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甘丙肽及其受体在孕期应激大鼠新生子代前额叶皮层和海马脑区表达的性别差异
目的 探讨SD大鼠孕期应激对子代前额叶皮层(PFC)和海马脑区发育的影响. 方法 SD雌鼠12只,随机分为对照组和孕期应激组,建立大鼠孕期应激模型(孕8～21 d期间,束缚应激2 h/d),子代出生当天,称量体重,计算雌雄比例;各组按窝别随机取雌雄子鼠各6只,取PFC和海马,采用实时定量PCR(Q-PCR)方法检测两组的雌雄性子代PFC和海马脑区甘丙肽(GAL)、甘丙肽受体(GALRs)、脑源性神经营养因子(BDNF)和酪氨酸激酶B(TrkB)的表达,分析两组子代各指标的差异. 结果 与对照组比较,孕期应激组子代大鼠体重明显降低[(6.45±0.19)vs.(7.57±0.23)g],差异具有统计学意义(P＜0.01);孕期应激组雌性子代有增加趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).孕期应激组雄性子代PFC脑区的TrkBmRNA表达较对照组显著增加[(1.35±0.12)vs.(1.00±0.07)],雌性子代PFC脑区GALR1 mRNA及BDNF mRNA表达水平较对照组显著降低[分别为(0.51±0.13)vs.(1.04±0.11)、(0.73±0.07)vs.(1.11±0.10)](P均＜0.05).雌性子代海马脑区的GAL mRNA表达较对照组显著增高(2.51±0.18)vs.(1.00±0.11)],BDNF mRNA表达显著降低[(0.75±0.05)vs.(1.00±0.03)](P均＜0.05). 结论 大鼠孕期应激可对子代大鼠脑发育产生影响,雌性子代较雄性子代更敏感.
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音乐干预对孕期应激仔鼠恐惧行为的影响及相关机制
目的：研究音乐干预对孕期应激仔鼠恐惧行为和杏仁核胃泌素释放肽受体(GRPR)表达的影响。方法 Wistar孕鼠16只随机分为应激组(n=8)和对照组(n=8)。应激组妊娠11~20 d每天将其置于窄小的固定器中并给予强光照射。对照组不给予刺激。应激组仔鼠出生后第1天起，予播放音乐(SM组)或相同分贝的白噪音(SW组)，SC组不给予刺激。生后60 d行防御退缩试验，免疫荧光组织化学和荧光实时定量PCR测定杏仁核GRPR及其mRNA表达。结果与其他两组比较，SM组仔鼠潜伏期显著缩短(P<0.001)，出小室次数显著增多(P<0.001)；杏仁核GRPR阳性细胞计数及mRNA表达显著增加(P<0.001)。结论生后给予音乐干预可以纠正孕期应激仔鼠异常的恐惧行为，同时伴有杏仁核GRPR高表达。
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丰富环境对孕期应激大鼠子代海马糖皮质激素的影响
目的：检测丰富环境对孕期应激大鼠子代海马糖皮质激素受体(Glucocorticoid Receptor, GR)的影响。方法：SD孕鼠随机分为2组,正常组和实验组。正常组动物不做任何处理,其子代断乳后在标准环境下喂养；实验组动物在孕第13~19天接受限制性应激,其子代断乳后一半在标准环境下喂养(构成应激组),另一半子代在丰富的环境下喂养(构成应激+丰富环境组)。所有子代出生后第35天被处死。用ABC免疫组织化学和 Western blot方法分别检测海马GR的表达。结果：GR 阳性产物广泛分布于海马各区神经元,应激组GR表达明显少于正常组；应激+丰富环境组海马 GR 的表达明显多于应激组,与正常组相比差别无统计学意义。结论：丰富环境能有效逆转孕期应激造成的子代海马GR的表达降低。
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不同环境对小鼠孕期应激子代海马 CREB 磷酸化的影响
目的：：检测不同环境对小鼠孕期应激子代海马磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)的影响。方法：将12只孕小鼠随机分为对照组和实验组。对照组动物不做任何处理，其子代断乳后喂养于标准环境；实验组动物在孕第12~18天实施限制性应激，其子代断乳后一半喂养于标准环境(应激+标准环境组)，另一半子代喂养于丰富的环境(应激+丰富环境组)。子代出生后5周被处死，用免疫印迹和免疫组织化学显色法检测海马内 p-CREB 的表达。结果：p-CREB 免疫阳性产物广泛分布于海马各区神经元。免疫印迹显示应激+标准环境组 p-CREB 表达明显少于对照组(P <0.05)；应激+标准环境组海马 p-CREB 的表达也明显少于应激+丰富环境组(P <0.05)，应激+丰富环境组与对照组比较差异无统计学意义(P >0.05)。结论：丰富环境能有效改善孕期应激造成的子代海马 p-CREB 表达降低。
关键词： 孕期应激 不同环境 子代 海马 磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 -
孕期应激对子代影响及相关机制的探讨
孕期应激对子代的影响受到多种因素的影响.虽然目前机制尚不清楚,但是大量实验证明其可能与HPA轴活性的改变,NPY能系统,多巴胺系统和5-HT神经元有关.此外,研究影响孕期应激的各种因素之间的互相作用和联系有助于明确孕期应激对子代影响的具体机制.本文从神经内分泌、情绪、学习记忆等多方面综合分析了孕期应激对子代影响的特点,包括应激强度依赖性、时间差异性和个体差异性.
