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内质网应激相关因子 CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用
目的：探讨内质网应激相关因子CCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白（ CHOP）的表达及其在蛛网膜下腔出血（ SAH）后早期脑损伤（ EBI）中的作用。方法选取健康雄性SD大鼠78只，采用随机数字表法将其分为空白对照组（6只）、假手术组（36只）与SAH组（36只）。将假手术组和SAH组分别于1、6、12、24、48、72 h，采用简单随机抽样法选取6只大鼠处死。比较各组不同时间点光镜及电镜下大鼠海马神经元形态改变、 CHOP相对表达水平、海马神经元凋亡细胞水平及神经行为学评分。结果3组大鼠6、12、24、48 h时CHOP相对表达水平比较，差异均有统计学意义（ P＜0.05）；其中SAH组大鼠6、12、24、48 h时CHOP相对表达水平均高于空白对照组和假手术组（P＜0.05）。空白对照组和假手术组大鼠不同时间点 CHOP相对表达水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。空白对照组与假手术组仅有极少数海马神经元凋亡细胞； SAH组1 h海马神经元未见明显凋亡改变； SAH组6、12 h海马神经元凋亡细胞较前增多，部分散在的海马神经元凋亡细胞的细胞核呈棕褐色； SAH组24 h海马神经元凋亡细胞明显增多； SAH组48 h海马神经元凋亡细胞逐渐减少，72 h可见少量海马神经元凋亡细胞。3组大鼠6、12、24、48 h时海马神经元凋亡细胞水平比较，差异均有统计学意义（ P＜0.05）；其中SAH组大鼠6、12、24、48 h时海马神经元凋亡细胞水平均高于空白对照组和假手术组（ P＜0.01）。空白对照组和假手术组大鼠不同时间点海马神经元凋亡细胞水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。空白对照组、假手术组及SAH组大鼠实验前神经行为学评分比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。3组大鼠6、12、24、48 h时神经行为学评分比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；其中SAH组大鼠6、12、24、48 h时神经行为学评分均低于空白对照组和假手术组（ P＜0.01）。空白对照组和假手术组大鼠不同时间点神经行为学评分比较，差异无统计学意义（ P＞0.05）。 SAH组CHOP相对表达水平与海马神经元凋亡细胞水平呈正相关（r＝0.933， P＜0.01）。结论 SAH后早期CHOP表达增高，海马神经元凋亡细胞增多，神经行为学评分降低，提示CHOP在SAH后内质网应激诱导的细胞凋亡中发挥重要作用。
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CCAAT/增强子结合蛋白-α基因对小鼠肝纤维化的治疗作用
目的 检测CCAAT/增强子结合蛋白-α(C/ EBP-α)基因诱导肝纤维化小鼠体内肝细胞和肝星状细胞(HSC)凋亡的差异.方法 将60只BALB/c小鼠均分为正常组、造模组、治疗组、空白对照组、阴性对照组,每组12只.除正常组外,其余各组腹腔注射四氯化碳(CCl4)建立小鼠肝纤维化模型.治疗组、空白对照组、阴性对照组均于造模第1周经尾静脉分别注射表达C/EBP-α的腺病毒载体(Ad-C/EBP-α)、PBS、腺病毒空载体.免疫组织化学法检测小鼠肝组织中C/EBP-α和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.经透射电子显微镜观察小鼠肝组织标本中汇管区周围和远离汇管区部位肝血窦内皮结构.