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细胞因子信号转导抑制因子1对脂多糖诱导的气道黏液高分泌的抑制作用及其机制
目的 探讨细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)对脂多糖诱导的气道黏液高分泌的抑制作用及其机制.方法 培养人支气管上皮16HBE细胞,根据脂多糖刺激时长将细胞分为0、0.5、1、6、12及24h组,确定后续实验作用时长.根据不同的转染或处理措施,将细胞分为七组,分别为未转染组、空质粒组、野生型SOCS1组、阴性siRNA组、SOCS1小干扰RNA(SOCS1-siRNA)组、生理缓冲液组和Filgotinib组,再给予脂多糖刺激,以同体积磷酸盐缓冲液处理细胞为对照.酶联免疫吸附(ELISA)法检测以上各组细胞裂解液中黏蛋白5AC (MUC5AC)(μg)相对裂解液总蛋白(mg)的表达量.Western印迹法分别检测细胞裂解液中SOCS1、磷酸化JAK1和STAT1表达量,分别以β-肌动蛋白或总JAK1和STAT1蛋白表达量为内参.结果 脂多糖可诱导MUC5 AC蛋白高表达,0、0.5、1、6、12、24 h组MUC5AC的相对表达量分别为(2.86±0.20)、(3.42±0.29)、(3.43±0.12)、(10.22±0.96)、(14.56±1.12)、(14.15 ±1.34) μg/mg,而SOCS1蛋白则呈反向表达;6h组MUC5AC蛋白和SOCS1蛋白均处于中间水平,故选择6h为脂多糖刺激时长.野生型SOCS1组细胞内SOCS1呈过表达状态,并且同Filgotinib组一样,JAK1和STAT1磷酸化水平均显著降低;野生型SOCS1组和Filgotinib组MUC5AC的相对表达量均显著低于未转染组[(4.04±0.65)、(7.02±0.83)比(10.37±1.00) μg/mg](均P＜0.05).反之,SOCS1-siRNA组细胞内SOCS1表达明显下降,JAK1和STAT1磷酸化水平增强;SOCS1-siRNA组MUC5AC的相对表达量显著高于阴性siRNA组[(13.69±1.32)比(11.01 ±1.41) μg/mg] (P ＜0.05).结论 SOCS1可通过对JAK1/STAT1信号通路的负调节作用,抑制脂多糖诱导的MUCSAC高表达.
关键词： 脂多糖类 黏蛋白类 细胞因子类 Janus激酶1 信号转导及转录激活因子1 -
蓝莓联合益生菌通过IL-22调控的JAK1/STAT3/BAX通路改善非酒精性脂肪性肝病的作用机制
目的 研究蓝莓联合益生菌通过对IL-22调控的JAK1/STAT3/BAX信号通路的影响,进一步探明其改善非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的作用机制.方法 清洁级SD大鼠40只分为正常对照组(CG)、IL-22siRNA阴性对照组(IL-22SI-NC)、IL-22siRNA组(IL-22SI)、IL-22siRNA阴性对照+蓝莓益生菌组(IL-22SI-NC+ BPG)、IL-22siRNA+蓝莓益生菌组(IL-22SI+BPG).正常对照组予100％普通饮食,其余大鼠均采用复合高脂饲料制备脂肪肝模型,同时予IL-22siRNA阴性对照慢病毒及IL-22siRNA慢病毒腹部肝区注射(盲穿),隔日1次,共12周,取肝脏确认造模及siRNA封闭效果后予蓝莓益生菌原液灌胃,同时按上述分组后给予正常饮食,予蓝莓益生菌原液灌胃,共观察8周.多组间比较采用单因素方差分析,进一步比较方差齐时采用SNK法(g检验),方差不齐时用Tamhane法(q'检验).结果 IL-22SI组与IL-22SI-NC组比较,ALT、AST、TC、TG、LDL均显著升高(P值均＜0.01),HDL显著降低(P＜0.01),IL-22、JAK1、STAT3的mRNA及蛋白表达均明显减弱(P值均＜0.01)、BAX的表达明显升高(P＜0.01);与IL-22SI-NC相比,IL-22SI-NC+ BPG的ALT、AST、TC、TG、LDL均明显降低(P值均＜0.01),HDL明显升高(P＜0.01),IL-22、JAKI、STAT3的mRNA及蛋白表达均显著升高(P值均＜0.01),BAX的表达显著下降(P ＜0.01);IL-22SI+ BPG较IL-22SI组ALT、AST、TC、TG、LDL均略有降低(P值均＜0.05),HDL略有升高(P＜0.05),IL-22、JAK1、STAT3的mRNA及蛋白表达均有所增加(P值均＜0.05),BAX的表达略有减少(P＜0.05).结论 蓝莓联合益生菌能一定程度拮抗IL-22siRNA所加剧的肝细胞脂肪变性,并可以增强IL-22的表达,提示IL-22可能为蓝莓联合益生菌影响NAFLD的关键作用因子.推测蓝莓联合益生菌能增强IL-22表达,激活JAK1/STAT3信号通路,抑制其下游凋亡因子BAX的表达,减少肝细胞凋亡,增强胆固醇代谢,减少脂质沉积,达到改善NAFLD的目的,是NAFLD的一个辅助治疗方案.
