miR-199a通过MDR1/P-gp调节肝癌细胞的耐药

目的：通过检测Hep G2及Hep G2/ADM细胞中miR-199a和MDR1/P-gp表达的差异，探讨miR-199a与肝癌化疗耐药的关系。方法利用Lipofectamine 2000转染寡核苷酸探针，荧光定量PCR方法检测miR-199a和MDR1的表达水平，Western印迹检测P-gp蛋白表达水平，MTT检测细胞存活率。结果与Hep G2细胞相比，Hep G2/ADM细胞中miR-199a表达显著下降MDR1/P-gp表达显著升高。过表达miR-199a能显著增加阿霉素对Hep G2/ADM细胞的抑制率，并抑制MDR1/P-gp的表达。干扰miR-199a能够显著地降低阿霉素对Hep G2细胞的抑制率，并增加MDR1/P-gp的表达。结论 miR-199a通过调节MDR1/P-gp的表达参与肝癌耐药形成，miR-199a可能成为逆转肝癌耐药的作用靶点。

阿霉素诱导的卵巢癌耐药细胞P-糖蛋白的表达

[目的]探讨mdr1基因编码的P-糖蛋白(mdr1/P-gp)在阿霉素(ADR)诱导的卵巢癌多药耐药细胞中的作用.[方法]MTT法检测药物对敏感细胞株(SK-OV-3)和诱导的耐药细胞株(SK-OV-3/adr)的半数致死浓度(IC50),计算耐药指数(RI)和加逆转剂后的逆转倍数,荧光显微镜观察不同时间细胞内的药物含量变化,荧光分光光度法测定细胞内ADR的含量,RT-PCR和Western blot法检测细胞耐药前后mdr1/P-gp的变化.[结果]对阿霉素、长春新碱、紫杉醇和足叶乙甙,SK-OV-3/adr细胞株的IC50均有明显增加,RI分别为58.4、122.6、41.0和43.7,逆转倍数分别为20.5、66.9、11.3和18.1.30、60、120 min SK-OV-3细胞株ADR含量分别是SK-OV-3/adr细胞株的3.7[(191.9±1.7)/(51.7±6.3)ng/mL]、5.9[(285.3±4.0)/(48.2±2.8)ng/mL]和8.6[(447.8±1.3)/(52.0±1.8)ng/mL]倍,二者比较差异有非常显著性意义(P<0.01).P-gp竞争性逆转剂(Ver)作用30、60、120 min后SK-OV-3/adr细胞ADR含量提高了1.6、2.7和5.1倍,与逆转前相比差异有非常显著性意义(P<0.01).RT-PCR和Western blot结果显示SK-OV-3/adr细胞mdr1/P-gp均表达阳性,SK-OV-3细胞mdr1/P-gp表达阴性.[结论]mdr1/P-gp在ADR诱导的SK-OV-3/adr细胞多药耐药机制中起重要作用.

人参皂苷Rh2对人肝癌细胞HepG2/ADM耐药逆转作用及其机制研究

目的 人参皂苷Rh2能抑制多种恶性肿瘤细胞增殖,但缺少Rh2对多药耐药的肝癌细胞的敏感性研究.文中主要探讨人参皂苷Rh2对人肝癌细胞株HepG2/ADM多药耐药性[盐酸多柔比星(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂(DDP)、长春新碱(VCR)]的逆转作用及机制. 方法 MTT法检测(0~250μg/mL)Rh2对HepG2/ADM细胞活力的影响;MTT法筛选佳逆转耐药的Rh2浓度.细胞分为空白对照组、ADM组和ADM+40μg/mLRh2组.空白对照组:不加药物处理;ADM组:给予ADM处理48h;ADM+40μg/mLRh2组:给予40μg/mL的Rh2预处理 30min后,给予ADM处理48h.流式细胞术检测Rh2对细胞内Rh-123荧光强度的影响;RT-PCR法检测MDR1基因的表达;Western blot检测P-gp、Bax、Bcl-2、cleved caspase-3蛋白水平. 结果 与HepG2细胞相比,HepG2/ADM对ADM、DDP、5-FU、VCR 4种化疗药物的耐药指数分别为32.95、4.63、4.20、4.81.经过40μg/mL的Rh2作用HepG2/ADM细胞48h后,耐药细胞对4种化疗药的敏感性增强且IC50明显下降,其耐药性的逆转倍数分别为3.70、3.53、2.64、2.55倍.耐药细胞内储留的Rh-123的荧光强度通过流式细胞仪检测结果显示,与ADM组比较,加入40μg/mL Rh2后,细胞内Rh-123的荧光强度明显增高(65.83±1.78 vs 78.21±1.26, P<0.01).RT-PCR结果显示,ADM+40μg/mL Rh2组MDR1表达较ADM组显著降低(0.48±0.02 vs 0.86±0.05,P<0.05).Western blot结果显示,ADM+40μg/mL Rh2组P-gp蛋白水平亦较ADM组明显降低(0.97±0.04 vs 1.91±0.03,P<0.01);ADM+40μg/mL Rh2组Bax和cleaved caspase-3表达较ADM组明显增加(1.76±0.04 vs 1.25±0.02,38.26±5.45 vs 0.42±0.04,P<0.05),同时发现Bcl-2表达明显减少(1.25±0.05 vs 1.86±0.03,P<0.05). 结论 人参皂苷Rh2能有效逆转HepG2/ADM细胞的多药耐药性,其作用机制可能与降低MDR1、P-gp表达、增加细胞内药物积累以及介导Bax/Bcl-2信号通路有关.

