在此领域取得的一些研究进展和展望,提示以caspase家族为靶点设计干涉细胞凋亡进程的药物是有发展前景的.

半胱天冬酶与缺血性脑血管病

缺血性脑血管病是目前困扰医学界的难题之一,除了缺血期造成的急性神经元坏死外,迟发性神经元凋亡是造成缺血后损伤的另一主要原因.而且,与坏死不同,通过调控凋亡相关因子,迟发性神经元凋亡可以逆转.而被称为"死亡杀手"的半胱天冬酶(caspases)在神经元凋亡中起十分重要的作用.国内外学者对半胱天冬酶的调控机制进行了大量研究,并且通过调控半胱天冬酶的活性,在缺血性脑血管治疗方面取得了初步的进展.本文将对这一主题进行综述.

半胱天冬酶与中枢神经系统疾病

对凋亡(apoptosis)的分子机制研究显示,凋亡是一个遗传性的程序性过程,涉及一系列基因的激活表达及调控.凋亡的失调与许多疾病,包括肿瘤、神经变性、自身免疫、心脏疾病和其他一些疾病的发病机制有关.

凋亡抑制因子XIAP、Livin在子宫腺肌病中的研究进展

细胞凋亡是机体消除冗余、衰老和受损细胞,用来维持内环境稳定的一种生理过程.国内外已经做过大量研究,提示细胞凋亡率的下降和多种肿瘤的发生有关[1],子宫腺肌病是一种有恶性肿瘤行为的良性病变,其发病机制与细胞凋亡异常的相互关系也得到越来越多的研究[2].凋亡抑制蛋白家族是近年来发现的一个凋亡抑制基因,XIAP是其中有效的半胱天冬酶(caspases)抑制剂,它不但可直接抑制、还可多种途径调解细胞凋亡,Livin 是新发现的凋亡抑制蛋白家族成员,能明显抑制细胞凋亡[3].想要深入了解子宫腺肌病的发病机理,凋亡相关基因与该疾病的发生、演进关系的研究十分重要,并能开辟其治疗的新方法.

2001-2010年《营养学报》学术论文的综述(Ⅳ)

7 营养学基础7.1 蛋白质和氨基酸蛋白质:骨桥蛋白能促进成骨细胞(0B)增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和骨保护素(OPG)/核因子κ B受体活化因子配体(RANKL) mRNA的表达[726].白果活性蛋白有较好的抗生物氧化作用[727].大豆蛋白在体外消化实验中可促进不溶性钙磷复合物的形成,并能结合胆汁酸[728].大豆分离蛋白在体外使用胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解,可产生血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)活性肽[729].大豆硒蛋白能够显著地增加小鼠抗氧化酶活力、促进免疫器官发育[730].荞麦蛋白质提取物可清除活性氧(ROS)自由基[731].甘薯糖蛋白提取物可保护新西兰白兔体内脂质过氧化损伤[732].黑麦草叶蛋白(RLPC)水解物比RLPC更显著促进大鼠生长发育[733].乳凝集素促进新生仔兔近端空肠粘膜形态发育和小肠CD4+和CD25+淋巴细胞发育[734].牛乳铁蛋白素(Lfcin B)可诱导Jurkat细胞凋亡,增加半胱天冬酶(caspase) -3、-9和胞浆中细胞色素C的含量[735].

白花蛇舌草多糖诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及其机制研究

目的 研究白花蛇舌草多糖(PEHD)对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖的影响,为其应用于临床治疗MM提供实验依据.方法 以MM细胞株RPMI 8226为研究对象.MTT法检测PEHD对RPMI 8226细胞增殖的影响.Annexin V-FITC/碘化丙锭(PI)双染法(Annexin V/PI)标记的流式细胞术检测PEHD诱导RPMI 8226细胞凋亡情况.Hoechst 33258染色法观察PEHD诱导RPMI 8226细胞凋亡的形态学改变.用Western blot检测PEHD处理后有关凋亡信号传导通路蛋白caspase-3、-8、-9和PARP蛋白的表达以及PEHD作用前后NF-κB蛋白以及其他通路蛋白的变化情况.结果 PEHD在一定浓度范围内对RPMI 8226细胞有明显的增殖抑制作用,高抑制率达到了92.3％,在1～4 mg/ml浓度范围内呈时间-剂量依赖性.不同浓度PEHD分别作用24 h,RPMI 8226细胞均可见凋亡小体,且凋亡小体数量随PEHD浓度增加而增加.1、2、3 mg/ml PEHD诱导的细胞早期凋亡率分别为22.52％、62.31％、69.94％,高于空白对照组8.93％.1、2、3 mg/ml PEHD作用24 h,RPMI 8226细胞caspase 8、9、3和PARP蛋白表达上升,Mcl-1、Bcl-xl、Bid、Bim的表达随着PEHD浓度的增加而下降,而Bax、Bak、Bad表达上升,但p-AKT蛋白(相对分子质量60 000)的表达明显下降,NF-κB蛋白表达水平明显下调.结论 在一定浓度范围内的PEHD(1 ～4 mg/ml)可明显抑制RPMI 8226细胞增殖,呈时间和浓度依赖性；其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关；诱导细胞凋亡机制与其激活caspase-8、-9、-3及PARP蛋白表达,下调p-AKT及NF-κB蛋白表达有关.