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清燥救肺汤对结肠癌小鼠凋亡相关蛋白表达的影响
[目的]观察清燥救肺汤对CT26结肠癌细胞增殖及凋亡相关蛋白如增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达,细胞外调节蛋白激酶(ERK)、Janus激酶1(JAK1)、信号传导及转录激活因子1(STAT1)磷酸化蛋白表达的影响.[方法]50只雄性BALB/c小鼠,随机分为模型组,化疗组,清燥救肺汤高、中、低剂量组,每组10只.经小鼠右腋下注射CT26细胞以建立结肠癌模型.清燥救肺汤治疗组于造模前2周即开始以15.2、7.6、3.8 g·kg-1·d-1剂量的清燥救肺汤灌胃给药,化疗组在造模完成后以5-氟尿嘧啶(5-FU)25 mg· kg-1剂量腹腔注射给药(隔日1次),模型组以等体积生理盐水灌胃给药.2周后,处死各组小鼠,取瘤组织,称瘤体质量并计算抑瘤率,Western blot法检测p-ERK、PCNA蛋白表达,免疫组织化学法检测p-JAK1、p-STAT1蛋白表达.[结果]清燥救肺汤高、中剂量纽瘤体质量,p-ERK、p-JAK1蛋白表达显著降低,p-STAT1蛋白表达显著升高,与模型组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.05或P＜0.01);清燥救肺汤高、中、低剂量组PCNA蛋白表达明显降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).[结论]清燥救肺汤能显著抑制荷CT26小鼠结肠癌细胞增殖,其机理可能与降低p-ERK、PCNA、p-JAK1及升高p-STAT1蛋白表达有关.
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缺氧PC12细胞中JAK1/STAT1、STAT3介导的信号通路变化
目的 研究缺氧后PC12细胞蛋白酪氨酸激酶1/信号转导子与转录激活子1(janus kinase 1/signal transducerand activator of transcription 1,JAK1/STAT1)、STAT3 mRNA和蛋白表达变化.方法 制备缺氧细胞模型.采用半定量RT-PCR技术和Western blot法检测缺氧PC12细胞的JAK1/STAT1、STAT3 mRNA和蛋白的表达水平,并对PCR产物进行测序.结果 与对照组比较,缺氧2 h PC12细胞JAK1/STAT1、STAT3 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),在缺氧6 h达高(P<0.01).缺氧12 h的表达量降低(P<0.05).RT-PCR产物直接测序证实扩增产物片段与GenBank中相应序列相同.结论 缺氧能增强PC12细胞中JAK1/STAT1、STAT3基凶的表达,在缺氧所致脑损伤中可能发挥重要作用.
关键词： 缺氧 PC12细胞 Janus激酶1 信号的转录因子和活化子1、3 -
急性白血病患者SHP-1与JAK1 mRNA的表达与临床意义
目的 探讨SHP-1和JAKI mRNA在急性白血病(AL)患者的表达及其与AL复发及初次诱导缓解化疗疗效的关系.方法 采用半定量反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测93例AL患者骨髓单个核细胞中SHP-1和JAK1 mRNA的表达,20例健康志愿者为健康对照.结果 初治AL患者SHP-1 mRNA表达水平较健康对照组明显降低(P=0.000),治疗完全缓解(CR)后表达增高(P=0.032),复发时SHP-1 mRNA水平降低(P=0.015);初治AL患者JAKI mRNA表达水平较NC组略增高,但差异无统计学意义(P=0.051),复发AL患者JAK1 mRNA表达水平较NC组增高,有统计学意义(P=0.047);初治AL患者SHP-1 mRNA阳性组的诱导化疗CR率为88.89%,阴性患者组CR率为60.38%,差异有统计学意义(P=0.018);SHP-1与JAK1 mRNA表达呈负相关(P=0.048).结论 AL患者中SHP-1 mRNA表达降低或缺如,SHP-1mRNA阳性表达是初治AL患者预后良好的因素,并可作为判断疾病进展的预测指标.AL细胞中JAK1 mRNA丰度可能增高.
