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布雷菲德菌素A在脂多糖诱导急性肺损伤中的作用
目的 探讨布雷菲德菌素A(Brefeldin A)在脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤中的作用.方法 小鼠肺泡巨噬细胞(MWS)和上皮细胞(MLE-12)分别给予浓度为1、10、100 μM的Brefeldin A后,立即用LPS 500 ng/ml处理,收集3、6、9、24h的细胞上清并测定MH-S中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量和MLE-12中的趋化因子KC值;ICR小鼠随机分为生理盐水组(Normal组)、模型组(LPS组)、地塞米松组(Dex组,5 mg/kg)、Brefeldin A组(BFA组,10 mg/kg),每组12只,气道内2 mg/kg滴入LPS制备急性肺损伤模型,生理盐水组给予等体积生理盐水.6h后观察肺组织病理改变,测定肺泡灌洗液(BALF)中白细胞、白蛋白含量和TNF-α、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)等炎症因子含量,检测肺组织中髓过氧化物酶(MPO)、cAMP含量和MAPK信号通路中ERK、p38和JNK等蛋白激酶分子磷酸化水平的变化.结果 100 μM的Brefeldin A能显著减少MH-S中TNF-α的释放和MLE-12细胞中KC的产生(P＜0.001).BrefeldinA显著改善肺组织病理变化,降低BALF中白细胞(P ＜0.001)和TNF-α(P＜0.05)含量,对BALF中白蛋白、1L-1β和IL-6无显著影响,显著降低小鼠肺组织中MPO活性(P＜0.05),升高cAMP的水平(P＜0.001),同时能显著抑制ERK的磷酸化(P＜0.05).结论 Brefeldin A对急性肺损伤可产生保护作用,其机制与抑制相关炎症因子释放、升高细胞内cAMP的含量、抑制ERK磷酸化等途径有关.
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高尔基体对小鼠卵母细胞体外发育进程的影响
目的 初步探讨高尔基体在小鼠卵母细胞体外发育进程中的作用.方法 布雷菲德菌素A (Brefeldin A,BFA) 处理小鼠未成熟/成熟卵母细胞,利用特异性标记物β-COP标记高尔基体,激光扫描共聚焦显微镜观察BFA处理对高尔基体产生的影响;同时,观察并比较不同处理组小鼠未成熟/成熟卵母细胞的体外成熟率、孤雌激活率、体外受精率及2-细胞率.结果 GV期卵母细胞经BFA处理后,高尔基体的形态和分布发生明显改变,其体外成熟率 (2.5%) 与对照组 (70.4%) 比较统计学差异显著 (P＜0.001);洗掉BFA后,其体外成熟率 (67.2%) 与对照组无统计学差异(P＞0.05).另外,成熟卵母细胞经BFA处理后,其体外受精率及2-细胞率均与对照组差异无统计学意义 (P＞0.05).结论 小鼠卵母细胞体外成熟的正常进行需要高尔基体主导的膜运输,而体外受精和受精卵卵裂过程中不需要功能性的高尔基体.
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布雷菲德菌素A联合顺铂增强肺癌GLC-82细胞PERK-ATF4通路的激活水平
目的：研究PERK-ATF4通路的激活水平，以探讨布雷菲德菌素A（BFA）与顺铂（CDDP）的协同抗肺癌的分子机制。方法：以BFA、CDDP单独或联合处理人肺癌GLC-82细胞24、48 h，然后用定量PCR和Western Blot检测PERK、ATF4、p-PERK的表达水平。结果：药物处理24和48 h 后，GLC-82细胞PERK的mRNA和蛋白表达水平在CDDP组低，在BFA组升高（P＜0．05），在BFA＋CDDP组进一步升高（P ＜0．01），其磷酸化水平均显著降低（P ＜0．01）；ATF4表达在CDDP组中差异无显著性，在BFA组中升高，在BFA＋CDDP组进一步升高（P ＜0．05或P ＜0．01），也高于BFA组和CDDP组（P ＜0．05或P ＜0．01）。结论：BFA联合CDDP上调PERK、ATF4水平，该通路可能是BFA与顺铂协同抗肺癌的分子机制之一。
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Eupenicillium brefeldianum CCTCC M 208113发酵液中布雷菲德菌素A分离纯化工艺的研究
目的 建立利用溶剂萃取结合冷却结晶技术从发酵液中制各布雷菲德菌素A的提炼工艺,制备高纯度(＞99％)布雷菲德菌素A.方法 采用HPLC检测方法,以萃取率为指标,选择合适的萃取剂,并优化萃取条件;结合冷却结晶,精制布雷菲德菌素A.结果 室温下,预处理后的发酵液经等体积乙酸正丁酯二级萃取,布雷菲德菌素A萃取率95.2％,结合冷却结晶,制得纯度为99.1％的布雷菲德菌素A晶体,工艺总收率59.5％.结论 溶剂萃取结合冷却结晶技术纯化布雷菲德菌素A具有工艺简单、收率高、产品质量稳定且易于放大等优点,适合规模化生产.
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内生真菌A1163发酵液中活性成分的分离、纯化与鉴定
目的 分离、鉴定植物内生真菌A1163活性次级代谢产物并确定产生菌的生物学分类.方法 利用红外光谱、质谱、核磁共振、X-射线衍射分析等技术对目标化合物进行结构鉴定,结合菌株形态观察、分子遗传学鉴定确定菌株的种属关系.结果真菌A1163活性次级代谢产物结构为大环内酯类抗生素布雷菲德菌素A,布雷菲德菌素A产生菌A1163被鉴定属于布雷正青霉(Eupenicillium brefeldianum).
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Brefeldin A调控ATF6通路增强顺铂抑制肺癌细胞增殖的作用
目的 检测肺癌GLC-82细胞内质网应激ATF6通路的激活水平,以探究布雷菲德菌素A(BFA)增强顺铂(CDDP)抑制肺癌细胞增殖的分子机制.方法 取对数期细胞,分别设置50ng/mL BFA组、2μg/mL CDDP组及50 ng/mL BFA+2 μg/mL CDDP组作为实验组,同时设置加入等体积二甲基亚砜(DMSO)的对照组.继续培养24h后,利用CCK8法检测细胞增殖抑制率;培养24h和48 h后,利用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测细胞GRP94、ATF6和ATF6B的mRNA水平和蛋白质水平.结果 药物处理24h后,BFA组、CDDP组和联合用药组细胞增殖抑制率分别为(28.6±6.8)％、(24.0±9.6)％和(57.1±3.1)％,均显著高于对照组(P＜0.01),且联合用药组细胞生长抑制率亦显著高于BFA组和CDDP组(P＜0.01、P＜0.01).与对照组相比,药物处理24h后,联合用药组GRP94、ATF6 mRNA水平分别上调(19.9±2.8、22.9±4.7)倍,GRP94、ATF6和ATF6B蛋白质水平分别上调(1.3±0.4、6.1±1.8、5.7±1.8)倍(P＜0.01或P＜0.05);药物处理48 h后,联合用药组GRP94、ATF6mRNA水平分别上调(10.5±0.7、12.1±1.8)倍(P＜0.01),GRP94蛋白质水平下调(4.5±1.7)倍、ATF6和ATF6B蛋白质水平分别上调(1.4±0.3、2.6±0.9)倍(P＜0.01或P＜0.05).结论 BFA协同增强CD-DP抑制肺癌GLC-82细胞增殖的作用,与内质网应激ATF6通路和GRP94分子的激活密切相关,为肺癌的临床治疗方案提供更多的理论基础.