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孕期应激及对子代HPA轴的影响及机制探讨
动物实验表明,孕期应激可以改变子代下丘脑-垂体-肾上腺轴的功能,并与人类和动物的认知障碍、行为和精神疾病相关.本研究讨论了孕期应激对子代HPA轴的影响及可能的机制,其中,母体糖皮质激素、胎盘、子代HPA轴负反馈调节受损是重要因素.各种因素的具体机制及各因素间的相互作用仍需进一步研究.
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水迷宫训练逆转孕期应激造成的子代海马NR2B表达的降低
目的:比较空间学习记忆中孕期应激子代和对照组子代海马空间学习功能密切相关蛋白NR2B的表达.方法:建立孕期束缚应激小鼠模型,在出生后第3周用酶联免疫法检测子代雄性小鼠血清皮质酮；在出生后第9周,采用免疫蛋白印迹和real -time PCR法检测子代雄性小鼠非空间学习记忆状态及空间学习记忆中海马NR2B的表达水平.结果:(1)基础状态下孕期应激子代血清皮质酮水平与对照组子代并无差异,应激状态下孕期应激子代血清皮质酮水平(43.7×104pg/ml)明显高于对照组子代(18.7×104pg/ml)；(2)孕期应激雄性子代在出生后第9周海马NR2B mRNA和蛋白表达均显著低于对照组雄性子代.但经过空间学习记忆训练,两组海马NR2B蛋白水平无明显差异.结论:孕期应激减少子代海马神经元NR2B的表达,但水迷宫行为训练可逆转孕期应激造成的子代海马神经元NR2B的表达降低.
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孕期不同环境对仔鼠恐惧行为的影响
目的 研究孕期丰富环境和应激刺激对发育期仔鼠恐惧行为的影响.方法 将初次妊娠11天的孕鼠随机分为:应激组、丰富环境组和对照组,每组仔鼠分别于生后25d、45d和60d进行旷场实验和防御退缩实验测试.结果 (1)在旷场实验中,各日龄应激组仔鼠均较相应对照组中央格停留时间延长,总穿格数及站立次数减少(all P＜0.05),与之相反,生后25d时丰富环境组仔鼠较对照组总穿格数增加[(101.75±11.87)格；(89.13±11.20)格；P＜0.05],而中央格停留时间缩短[(1.88±0.64)s;(3.63±1.41)s;P＜0.05].(2)在防御退缩试验中,生后25d时,应激组较对照组潜伏期延长(P＜0.05)；生后45 d时,不仅潜伏期延长(P＜0.05),自小室退出次数亦减少(P＜0.05)；而生后60d时,在上述表现的基础上,给予束缚应激刺激后其在小室内的时间较相应对照组明显延长(P＜0.05)；与之相反,生后25d时,丰富环境组较对照组潜伏期缩短[(10.43±4.27)s; (22.16±4.50)s; P＜0.05],自小室退出次数增加[(6.34±1.03)次；(3.94±1.08)次；P＜0.05].结论 孕期给予丰富的环境可以降低其幼鼠的恐惧水平,增加其探究行为.