MDR1/P-gp与大肠癌多药耐药及中医药研究概况

肿瘤多药耐药是指肿瘤细胞对分子结构不同、作用机制各异的抗肿瘤药物产生交叉耐药,多药耐药是肿瘤化疗失败的重要原因.大肠癌多药耐药涉及P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)表达增加,谷胱甘肽转移酶(GST)活性增强,DNA拓扑异构酶(Topo Ⅱ)含量减少或性质改变等,其中,对P-gp介导的多药耐药研究多,通过药物逆转肿瘤多药耐药是提高化疗效果的重要手段,但目前许多药物存在着比较严重的不良反应,临床应用受到一定的限制.中药相对来说,毒性和不良反应较小.近年来,陆续有用中医中药逆转肿瘤多药耐药的报道,现将其研究进展综述如下.

环氧化酶-2与多药耐药基因/P-糖蛋白在乳腺癌组织中的表达及相关性研究

目的 研究乳腺癌组织中环氧化酶(COX-2)及多药耐药基因/P-糖蛋白(MDR1/P-gP)的表达,探讨其相关性及临床意义.方法 采用免疫组化对我院68例乳腺癌标本的COX-2及MDR1/P-gP进行检测.结果 68例中,COX-2阳性的表达率为47%(32/68),MDR1阳性的表达率为44%(30/68).在32例COX-2阳性表达的患者中,MDR1阳性的共29例,而36例COX-2阴性的患者中,MDR1阳性的仅1例.COX-2蛋白的阳性表达与P-gp蛋白阳性表达呈高度相关性.结论 乳腺癌组织中COX-2与MDR1/P-gp表达呈正相关,COX-2抑制剂可干预MDR1/P-gP的表达并有可能逆转乳腺癌的多药耐药(MDR).

原发性肾细胞癌中HSP70与MDR1/P-gp的表达及其与预后的关系

目的:研究原发性肾细胞癌组织中HSP70和多药耐药基因-1(MDR-1/P-gp)的表达情况并分析其与预后的关系.方法:应用免疫组化SP法检测HSP70和MDR1/P-gp的表达情况.结果:5例正常肾组织中均可见到HSP70和MDR1/P-gp的表达.60例原发性肾细胞癌中HSP70和MDR1/P-gp的阳性率分别为55%和71.67%,二者的表达与组织学类型、临床分期无关;与分级呈负相关,即分级越高,表达越低;与预后呈正相关,阳性表达预后好于阴性表达者;HSP70和MDR1/P-gp之间存在相关性.结论:HSP70和MDR1/P-gp在肾细胞癌中高表达,二者可作为判断预后的指标.

乳腺癌中MDR1/P-gp与CerbB-2、p53表达的关系及临床意义

目的 探讨乳腺癌中多药耐药基因MDR1/P-gp与CerbB-2、p53表达的关系及临床意义.方法 采用免疫组化SP法,检测186例手术切除的乳腺癌组织中P-gp与CerbB-2、p53蛋白的表达.结果 乳腺癌组织中P-gp与CerbB-2、p53蛋白的阳性表达率分别为41.4%、51.1%、38.7%.P-gp蛋白阳性组CerbB-2过表达率高于P-gp蛋白阴性组,过表达率分别为37.66%、20.18%,差异有显著性意义(P＜0.01).P-gp蛋白阳性组p53过表达率也高于P-gp蛋白阴性组,过表达率分别为28.57%、15.60%,差异有显著性(P＜0.05).P-gp表达与患者原发肿瘤的大小、淋巴结转移状况、TNM分期、病理类型以及E、P激素受体状况无关(P＞0.05).CerbB-2、p53表达在淋巴结转移的乳腺癌患者中明显升高.结论 乳腺癌中存在MDR1/P-gp与CerbB-2、P53基因共表达,与多药耐药有关.联合检测可为乳腺癌患者综合治疗方案的选择提供重要的依据.

