首页 > 文献资料
-
不同质量浓度磁性c-erbB-2反义探针对SK-Br-3肿瘤细胞株形态及表达的影响
目的 探讨不同质量浓度磁性c-erbB-2反义探针转染乳腺癌SK-Br-3细胞株后,对其形态及表达的影响.方法将反义探针含铁质量浓度分别定为5、10、25、50、100 mg/L,转染乳腺癌SK-Br-3细胞24 h.采用普鲁士蓝染色并在光学显微镜及透射电镜下直接观察细胞铁颗粒,原子吸收光谱法测定细胞内铁含量,台盼蓝排除实验、CCK-8试剂盒观察细胞活性,Western blot法检测蛋白质表达,磁共振成像研究信号强度的变化.结果 SK-Br-3细胞对反义探针在一定质量浓度范围内(5、10、25 mg/L)呈依赖式摄取.当探针质量浓度为25 mg/L时,细胞内铁含量为(18.38±0.28) pg,细胞活力、存活率及细胞内c-erbB-2蛋白表达量明显降低(P均＜0.05),磁共振扫描图像显示该组细胞T2值出现明显降低(P＜0.05).50及100 mg/L组各项结果与25 mg/L组比较差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 当磁性c-erbB-2反义探针质量浓度为25 mg/L时,可有效转染并特异性抑制SK-Br-3细胞株的表达,并被磁共振成像所检测.
-
联合应用重组人血管内皮抑素与紫杉醇对乳腺癌细胞株SK-BR-3诱导凋亡作用研究
目的:观察重组人血管内皮抑素(恩度)与紫杉醇联合用药作用于乳腺癌细胞株SK-BR-3后的生长情况及凋亡率.方法:光学显微镜下观察细胞生长状况,流式细胞仪检测乳腺癌细胞SK-BR-3的凋亡率,Realtime PCR法观察凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax的表达.比较不同给药方案对乳腺癌细胞SK-BR-3的诱导凋亡作用.结果:恩度1μg/mL作用48h后的细胞凋亡率为11.6%(P<0.05),Bcl-2表达下调,而Bax表达无明显改变.紫杉醇1μg/mL作用24h后的细胞凋亡率为12.4%(P<0.05),Bcl-2表达下调,而Bax表达则相对升高.紫杉醇与恩度分别先后序贯给药,凋亡率分别为16.50%和14.18%(P<0.05),且能够使Bcl-2表达下调,Bax表达升高.二者联合且同时给药后SK-BR-3细胞的凋亡率为22.74%,明显高于其他给药组(P<0.05),同时对Bcl-2表达下调明显且Bax表达升高.结论:恩度与紫杉醇均可抑制乳腺癌细胞SK-BR-3的生长,且对细胞凋亡有诱导作用.二者同时给药产生的效果佳.
-
乳腺癌中COX-2、Bax、Bcl-2的表达及熊果酸的干预作用
目的 研究熊果酸(UA)对人乳腺癌SK-BR-3细胞COX-2、Bax、Bcl-2 mRNA的表达的影响,结合人体乳腺癌组织凋亡相关蛋白表达检测,探讨其作用机制,为UA的临床应用提供实验依据.方法 RT-PCR技术检测SK-BR-3细胞中COX-2、Bax、Bcl-2 mRNA的表达；免疫组织化学技术检测雌激素受体(ER)(-),人表皮生长因子受体-2(HER-2)(+)的人乳腺癌组织中COX-2、Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 UA作用48 h后能使乳腺癌SK-BR-3细胞中COX-2、Bcl-2 mRNA表达明显减少(P＜0.05),使Bcl-2/Bax比值减小(P＜0.05),而对Bax mRNA的表达未见明显影响；COX-2、Bcl-2、Bax蛋白在ER(-),HER-2(+)的乳腺癌组织中的表达阳性率分别为86.67％ (26/30),63.33％(19/30),56.67％(17/30),COX-2与Bax表达呈明显负相关(P＜0.05),与Bcl-2未见明显相关性.结论 UA可抑制COX-2、Bcl-2 mRNA表达,使Bcl-2/Bax减小；ER(-),HER-2(+)的人乳腺癌组织中COX-2中阳性表达率较高,COX-2与Bax表达呈明显负相关,与Bcl-2表达未见明显相关性.
-
羟基红花黄色素A对雌激素效应相关蛋白表达的影响
目的 探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)对雌激素效应相关蛋白表达的影响.方法 培养雌激素受体阳性细胞T47D和特异性雌激素受体(estrogen receptor,ER)阴性细胞SK-BR-3,将1×10-7mol/L-1×10-9mol/L三种梯度浓度的HSYA作用于两种细胞,通过蛋白质免疫印迹法检测雌激素受体ERα 及ERβ、细胞外调解蛋白激酶1/2(ERK1/2)及p-ERK1/2、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、抑癌基因P27等蛋白的表达情况.结果 与空白对照组相比,在T47D细胞中,高浓度的HSYA促进了ERα、ERβ、ERK1/2、p-ERK1/2、PR的表达,抑制了P27的表达(P<0.01);在SK-BR-3细胞中,HSYA显著抑制了ERK1/2的表达,但对p-ERK1/2的表达影响不明显(P>0.05).结论 HSYA在细胞内影响雌激素效应相关蛋白的表达情况不同,可能是通过调节ER表达及激活ERK信号通路而发挥雌激素样作用.
-
HER-2反义寡脱氧核苷酸对乳腺癌细胞的影响
目的乳腺癌发病率高,远期生存率低.原癌基因HER-2与乳腺癌的恶性转化密切相关.本课题以HRE-2反义寡脱氧核苷酸(ASODN)抑制乳腺癌细胞目的mRNA的转录表达,观察对细胞的影响.方法:HER-2寡脱氧核苷酸(ODN)与表皮生长因子(EGF)连结,形成ODN-EGF.将6.8μmol·L-1ODN-EGF250μl·d-1加入对数生长期乳腺癌细胞SK-Br-3培养,每天给药一次,连续给药3天.末次给药后24小时,消化和收集细胞.用RT-PCR逆转录扩增HER-2 DNA,进行凝胶电泳.电镜检测细胞显微结构的改变.结果5组药物细胞mRNA RT-PCR的扩增片断为98bpDNA.电泳条带灰度值ASODN-EGF组13 009.33土74.19,SODN-EGF组13 291.33±39.72,NODN-EGF组13 234.00±95.50,ASODN组13 216.33±77.78,正常对照组13 284.67±31.94.电镜检测ASODN-EGF组细胞,核畸形,胞浆内有裂痕和自身围成的腺腔,脂滴空泡化改变,线粒体外室轻度肿胀,上皮样细胞特征角蛋白表达减少.结论ASODN-EGF具有抑制SK-Br3细胞HER-2mRNA转录和表达的作用.
