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膀胱癌Nucleostemin表达的临床意义
目的 膀胱癌患者肿瘤组织中Nucleostemin基因表达的改变,并探讨其相关的临床意义.方法 选取海南医学院第一附属医院泌尿外科2016年3月～2017年4月收治的膀胱癌82例,取癌旁非肿瘤组织作为对照.Nucleostemin基因mRNA表达量使用RT-PCR荧光定量PCR检测.结果 膀胱癌组织中Nucleostemin的2-△Ct值为0.294±0.046,显著高于对照膀胱组织的0.127 ±0.018(P ＜0.01).Nucleostemin的2-△Ct值膀胱癌患者的性别和年龄无显著相关性(P＞0.05).Nucleostemin的2-△Ct值在TNM临床Ⅲ、Ⅳ期患者为0.352±0.058,显著高于Ⅰ、Ⅱ期患者的0.263±0.037(P ＜0.05).Nucleostemin的2-△Ct值在浸润深度达到肌层的患者为0.316±0.51,显著高于未达到肌层的0.235±0.032(P ＜0.05).Nucleostemin的2-△Ct值在中、低分化患者为0.327±0.054,显著高于高分化的0.262±0.033(P ＜0.05).Nucleostemin2-△Ct值在淋巴结有转移患者为0.346±0.055,显著高于无转移的0.269±0.038(P ＜0.05).结论 膀胱癌组织中Nucleostemin基因高表达,其表达变化可能参与膀胱癌的发生、发展、侵袭和转移过程.
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上海市西南地区成人病毒性腹泻的病原学研究
目的 研究上海市西南地区成人病毒感染性腹泻患者的病原学特点.方法 采用逆转录荧光定量-PCR方法进行病毒检测.结果 539例腹泻标本中,检出病毒阳性212例,单种感染207例,双重感染5例.A组轮状病毒检出率为4.27％ (23/539),B组轮状病毒检出率为0,C组轮状病毒检出率为0,诺如病毒Ⅱ型检出率为31.91％ (172/539),诺如病毒Ⅰ型检出率为1.48％ (8/539),星状病毒检出率为0.93％ (5/539),扎如病毒检出率为1.29％ (7/539),腺病毒检出率为0.37％(2/539).除诺如病毒Ⅱ的检出率在年龄分组中差异有统计学意义(x2=10.26,P＜0.05)外,其余均无统计学意义.8种病毒的检出率在性别分组中差异均无统计学意义.结论 上海市西南地区成人腹泻患者中,诺如病毒和轮状病毒为病毒感染的主要病原体.
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慢性间歇低氧对大鼠肝细胞SOCS3表达的影响
目的 通过构建慢性间歇低氧大鼠模型,检测模型大鼠空腹血糖、胰岛素水平及胰岛素抵抗指数并检测大鼠肝细胞SOCS3蛋白及其mRNA表达量的变化,探讨慢性间歇低氧对胰岛素抵抗的影响.方法 选取健康雄性SD大鼠24只,按随机数字表法分为正常对照组(NC组)、慢性间歇低氧2周组(CIH2组)、慢性间歇低氧5周组(CIH5组),每组8只.NC组无间歇低氧暴露,CIH2组、CIH5组暴露于间歇低氧环境中(每日8h,舱内低氧浓度为6％～7％).分别于第15天、第36天测定大鼠空腹血糖、放射免疫法测空腹胰岛素水平并按稳态模型评估法(HOMA)计算胰岛素抵抗指数,SABC法免疫组织化学试剂盒检测大鼠肝细胞SOCS3蛋白表达,以平均灰度值表示SOCS3蛋白表达量,荧光定量-PCR法检测SOCS3-mRNA基因表达量.结果 与NC组比较,CIH2与CIH5组空腹血糖水平(差异有统计学意义,F=33.582,P＜0.05)、胰岛素水平(差异有统计学意义,F=35.633,P＜0.05)及HOMA-IR(差异有统计学意义,F=49.045,P＜0.05)升高,且CIH5组为显著(P＜0.05);与NC组比较,CIH2与CIH5组SOCS3蛋白表达升高(差异有统计学意义,F=9.472,P＜0.05),CIH2与CIH5组差异无统计学意义(P＞0.05);与NC组及CIH2组比较,CIH5组SOCS3-mRNA表达升高(差异有统计学意义,F =8.665,P＜0.05),CIH2组升高不明显(差异无统计学意义,P＞0.05).Pearson相关分析显示HOMA-IR与SOCS3平均灰度值呈负相关(r=-0.759,P＜0.001),HOMA-IR与SOCS3-mRNA呈正相关(r=0.603,P=0.01).结论 ①CIH暴露使大鼠胰岛素水平及血糖水平升高且发生胰岛素抵抗,且随间歇低氧暴露时间延长,胰岛素抵抗程度加重.②CIH导致大鼠肝细胞内SOCS3蛋白表达增高,SOCS3-mRNA基因表达上调,CIH可能通过SOCS3参与了胰岛素抵抗的发生发展.