大肠癌组织中多药耐药基因的表达及意义

目的:探讨大肠癌组织中多药耐药基因MDR1/P-gp与CerbB-2表达的相关性及临床意义.方法:选取86例大肠癌组织标本,采用免疫组化S-P法检测P-gp与CerbB-2的表达情况,并分析其相关性.结果:MDR1/P-gp与CerbB-2表达阳性率分别为36％(31/86)、28％(24/86);临床分期Ⅲ期大肠癌组织中CerbB-2阳性表达率显著高于工、Ⅱ级(P＜0.05);有腋窝淋巴结转移的大肠癌组织中MDR1/P-gp、CerbB-2的表达率明显高于无腋窝淋巴结转移大肠癌组织(P＜0.05);P-gp蛋白阳性表达组CerbB-2阳性者占75.5％(37/49),CerbB-2阴性者占24.48％(12/49),两者差异有统计学意义(P＜0.01);P-gp与CerbB-2的阳性表达率间具有一定正相关性.结论:P-gp与CerbB-2基因在大肠癌多药耐药发生中起一定作用,其表达具有相关性,联合检测可为大肠癌化疗方案选择提供依据.

多药耐药基因MDR1在Ph(+)急性淋巴细胞白血病伊马替尼耐药细胞株SUP-B15/RI耐药形成中的作用

目的 研究多药耐药基因MDR1在Ph(+)急性淋巴细胞白血病[Ph(+)ALL]伊马替尼(IM)耐药细胞株SUP-B15/RI耐药机制中的作用.方法 RT-PCR技术检测敏感细胞株SUP-B15和IM耐药细胞株SUP-B15/RI MDR1 mRNA表达,改良MTT法测定IM、柔红霉素(DNR)、长春新碱(VCR)、依托泊甙(VP-16)单药及联合维拉帕米作用于SUP-B15细胞和SUP-B15/RI细胞72 h后增殖活性的改变,计算抑制率为50％时的药物浓度(IC50),DNR药物外排实验检测MDR1表达产物P-gp功能.结果 MDR1基因在SUP-B15/RI中的表达是敏感细胞SUP-B15的(2.02±0.04)倍(P＜0.05).IM、DNR、VCR、VP-16单药作用于SUP-B15/RI细胞的IC50值较SUP-B15细胞增高(P＜0.05),相对耐药倍数(RF)分别为(20.52±2.34)、(10.33±1.88)、(9.78±1.27)、(3.84±0.69)倍.IM、DNR、VCR、VP-16与维拉帕米联合作用于SUP-B15/RI细胞后IC50值较单药时降低(P＜0.05),耐药逆转倍数分别为(1.44±0.43)、(3.20±0.17)、(1.44±0.12)、(1.33±0.14).P-gp蛋白功能在SUP-B15/RI细胞强于SUP-B15细胞,DNR泵出率分别为10.27％、3.43％.结论 MDR1基因在SUP-B15/RI细胞中表达增加,其表达产物P gp功能增强,P-gp抑制剂维拉帕米可以部分逆转IM耐药.说明MDR1参与SUP-B15/RI细胞IM耐药机制的形成.

Objective:To explore the correlation of expressions of MDR1/P-gp and CerbB-2 in the colorectal cancer tissues and their clinical significance.Methods:A total of 86 colorectal cancer tissues specimens were included in the study. The immunohistochemical S-P method was used to detect the expressions of P-gp and CerbB-2, and their correlations were analyzed.Results:The positive rates of the expressions of MDR1/P-gp and CerbB-2 were 36% (31/86) and 28% (24/86), respectively. The positive expression rate of CerbB-2 in the colorectal cancer tissues at a clinical stage of III was significantly higher than that at stage I and II. The positive expression rates of MDR1/P-gp and CerbB-2 in the colorectal cancer tissues with axillary lymph node metastasis were significantly higher than those in the tissues without axillary lymph node metastasis. In the P-gp positive expression group, the positive rate of CerbB-2 was 75.5% (37/49), while the negative rate of CerbB-2 was 24.48% (12/49), and the difference was statistically significant (P<0.01). P-gp had a certain positive correlation with the positive expression rate of CerbB-2. Conclusions:P-gp and CerbB-2 play a certain role in the occurrence of multidrug resistance of colorectal cancer, and their expressions are correlated; therefore, the combination detection can provide an evidence for the chemotherapy choice of colorectal cancer.