吲哚美辛诱导K562细胞凋亡过程中半胱天冬酶及细胞内游离钙浓度的变化

目的了解在吲哚美辛诱导的K562细胞凋亡过程中半胱天冬酶3，8的表达、活化情况及亚细胞定位；细胞内游离钙离子浓度(［fCa2+］i)变化及其机制；并探讨其凋亡调控是否依赖于环氧化酶(COX)的活性抑制。方法用共聚焦激光扫描显微镜(LSCM)观察在吲哚美辛诱导凋亡过程中K562细胞内半胱天冬酶3，8的变化及亚细胞定位，并用Western blot分析其蛋白质的表达、活化情况；用钙荧光探针结合LSCM检测K562细胞［fCa2+］i变化，并行钙螯合剂乙二醇双四乙酸(EGTA)阻断试验探讨细胞内［fCa2+］i变化的可能机制；对K562细胞加用COX抑制剂并观察细胞活力变化(MTT试验)。结果①半胱天冬酶3，8分子呈散点状分布于胞浆及胞核，在吲哚美辛诱导凋亡过程中其表达水平随吲哚美辛浓度增加而上调，Western blot分析证实其表达上调并被裂解激活。②K562细胞内［fCa2+］i随吲哚美辛浓度增高而增高；在Ca2+螯合剂EGTA阻断胞外Ca2+内流的情况下，吲哚美辛仍能诱导细胞内［fCa2+］i增高及细胞凋亡，但增高的幅度较无EGTA干预明显为低。③低浓度吲哚美辛对K562细胞活力无明显影响，高浓度则明显抑制细胞活力。结论①半胱天冬酶3，8的表达上调和裂解激活是吲哚美辛诱导K562细胞凋亡的重要机制；活化的半胱天冬酶3，8呈弥漫性散点状分布于胞浆和胞核。②细胞内［fCa2+］i增高在吲哚美辛诱导K562细胞凋亡过程中可能起重要作用；胞外钙内流是细胞内［fCa2+］i增高的主要原因；胞内钙库释放可致［fCa2+］i浓度增高并能触发细胞凋亡。③吲哚美辛诱导的K562细胞凋亡不依赖于COX活性抑制。

甲异靛诱导NB4细胞凋亡的分子机制研究

甲异靛对多种肿瘤细胞生长具有抑制作用~([1-2]),对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞系NB4细胞有显著的诱导细胞凋亡作用,但其具体机制尚不明确~([3]).我们通过研究半胱天冬酶(caspase)、蛋白激酶C(PKC)以及促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)在甲异靛诱导细胞凋亡过程中的变化,对甲异靛诱导NB4细胞凋亡的机制进行了初步探讨.

高三尖杉酯碱抗血管新生潜能的探讨

已有研究显示,在体外高三尖杉酯碱(HHT)能诱导不同类型白血病细胞凋亡.HHT主要通过线粒体膜电位下降、细胞色素C释放和半胱天冬酶3激活而诱导细胞凋亡[1].近年来,白血病与血管新生的关系引起了人们的关注,HHT是否也能通过抗血管新生作用,发挥抗白血病效应?为此,我们以huECV304细胞和K562细胞为对象,初步探讨HHT抗血管新生作用的潜能.

重型再生障碍性贫血患者血清诱导CD34+细胞凋亡及PML蛋白表达

近年的研究证实,早幼粒细胞白血病(promyelocytic leukemia,PML)基因不仅在早幼粒细胞白血病的发病中起重要作用,而且与人体其它恶性肿瘤(如肝癌)的发病密切相关[1,2],是多种细胞凋亡途径的核心基因[3].再生障碍性贫血(再障)的重要发病机制之一是造血细胞凋亡增加,但有关再障患者细胞凋亡增加的机制尚不完全清楚.在过去的研究中,我们证实了再障患者血清可诱导CD34+细胞凋亡[4,5].本研究中我们进一步测定再障患者血清对正常人CD34+细胞凋亡及PML蛋白表达的影响,并同时观察半胱天冬酶(caspase)3,8抑制剂对这种影响的阻断作用.