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孕期应激对子代雌鼠成年后酒精摄取行为及脑内小白蛋白表达的影响
目的 探讨孕期应激对子代雌鼠成年后酒精摄取行为以及脑内小白蛋白表达的影响.方法 6只SD孕鼠随机分为孕期应激组(PS组,n=3)和对照组(CON组,n=3).PS组孕鼠在妊娠晚期接受限制性应激,CON组孕鼠不给予孕期应激.子代成年后,PS组和CON组雌性子代分别随机分为PS-S组(n=6)和PS-NS组(n=6),CON-S组(n=6)和CON-NS组(n=6).PS-S组和CON-S组动物先后接受限制性应激和冰水应激.所有动物均给予水和酒精溶液进行喂养,比较各组子鼠的基础酒精摄人量和子代应激后的酒精摄入量.用免疫组化方法检测子代海马和前额皮质小白蛋白的表达.结果 PS-NS组在第1,4,6周的酒精摄入量明显低于CON-NS组(P<0.05).PS-S组在限制性应激后第1周的酒精摄入量[(3.79±0.47)kg·d-1·g-1]明显高于CON-S组[(1.68±0.68)kg·d-1·g-1](P<0.05),而PS-S组动物在冰水应激后第3周的酒精摄入明显小于CON-S组(P<0.05).另外,PS-S组子代海马CA2区和前额皮质M1区的小白蛋白表达均明显低于CON-S组(15.82±0.30,26.52±0.12,P<0.05).结论 孕期应激可影响成年雌性子代的酒精摄取行为,此过程可能与海马和前额皮质小白蛋白表达的减少有关.
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孕期应激对母儿影响的研究新进展
孕期的精神社会应激会显著增高患者的CRH和皮质醇水平,造成不良妊娠结局,如早产、低体重儿、妊娠期高血压疾病.而且孕期应激与产后抑郁发生关系密切,对后代的心理、行为、中枢系统发育都有不利影响.
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孕期应激对子代雌鼠成年后钙结合蛋白Parvalbumin和Calretinin表达的影响
目的：探讨孕期应激对子代雌鼠成年后钙结合蛋白阳性神经元表达的影响。方法6只SD孕鼠随机分为孕期应激组（PS组）和对照组（CON组）。PS组孕鼠在妊娠晚期接受限制性应激，CON组不给予孕期应激。子代成年后，PS组和CON组雌性子代随机分别又分为PS-S组，PS-NS组，CON-S组和CON-NS组（n均=6）。PS-S组和CON-S组动物先后接受限制性应激和冰水应激。动物在接受应激后均给与水和酒精喂养，用Western blot检测海马钙结合蛋白Parvalbumin（PV）和Calretinin（CR）蛋白的表达，进一步结合共聚焦免疫荧光组织化学方法检测PV和CR在海马CA1、CA3区和齿状回（dentate gyrus， DG）的表达。结果与CON-NS组相比，海马区PV和CR的蛋白表达在CON-S，PS-NS和PS-S组下降，以PS-S组表达低。PV在海马CA1、CA3区和DG的免疫荧光结果与PV的蛋白表达呈一致性，免疫阳性细胞明显减少；而CR的表达除了在海马CA1区的PS-NS组略有升高外，在其余各组的表达均较减少。与CON-NS组相比，PV和CR在其它各组的蛋白表达和免疫阳性细胞计数差异有统计学意义，其中以PS-S组的表达降低为有统计学意义（P<0.05）。结论孕期应激可影响子代雌鼠成年后海马结构钙结合蛋白PV和CR的表达。
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中晚期孕期束缚应激对子代下丘脑多巴胺能神经元发育的影响
目的 研究中晚期孕期束缚应激对子代下丘脑多巴胺能神经元发育的影响.方法 使用怀孕SD大鼠,实验组在孕期第15～21 d进行束缚应激,对照组则不受任何干扰.子代大鼠出生的当天为出生后的第0天.在子代大鼠出生后的第1天(P1),第7天(P7)和第30天(P30),分别测子代大鼠的体重,通过免疫组织化学染色和Western Blotting,观察和比较下丘脑内合成多巴胺的关键酶酪氨酸羟化酶(TH)染色像素密度及TH蛋白水平变化.结果 与正常对照组相比,中晚期孕期束缚应激子代大鼠在P1体重较低,下丘脑TH染色像素密度和TH蛋白水平上调,这种异常在P7和P30消失.结论 孕期应激使子代下丘脑多巴胺神经元早期发育异常,可能是造成子代神经系统行为学异常的原因之一.