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丙肝患者病毒载量及危险因素与配偶感染关系
目的研究慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血浆病毒载体量、危险因素与其配偶感染的关系.方法应用酶免法(EIA)及FQ-PCR法检测122例CHC患者的血浆、尿液、泪液和精液及其配偶血浆抗丙型肝炎病毒(抗-HCV)及HCVRNA含量.结果CHC患者血浆、尿液、泪液和精液及其配偶血浆抗-HCV检出率分别为94.26%(115/122),42.8%(21/49),11.19%/(5/42),47.22%(17/35)阳22.50%(27/120);HCVRNA的检出率分别为88.15%(67/122),55.10%(27/49),19.04%(8/42),66.67%(24/36)和25.83%(31/120),对照组均无抗-HCV及HCVRNA检出.男性配偶的抗-HCV、HCVRNA的检出率分别为15.06%(11/73),78.08%(57/73);女性配偶的抗-HCV、HCVRNA的检出率分别为29.78%(14/47)、89.36%(42/47).当CHC患者外周血浆HCVRNA≥10%opies/ml时,其配偶HCVRNA的检出率为29.1%(21/69);当CHC患者外周血浆HCVRNA＜105copies/ml时,其配偶HCVRNA的检出率为19.47%(11/57).配偶婚龄＜10,11～20,21～30,31～54年的4个组HCVRNA的检出率分别为13.33%(2/15)、22.22%(4/18)、32.00%(8/25)和55.32%(27/47).结论HCV可在配偶间传播.CHC患者的女性配偶HCV感染高于男性配偶.CHC患者外周血浆病毒载体量HCVRNA≥105copies/ml时,其配偶的感染危险性高于血浆HCVRNA＜105copies/ml的CHC患者的配偶(P＜0.05).配偶HCV感染率与婚龄成正比.
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两种方法对巨细胞病毒-IgM抗体水平检测敏感性和特异性的比较
目的:比较ELISA 和real time-PCR(RT-PCR)对产前筛查女性巨细胞病毒-IgM 抗体水平检测的敏感性及特异性.方法:收集146 例育龄期行产前筛查女性,采用ELISA 和RT-PCR 法评估所有入选者外周血巨细胞病毒-IgM 抗体水平,同时比较这两种检测方法的敏感性和特异性.结果:(1)ELISA 法的敏感性为64.6%,RT-PCR 敏感性为72.7%,差异有统计学意义(P<0.05);(2)ELISA 法的特异性为54.8%,RT-PCR 特异性为60.8%,差异有统计学意义(P<0.05);(3)ELISA 法检测费用为每个标本(68.5±4.3)元,采用RT-PCR 检测为(71.6±5.5)元,两组间比较差异无统计学意义(P=0.163).结论:与ELISA 相比,采用RT-PCR 检测巨细胞病毒-IgM 抗体水平具有较高的敏感性和特异性,且不增加费用支出,值得临床推广.
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强直性脊柱炎HLA-B27基因荧光定量诊断方法的建立
目的:建立一种强直性脊柱炎基因(HLA-B27)的荧光定量PCR(FQ-PCR)方法.方法:扩增强直性脊柱炎患者白细胞中的HLA-B27基因与质粒PGEM-T Easy Vector重组,转化大肠杆菌E.coil DH5а,获得克隆的HLA-B27基因标准模板.用DA 7600 PCR仪检测FQ-PCR扩增产物制成标准曲线来定量检测标本中HLA-B27的浓度.结果:FQ-PCR扩增产物呈"S"形动力学曲线;ct(循环阈值)与PCR体系中起始模板拷贝数的对数值之间有较好的线性关系,显示了FQ-PCR定的准确性.结论:FQ-PCR方法用于定量检测外周静脉血HLA-B27基因表达水平,具有较好的灵敏度、特异性,且操作简便、快速,易于普及,有良好的应用前景.
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HBV-M模式与定量PCR关系
目的: 探讨血清HBV DNA水平与HBV标志物(HBV-M)表现模式的关系.方法: 对1 207例慢性乙型肝炎患者进行血清HBV DNA荧光定量PCR分析,HBV M检测采用ELISA法.结果: 血清HBV DNA水平与HBV M表现模式有关,HBsAg与HBeAg的存在影响HBV DNA水平变化.结论: HBeAg和HBV DNA有明显的相关,抗-HBe、抗HBc阳性者病毒未完全停止复制,只是复制水平降低.
