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MHC单倍体型无特定病原体鸭的培育
目的 培育MHC单倍型无特定病原体单倍型鸭.方法 以国家禽类实验动物种子中心培育并保存的无特定病原体(SPF)麻鸭为基础,根据位于主要组织相容性复合体(MHC)核心区域的鸭抗原处理相关转运体分子(TAP)双拷贝基因(Tap1和Tap2)的多态性,分别利用Tap1基因组短串联重复序列(STR)、TAP2的肽结合区序列以及Tap2全基因组序列的基因型分型,连续选育主要组织相容性复合体(MHC)单倍型SPF鸭.结果 F0代和F1代鸭的STR结果完全一致;F2和F3代鸭的Tap1和Tap2基因组序列完全纯合.连续6个世代的Tap2基因组序列分析,B3群鸭有2个位点发生突变,B1、B2和B4遗传学稳定.结论 成功建立了4个MHC单倍体型SPF鸭群B1、B2、B3和B4,为深入开展鸭的免疫遗传学研究提供了实验动物支撑条件.
关键词： 鸭 主要组织相容性复合体 无特定病原体 单倍体型 抗原处理相关转运体 -
抗原处理相关转运体(TAP)的结构和功能研究进展
抗原处理相关转运体(TAP)属于ABC(ATP-binding cassette)转运体超家族的B亚家族,是由主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)上2个紧密连锁的基因TAP1和TAP2编码蛋白组成的异二聚体,位于内质网和顺式高尔基膜上,功能是将抗原肽从细胞质转运进入内质网池,组装到MHC Ⅰ类分子上构成复合体.TAP蛋白的缺乏和突变会影响抗原肽的提呈,终损害免疫应答功能.
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天津地区汉族人群TAP1基因的多态性研究
目的:探讨抗原处理相关转运体1(TAP1)基因在天津地区汉族人中的分布.方法:用扩增阻碍突变体系(ARMS)检测,分析TAP1基因多态性在107例天津籍无亲缘关系的汉族健康人中的分布.结果:(1)研究人群的TAP1等位基因分布、基因型分布均符合Hardy-Weinberg定律.(2)天津汉族正常人群中TAP1 333位点以Ⅰ等位基因型(55.66%)、V/I基因型(54.72%)占优势;TAP1 637位点以A等位基因型(65.89%)、A/A基因型(51.40%)占优势.单倍体型中则以TAP1A、TAP1C占优势,分别为41.46%和30.49%.结论:TAP1等位基因型、单倍体型在各地区、人种间分布不同.
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维吾尔族人群抗原处理相关转运体(TAP)基因多态性及与类风湿关节炎的相关性
目的:探讨新疆维吾尔族人群抗原处理相关转运体(TAP)基因多态性及与类风湿关节炎(RA)的相关性.方法:采用PCR-ARMS,-RFLP,-SSOP检测RA患者39例及健康献血者41例TAP1-333和637位,TAP2-379、565、651、665、687等位氨基酸等位基因多态性.结果:健康维吾尔族人群TAP1-333位和637位等位基因基因型分别以I和 D为主, 表现型主要为II和DD,有1A～1D 4个亚型,以1A和1B为主;TAP2-379、565、651、665、687等位基因型分别以V-A-R-T-Q 为主,表现型以VV-AT-RR-TT-QQ 为主,有2A～2H共8个亚型,以2A和2B为主.RA患者TAP2 379-I,565-T和687-S频率, 565-TT,687-SS及TAP1B频率显著升高,并且TAP1B可使 DR4 阳性者患RA的相对危险性增加5.33倍.结论:维吾尔族健康人群及RA患者TAP基因多态性有不同于其他民族人群的基本特点. TAP1B可使 DR4阳性者患RA的相对危险性增加,并可能是维吾尔患者RA的易感基因.
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导入TAP基因上调其在肺腺癌细胞系的表达
目的克隆TAP1及TAP2基因,分别转染TAP1及TAP2表达下调的人肺腙癌细胞系Anip973,以提高其表达水平,从而增强肿瘤细胞的抗原提呈能力.方法采用RT-PCR方法自EBV刺激的B-LCLs克隆TAP1及TAP2基因,与pcDNA3.1/V5-His-TOPO TA Expression vector连接,构建真核细胞表达载体,脂质体法(LipofectamineTM2000)转染人肺腺癌细胞系Arup973,经G418筛选4～6周,通过RT-PCR检测TAP1及TAP2的表达.结果经测序确认已成功克隆人TAP1及TAP2基因,建立稳定表达TAP1或TAP2的细胞系,经RT-PCR分析,Anip973细胞TAP1、TAP2的mRNA表达明显增加.结论基因转染可恢复肿瘤细胞TAP1及TAP2的表达,为增强MHC工类分子提呈肿瘤抗原奠定了基础.