用TUNEL法检测小鼠肝组织的细胞凋亡情况.通过天狼星红染色和肝组织羟脯氨酸含量测定来检测小鼠的肝纤维化情况.多组间比较行单因素方差分析,两组间比较行t检验.结果 正常组C/EBP-α主要表达于肝细胞核内.造模组、空白对照组、阴性对照组C/EBP-α表达量均减少.治疗组C/EBP-α表达量升高,主要表达于肝血窦间隙和血管周细胞.造模组、空白对照组、阴性对照组肝血窦结构扭曲,血管壁增厚,肝细胞变性,出现大量脂滴.治疗组内皮细胞血管壁增厚程度较造模组有所降低.正常组、造模组、治疗组、空白对照组、阴性对照组天狼星红阳性染色细胞所占比例分别为(0.10±0.03)％、(5.81±0.32)％、(2.32±0.45)％、(6.34±0.81)％、(6.10±0.92)％,羟脯氨酸含量分别为(0.07±0.00) μg/mg、(0.69±0.10) μg/mg、(0.19±0.06) μg/mg、(0.56±0.03) μg/mg、(0.64±0.08) μg/mg,α-SMA阳性染色细胞所占比例分别为(0.50±0.03)％、(5.30±0.52)％、(2.15±0.29)％、(5.53±0.43)％、(5.42±0.25)％,TUNEL阳性染色细胞数分别为0.25±0.08、0.15±0.02、7.10±1.53、0.13±0.03、0.18±0.07,各指标组间比较差异有统计学意义(F=113.74、148.29、292.43、140.25,P均＜0.05),其中正常组与造模组、造模组与治疗组、治疗组与空白对照组、治疗组与阴性对照组各指标比较,差异均有统计学意义(t天狼星红阳性染色细胞=-52.54、-16.20、-10.60、-7.99,t羟脯氨酸含量=-168.00、11.53、11.07、12.54,tα-SMA阳性染色细胞=-24.77、-13.82、15.94、18.37,tTUNEL阳性染色细胞=3.26、-11.91、-11.95、-11.88,P均＜0.05),造模组与空白对照组、造模组与阴性对照组比较则差异均无统计学意义(P均＞0.05).小鼠肝组织中TUNEL阳性染色细胞主要位于肝血窦间隙和血管周围,与α-SMA阳性染色细胞的分布较一致.结论 C/EBP-α基因能有效缓解CCl4诱导的小鼠肝纤维化,主要与诱导HSC凋亡有关,而对肝细胞无明显促凋亡作用.
关键词： 肝硬化 肝星状细胞 CCAAT增强子结合蛋白类 -
增强子结合蛋白C/EBPα对白血病BALB/c裸鼠的肿瘤抑制作用
目的 探讨增强子结合蛋白C/EBPα在白血病裸鼠体内的肿瘤抑制作用.方法 将30只BALB/c裸鼠随机分转染组(10只)、空载组(10只)、对照组(10只),建立皮下瘤模型,并将30只BALB/c裸鼠如上分组建立白血病模型,将C/EBPα稳定表达细胞株pEGFP-C/EBPα-K562、空载细胞株pEGFP-K562及白血病细胞株K562分别经皮下和尾静脉注射到相应组裸鼠体内,形成皮下瘤和血液病模型.观测皮下肿瘤的变化,应用TUNEL检测细胞的凋亡,瑞特-吉姆萨染色观察血液病模型裸鼠外周血和骨髓中白血病细胞增殖能力,RT-PCR检测增殖相关基因的表达.结果 皮下瘤模型中pEGFP-C/EBPα-K562组肿瘤质量及大直径为(24±0.1)g和(11±2)mm,空载组和对照组分别为(5.1±0.3)g、(19±3)mm和(5.7±0.4)g、(23±3)mm(均P＜0.05),TUNEL检测发现pEGFP-C/EBPα-K562组肿瘤细胞凋亡明显增加(P＜0.05);血液病模型鼠外周血可见白血病细胞,pEGFP-C/EBPα-K562组白血病细胞增殖能力明显低于空载组和对照组,可见明显细胞分化现象,RT-PCR检测发现p53基因上调和c-myc基因下调.结论 增强子结合蛋白C/EBPα在白血病小鼠体内具有促进肿瘤细胞凋亡和抑制白血病细胞增殖的能力,并能促进白血病细胞分化.C/EBPα的白血病抑制作用可能是通过对相应基因的调控来实现.
