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广东省中医院阴沟肠杆菌qnrA基因的检测及耐药机制的研究
目的 了解广东省中医院临床分离的阴沟肠杆菌qnrA基因的分布及其耐药机制.方法 应用VITEK32全自动细菌鉴定仪鉴定400株阴沟肠杆菌,采用纸片K-B法检测耐药情况,PCR法检测qnrA基因阳性菌,质粒接合试验验证qnrA基因可发生水平传播.结果 qnrA基因阳性的阴沟肠杆菌共检出65株,检出率为16.3％,阳性菌对两种喹诺酮药物均产生耐药且多数还伴产ESBLs,呈多重耐药性.结论 广东省中医院分离的阴沟肠杆菌中存在qnrA耐药基因的流行,多数与ESBLs基因共同存在,且可发生水平传播.
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大肠埃希菌qnrA基因的检测
[目的]了解大连地区耐环丙沙星的大肠埃希茵中qnrA基因的流行情况并研究其耐药机制.[方法]收集临床分离的耐环丙沙星的大肠埃希茵213株,通过PCR法扩增qnrA基因,对qnrA基因阳性株,KB纸片法检测抗菌药的体外抗茵活性,琼脂稀释法测MIC,并进行质粒结合试验.[结果]213株茵中查到2株qnrA阳性茵株,测序结果与Genbank中qnrA基因比对吻合率达100%.其中一株对多种抗菌药耐药,另一株则比较敏感.[结论]大连地区检测到了qnrA基因阳性的菌株,耐药机制复杂,应引起临床重视.
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环丙沙星浓度对大肠埃希菌qnrA基因的影响
[目的]研究携带qnrA基因的大肠埃希菌在环丙沙星压力下gyrA基因的突变情况及防耐药变异浓度(MPC).[方法]采用质粒结合实验构建出携带qnrA基因且gyrA基因未发生突变的结合子.在不同浓度环丙沙星药物平皿上观察gyrA基因突变情况及对防耐药变异浓度的影响.[结果]结合子(菌株4E、5E)的突变选择指数(MPC/MIC)分别为24.0和35.0,平均突变率分别为0.6852和0.5500;阴性对照大肠埃希菌ATCC25922的突变选择指数为6.25,平均突变率为0.2078,与结合子比较差异有显著性意义(P<0.05).[结论]携带qnrA基因的菌株在环丙沙星压力下,更容易发生gyrA基因突变,导致产生对环丙沙星的高水平耐药和高MPC.
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宋内志贺菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药性研究
目的 检测宋内志贺菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药情况,探讨染色体介导DNA旋转酶A亚单位(gyrA)和拓扑异构酶ⅣC亚单位(parC)基因突变或(和)质粒介导qnrA基因存在与宋内志贺菌耐喹诺酮类药物的相关性.方法 用K-B纸片扩散法对58株宋内志贺菌进行耐药性检测;PCR法检测宋内志贺菌喹诺酮耐药决定区(QRDR)相关gyrA、parC基因,并根据药敏结果 挑选5株菌扩增片段进行DNA测序;PCR法扩增qnrA基因片段.分析宋内志贺菌gyrA、parC基因突变或(和)qnrA基因存在与喹诺酮类药物耐药性的关系.结果 宋内志贺菌对萘啶酸的耐药率高达94.8%.58株宋内志贺菌中,8株检出qnrA基因,5株测序gyrA、parC基因的菌株中,4株萘啶酸耐药菌株均在gyrA 83位发生有义突变TCG(Ser)→TTG(Leu),但未发生parC基因突变,gyrA基因突变菌株对萘啶酸全耐药.qnrA基因阳性菌株对5种喹诺酮类药物抑菌圈中位数比较都缩小;对NAL、氧氟沙星的耐药率高于qnrA基因阴性菌株(P<0.05),差异有统计学意义.结论 gyrA Ser83分→Leu突变是导致宋内志贺菌临床分离株对喹诺酮类药物耐药的关键突变,宋内志贺菌若携带质粒介导qnrA基因则会导致对喹诺酮类药物的敏感性下降,若两者同存也可引起喹诺酮类药物耐药增强,除萘啶酸耐药外对其他喹诺酮类药物也可呈中介.