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TAP基因转染提高其在肿瘤细胞系的表达
目的筛选TAP1、TAP2表达下调的肿瘤细胞系,将TAP1、TAP2基因分别转染其表达下调的肿瘤细胞系,检测基因转染后的mRNA表达水平.方法用RT-PCR方法检测肺腺癌细胞系Anip 973,AGZY83a,LH-7,BE-1,胃癌细胞系BGC-823 TAP1及TAP2 mRNA水平,筛选TAP1、TAP2表达下调的肿瘤细胞系.用脂质体法(LipofectaminTM2000)将TAP1、TAP2分别转染人肺腺癌细胞系Anip 973,经G418筛选4～6周,通过RT-PCR检测TAP1及TAP2的表达.结果Anip 973,ACZY 83a细胞TAP1、TAP2mRNA表达下调,LH-7,BE-1 TAP1PCR产物均为2条带,BE-1 TAP 2 mRNA表达下调,而LH-7与B细胞相同.转染后的Anip 973细胞TAP1、TAP2的mRNA表达明显增加.结论基因转染可恢复肿瘤细胞TAP1及TAP2的表达,为增强MHCI类分子提呈肿瘤抗原奠定了基础.
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抗原处理相关转运体的研究进展
抗原处理相关转运体(TAP)属于ABC转运体超家族的B亚家族,是由TAP1( 71KDa)和TAP2 (75KDa)两个亚基形成的异源二聚体分子,位于内质网和顺式高尔基膜上,其功能是将胞浆内经过蛋白酶体降解后产生的肽段转运到内质网腔中,并在此与HLA-I分子结合,进一步被提呈到细胞表面引起特异性的细胞毒性T细胞(CTL)应答.本文就TAP的结构、疾病相关性及肿瘤免疫治疗等方面的研究讲展做一综述.
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中国海南黎族人群TAP1基因多态性与结核病的关联性研究
目的:研究海南黎族人群抗原处理相关转运体基因l(TAPl)多态性与肺结核痛(PTB)易感性的关系.方法:应用PCR-RFLP技术对205例海南黎族肺结患者及217例海南黎族健康人群TAP1-1/TAP1-2(即Codon333/637)多态性进行检测.并对其易感性进行分析.结果:(1)海南黎族人群TAP1-1/TAP1-2基因多态性位点具有多态性(A→G);(2)TAP1-1 Codon333多态性位点纯合型Val/VaL的基因频率病例组为4.88%,低于对照组5.33%,而病例组的杂合型lle/Val频率为44.39%,明显高于对照组26.73%,在两组人群中,野生型lle/lle与杂合型比较,P=0.008,OR=1.92(95%CI:1.19～3.12),差异有意义,而与纯合型比较,无差异(P>0.05);(3)TAPl-2Codon637多态性位点纯合型Gly/Gly、杂合型Asp/Gly的基因频率在两组人群中的差异有高度显著性(P<0.01),其中野生型与杂合型比较OR=2.87(95%CI=1.75～4.71),与纯合型比较,OR＝3.94,(95%CI=1.82～8.53).结论:TAP1基因Codon637位点多态性可能是海南黎族人群肺结核的易感因素.
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海南黎族人群LMP/TAP基因单倍体型与结核病的相关性
目的 探讨中国海南黎族人群低分子量蛋白酶体、抗原处理相关转运体基因单倍体型与肺结核病(TB)感染的易感性关联. 方法 应用PCR-RFLP技术对205例海南黎族肺结核患者及217例海南黎族健康人群LMP基因(即LMP2 Codon60/LMP7 Codon145这两个多态位点)和TAP基因/(即TAP1-1 Codon333/ TAP1-2 Codon 637这两个多态位点)共四个多态性位点进行检测,采用PHASE 1.0软件构建这四个多态性位点的个体单倍体型,并对其易感性进行分析. 结果 对所有的研究对象进行PCR-RFLP检测结果显示:LMP基因和TAP基因在两组人群中具有多态性；在这四个位点所构建的单倍体型中,我们的研究发现含有-B/+B/B、--/H+H/H单倍体型的个体在两组人群中差异有显著性,分别为OR=3.674,P＜0.0001,95％ CI[2.254-5.9888]和OR=3.573,P=0.009,95％ CI[1.379-9.263]；-/G+G/G、--/I+I/I单倍体型高于对照组,有统计学意义(P＜0.05),分别为OR=0.33,P=0.043,95％ CI[0.115-0.968]和P=0.034,OR=2.91,95％ CI [1.084-7.807]. 结论 在这两个基因四个位点所构建的单倍体型中具有--B/+B/B、--/H+H/H单倍体的个体对于海南黎族结核的发生具有更强的易感关联,其增加结核患病风险约为3.674倍和3.573倍；而--G/+G/G、单倍体型和--/I +I/I单倍体型在病例组和结核组比较,均有统计学意义,(P＜0.05),显示弱相关性；对于结核的发生也有着弱的易患关联,其增加结核患病风险约为0.33倍和2.91倍.
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TAP基因多态性与维吾尔族人群类风湿关节炎的相关性
目的 研究抗原处理相关转运体(TAP)在新疆维吾尔族人群基因多态性及其与类风湿关节炎(RA)的相关性.方法 采用ASPCR方法对64例RA患者和72例正常人的TAP基因进行分析.结果 健康维吾尔族人群TAP1 333位和637位等位基因基因型分别以I和D为主,表现型主要为II和DD,TAP2 379、565、665、687等位基因基因型分别以I-A-T-S为主,表现型以II-AA-AT-SS为主;RA患者TAP2 379-V,687-Q,687-QQ频率显著降低,687-S,379-II,687-SS频率显著升高.结论 维吾尔族健康人群及RA患者TAP基因多态性有不同于其他民族人群的基本特点.TAP2 379-II、687-SS型患RA的相对危险性增加,并可能是维吾尔患者RA的易感基因.