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结肠癌中趋化因子受体1表达的临床意义研究
[目的]检测结肠癌组织中趋化因子受体1(CXCR1)基因表达的改变,探讨其相关的临床意义.[方法]选取2014年3月～2016年6月我院收治的结肠癌患者手术切除癌组织86例,以及相应的癌旁正常结肠黏膜组织(距离肿块组织≥5 cm).SYBR Green荧光定量-PCR检测CXCR1基因表达量.[结果]结肠癌肿瘤组织中CX-CR1基因表达量为0.407±0.064,显著高于对照非肿瘤肠黏膜组织的0.215±0.037(P＜0.01).结肠癌肿瘤组织中CXCR1基因表达量在男女性别和不同年龄间差异无统计学意义(P＞0.05).有淋巴结转移肿瘤组织CXCR1基因表达量为0.458±0.073,显著高于无淋巴结转移肿瘤组织的0.346±0.051(P＜0.05).中、低分化肿瘤组织CXCR1基因表达量为0.432±0.071,显著高于高分化肿瘤组织的0.358±0.056(P＜0.05).Ⅲ、Ⅳ期肿瘤组织CXCR1基因表达量为0.462±0.078,显著高于Ⅰ、Ⅱ期肿瘤组织的0.365±0.054(P＜0.05).[结论]CXCR1基因在结肠癌组织中表达上调,CXCR1基因表达上调与结肠癌有无淋巴结转移、分化程度以及临床分期密切相关.
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膀胱癌组织中HSPC238的表达及其临床意义
目的:检测膀胱癌患者肿瘤组织中HSPC238的改变,并探讨其相关的临床意义.方法:取海南省人民医院2016年1月至2017年7月收治的膀胱癌116例,取癌旁非肿瘤组织作为对照.使用荧光定量PCR检测HSPC238基因的表达.结果:膀胱癌组织中HSPC238为0.172±0.023,显著低于对照膀胱组织的0.304±0.051(P＜0.01).HSPC238在TNM临床Ⅲ,ⅣV期患者为0.137±0.017,显著低于Ⅰ,Ⅱ期患者的0.194±0.028(P＜0.01).HSPC238在浸润深度达到肌层的患者为0.161±0.021,显著低于未达到肌层的0.195±0.029(P＜0.05).HSPC238在中、低分化患者为0.156±0.021,显著低于高分化的0.205±0.037(P＜0.05).HSPC238在淋巴结有转移患者为0.147±0.016,显著低于无转移的0.181±0.022(P＜0.05).结论:膀胱癌组织中HSPC238基因低表达,其表达变化可能参与膀胱癌的发生、发展、侵袭和转移.
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miR-34b基因在鼻咽癌组织中的表达及意义
目的 检测鼻咽癌组织中miR-34b的表达,并探讨其与鼻咽癌临床病理的关系.方法 收集2016年1月～2017年10月海口市人民医院经病理确诊的114例鼻咽癌患者标本作为鼻咽癌组,另选取同期行鼻内镜鼻息肉手术切除的良性鼻咽标本40例作为对照组.采用荧光定量PCR检测miR-34b在两组中的表达,并分析其与鼻咽癌临床病理特征的关系.结果 鼻咽癌组织中miR-34b的相对表达量2-ΔCt值为0.136±0.021,显著低于对照组织的0.294±0.052(P ＜0.01);miR-34b的相对表达量2-ΔCt值与鼻咽癌患者的性别、年龄和病理分级无显著相关性(P＞0.05);miR-34b的相对表达量2-ΔCt值在临床Ⅲ、Ⅳ期患者为0.126±0.015,显著低于I、Ⅱ期患者的0.183±0.046(P ＜0.05);miR-34b值在淋巴结有转移的患者为0.116±0.013,显著低于无转移的0.162±0.041(P＜0.05).结论 鼻咽癌组织中miR-34b呈低表达,其表达变化可能参与鼻咽癌的发生、发展和转移过程.
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荧光定量-PCR检测乙肝患者血清HBV-DNA及其临床应用
目的探讨HBV-DNA基因含量与HBV-M两者的关系及其在临床中的应用.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量-PCR(FQ-PCR)法对553例乙肝患者及无症状携带者血清进行HBV-M以及HBV-DNA定量检测.结果乙肝患者血清HBV-DNA阳性率和基因含量与HBV-M模式有很大关系,与HBeAg(+)高度相关,显著高于其他各组(P＜0.001,P＜0.01),在抗-HBe(+)组或抗-HBs(+)组也检出了一定浓度的HBV-DNA;不同临床类型乙型肝炎患者血清中HBV-DNA的阳性率和含量无显著性差异(P＞0.05).结论单凭血清免疫标志物模式难以准确判断HBV的复制程度及传染性的强弱,定量检测HBV-DNA能真实反映HBV的复制情况,对诊断、治疗乙肝患者及疗效观察具有较大的指导意义.