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中国部分地区产超广谱-β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌qnrA基因的检测
目的 明确我国部分地区产超广谱-β内酰胺酶(ESBL)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中qnrA基因的存在状况.方法 PCR扩增产ESBL菌株,包括263株大肠埃希菌和99株肺炎克雷伯菌的qnrA基因;测序分析其基因序列.琼脂稀释法测定10种抗菌药物对qnrA基因阳性菌株的低抑菌浓度(MIC).接合实验和Southern杂交进行基因定位.脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析qnrA基因阳性株的同源性.结果 263株大肠埃希菌中有5株检出qnrA基因,占1.9%;99株肺炎克雷伯菌中有8株检出qnrA基因,占8.1%.13株qnrA阳性株中qnrA基因均位于可接合性质粒上.13株菌株同时携带CTX-M基因(1株CTX-M-9、5株CTX-M 14和7株CTX-M-24).qnrA基因阳性的接合菌与受体菌J53相比,环丙沙星对前者的MIC较后者提高了4～133倍.11株环丙沙星耐药株(MIC≥4 mg/L)均存在GyrA亚基的83位氨基酸和(或)87位氨基酸改变,其中8株对环丙沙星高水平耐药株(MIC≥16 mg/L)同时存在ParC亚基的80位氨基酸改变.2株MIC分别为4 mg/L和2 mg/L的菌株GyrA和ParC两亚基均未发生改变.结论 肺炎克雷伯菌中qnrA基因的携带率高于大肠埃希菌.qnrA基因单独作用仅导致低水平喹诺酮类耐药,合并gyrA和(或)parC突变导致喹诺酮类高水平耐药.
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临床尿液标本大肠埃希菌耐药基因qnrA和aac(6')-Ib的检测及耐药性分析
目的 探讨本院临床尿液标本大肠埃希菌菌株耐药基因qnrA和aac(6')-Ib(-cr)的存在及其耐药特征.方法 选择本院临床中段尿标本分离的110株大肠埃希菌菌株,用纸片扩散法进行药敏试验,PCR法扩增qnrA和aac(6')-Ib基因,扩增片段进行电泳分析及DNA测序,并分析耐药性.结果 大肠埃希菌临床株对多种抗生素耐药,对喹诺酮类耐药率高于75％.110株大肠埃希菌菌株,检测出qnrA基因9株,aac(6')-Ib基因16株,其中13株为突变的aac(6')-Ib-cr基因,1株同时携带qnrA和aac(6')-Ib-cr基因.qnrA基因阳性与阴性菌株的耐药性比较虽有差异,但差异无统计学意义(P ＞0.05);aac(6')-Ib基因阳性菌株对喹诺酮类等多种抗生素的耐药率高于阴性菌株(P＜0.05).qnrA与aac(6')-Ib基因阳性菌株间对氨苄西林/舒巴坦、左氧氟沙星的耐药率差异有统计学意义(P＜0.05).结论 本院尿标本大肠埃希菌临床分离株中,对喹诺酮类耐药率高于75％;qnrA与aac(6')-Ib基因均有检出,aac(6')-Ib基因阳性菌株对喹诺酮类等多种抗生素的耐药率高于阴性菌株,qnrA与aac(6')-Ib基因阳性菌株间耐药性有一定差异.临床要加强对耐药菌株检测.
关键词： 大肠埃希菌 qnrA基因 aac(6')-Ib基因 喹诺酮类抗生素 -
阴沟肠杆菌质粒介导耐喹诺酮类药物的机制研究
目的 了解深圳地区阴沟肠杆菌中qnrA基因的流行情况、基因定位及其介导喹诺酮耐药性产生的机制.方法 收集临床分离的阴沟肠杆菌45株,采用PCR法结合测序的技术筛查qnrA基因,大质粒提取技术、Southern杂交和接合传递试验进行质粒定位,琼脂对倍稀释法进行药物敏感性检测.结果 45株阴沟肠杆菌中,7株PCR法及测序证实为qnrA基因.7株菌中6株菌所携质粒被成功提取并进行Southern杂交,qnrA基因定位于80～200kb大小的低拷贝数天然质粒上.4株菌成功进行接合传递试验,使接合子对环丙沙星的MIC值提高了32～64倍.结论 质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrA在深圳地区阴沟肠杆菌中具有较高的流行率,可能是导致阴沟肠杆菌对喹诺酮类抗菌药获得性耐药的重要原因.