延龄草诱导人结肠癌RKO细胞凋亡的作用机制研究

目的:探讨延龄草诱导结肠癌RKO细胞凋亡的作用机制.方法:以人结肠癌RKO细胞株为模型,通过MTT实验检测延龄草不同提取部位对RKO细胞的细胞毒性;以流式细胞术及光比色法检测延龄草乙酸乙酯部位对RKO细胞线粒体膜电位及Caspase9和Caspase3活性的影响.结果:延龄草乙酸乙酯部位(EE-TM)对RKO细胞增殖抑制作用显著(P＜0.01),干预24、48及72 h后的IC50值依次为52.64、22.56及18.39 μg/mL;EE-TM干预12h后可以导致RKO细胞线粒体膜电位下降(P＜0.01),干预24h及48 h后可以导致RKO细胞内Caspase9及Caspase3的活性增强(P＜0.01).结论:延龄草具有体外抗结肠癌活性,作用机制可能是通过线粒体通路介导细胞走向凋亡.

解毒祛瘀滋阴药对MRL/lpr小鼠外周血淋巴细胞凋亡及Caspase表达的影响

目的:探讨解毒祛瘀滋阴中药对MRL/lpr小鼠外周血淋巴细胞凋亡及其Caspase2、Caspase3蛋白的影响.方法:80只MRL/lpr小鼠随机分为:模型组:20只,灌胃生理盐水;中药组:20只,灌胃解毒祛瘀滋肾中药煎剂;西药组:20只,灌胃强的松混悬液;中西药组:20只,中西药分别灌胃;正常组:昆明小鼠选用20只,生理盐水灌胃,均每日1次,每次0.5mL.连续饲养用药12周后取血,以梯度离心法分离提纯外周血淋巴细胞(PBLC),培养48h,流式细胞仪检测凋亡率;另Western blot法检测PBLC Caspase2及Caspase3的蛋白表达.结果:正常组、中药组、西药组和中西药组PBLC 0和48h凋亡率高于模型组,差异有显著性(P＜0.05,P＜0.01).0h西药组、正常组与中西药组的凋亡率无明显差异(P＞0.05),但中药组和模型组与中西药组比较,差异有显著性(P＜0.05);48h西药组与中西药组的凋亡率有明显差异(P＜0.05),中药组和模型组与中西药组比较,差异有显著性(P＜0.01);Caspase-2蛋白水平由高到低依次为:中西药组＞西药组＞中药组＞正常组＞模型组;Caspase-3蛋白水平被激活的由高到低依次为:西药组＞中西药组＞中药组＞正常组＞模型组.结论:解毒祛瘀滋阴药对MRL/lpr小鼠的PBLC凋亡率及Caspase2、Caspase3蛋白表达均有影响,能协同糖皮质激素对PLBC凋亡障碍起调整作用.

虫草素抑制帕金森病细胞凋亡的caspase激活途径研究

目的 研究虫草素抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡的caspase激活途径.方法 实验分为对照组、模型组、虫草素三个剂量组(0.4×10-6、2.0×10-6和8.0×10-6 μnol· L-1).以1.0 μmol·L-1鱼藤酮制备PC12细胞帕金森病(parkinson's disease,PD)模型,MTT法测定细胞存活率,流式细胞技术检测细胞内ROS水平,Western blot法检测细胞内caspase-3、caspase-8、caspase-9、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和fas蛋白的表达.结果 虫草素能显著升高鱼藤酮诱导的PC12细胞的存活率(P＜0.05),降低细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量(P＜0.01).与对照组比较,模型组显著上调了caspase-3、caspase-8、caspase-9和fas蛋白的表达并促进了caspase-3和caspase-9的活化(P＜0.01).虫草素能明显减少后两者的激活,下调caspase-8和fas蛋白的表达(P＜0.01).结论 虫草素可减少细胞氧化应激,通过内源性以及fas受体途径抑制caspase-3的激活而抑制细胞凋亡.

现代医学200词90、半胱天冬酶信息传递

炎性体的研究进展

固有免疫系统通过模式识别受体( Pattern-recognition receptor,PRRs)识别病原相关分子模式( Pathogen associated molecular pattern,PAMP)或者损伤相关分子模式( Damage-associated molecular patterns,DAMP)来识别和清除外源性病原微生物和自身细胞释放的内源性分子.PRRs主要包括Toll样受体( Toll-like receptor,TLR)、NOD样受体(Nucleotide-binding oligomerization domain like receptor,NLR)、RIG样受体(Retinoicacid-inducible gene-like helicase,RLH)和C型植物血凝素受体(C-type lectin receptors,CLR).其中NLR感受病原体及危险信号后可组装形成炎性体;炎性体( Inflammasome)是一种细胞内大分子量的多蛋白复合体,能够激活炎性半胱天冬酶-1( Caspase-1),促进IL-1β和IL-18促炎因子的加工和成熟而发挥生物学效应,参与机体的固有免疫反应.