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人乳头瘤病毒阳性宫颈癌和宫颈上皮内瘤变患者血浆miR-155的表达及临床意义
目的 探讨血浆miR-155在人乳头瘤病毒(human papilloma virus, HPV)阳性宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)患者中的表达及临床意义, 评估其对HPV阳性宫颈癌的早期诊断价值.方法 选取2014年3月-2017年3月涿州市医院收治的126例HPV阳性宫颈癌患者(宫颈癌组)、65例HPV阳性CIN患者(CIN组)和65例HPV单纯阳性/HPV阳性子宫良性病变者(对照组),采用RT-PCR检测血浆miRNA-155水平,分析miRNA-155表达与宫颈癌临床病理特征的关系.应用ROC曲线评价miRNA-155、SCCA及CA125对HPV阳性宫颈癌的诊断价值.Pearson相关分析HPV阳性宫颈癌患者血浆miRNA-155与SCCA、CA125的相关性.结果 宫颈癌组血浆miRNA-155、SCCA及CA125表达水平均明显高于CIN组和对照组[miRNA-155(2-ΔΔCt): 15.28 ± 6.37 vs 9.53 ± 2.26和6.27 ± 1.48; SCCA(ng/ml):10.25 ± 2.47 vs 3.57 ± 0.95和0.92 ± 0.24; CA125(U/ml): 48.72 ± 11.93 vs 20.28 ± 7.46和16.73 ±6.12,P均 ＜ 0.01]o HPV阳性宫颈癌患者血浆miRNA-155表达水平与临床分期、淋巴结转移及浸润深度相关(P ＜ 0.05).血浆miRNA-155诊断HPV阳性宫颈癌和CIN的佳截值分别为12.65、7.82,敏感度分别为87.2％和81.3％,特异度分别为84.6％和80.4％.宫颈癌组血浆miRNA-155与SCCA呈正相关(r=0.702,P ＜ 0.01).结论 血浆miRNA-l55在HPV阳性宫颈癌患者中异常高表达,可作为HPV阳性宫颈癌早期诊断和CIN鉴别诊断的生物学标记物.
关键词： 微小核糖核酸-155 宫颈癌 宫颈上皮内瘤样病变 人乳头瘤病毒 -
反义抑制miRNA-155对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、凋亡及侵袭力的影响
目的 观察转染反义微小核糖核酸(miRNA)-155对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力的影响.方法 采用脂质体介导对皮肤鳞状细胞癌A431细胞转染miRNA-155无义序列(阴性对照组)、转染反义miRNA-155(转染组),空白对照组细胞不作处理.实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测转染后A431细胞miRNA-155的相对表达水平;采用四甲基偶氨唑盐(MTT)检测转染后皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖活性;采用流式细胞术(FCM)检测转染后皮肤鳞状细胞癌A431细胞周期改变和凋亡变化;采用Transwell法检测侵袭力与细胞迁移能力.结果 转染组A431细胞中miRNA-155 mRNA的相对表达水平低于空白对照组和阴性对照组(F=634.57,P<0.01),但空白对照组和阴性对照组比较差异无统计学意义.转染72 h后,转染组较空白对照组和阴性对照组细胞存活率明显降低,转染120 h降低为明显(P<0.05).转染组G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,整体细胞增殖指数降低,A431细胞凋亡率、细胞迁移和侵袭力升高(P<0.05),但各组G2/M期细胞周期变化、后2组A431细胞凋亡率、细胞迁移和侵袭力差异无统计学意义.结论 皮肤鳞状细胞癌A431细胞转染反义miRNA-155可减少miRNA-155的表达,有效抑制A431细胞增殖,促进其凋亡.miRNA-155可能成为治疗皮肤鳞状细胞癌基因表达调控的新靶点.
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miR-155在溃疡性结肠炎患者直肠黏膜和外周血单个核细胞中的表达及意义
目的 通过检测微小核糖核酸-155(microRNA-155,miR-155)在溃疡性结肠炎(UC)患者直肠黏膜和外周血单个核细胞(PBMC)中的表达,探讨miR-155在UC中的作用及意义.方法 选择2016年3月至9月诊治的25例活动期UC患者(UC组)及同期15例结肠息肉患者(对照组),肠镜下观察患者肠道黏膜炎症表现,并行直肠黏膜活检(其中结肠息肉患者取其正常直肠黏膜)作病理学检查.实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测直肠黏膜中miR-155、白介素(IL)-17 mRNA、IL-6 mRNA及PBMC中miR-155的表达,直肠黏膜中miR-155与IL-17 mRNA、IL-6mRNA表达的关系采用Pearson相关性分析;免疫组织化学方法检测直肠黏膜中IL-17、IL-6蛋白的表达情况并进行表达评分,分析直肠黏膜及PBMC中miR-155的水平与患者临床特征的关系.结果 25例活动期UC患者,其直肠黏膜中miR-155相对表达量明显高于对照组(13.57 ±2.78 vs 1.02±0.05,P＜0.01);PBMC中miR-155相对表达量亦明显高于对照组(23.68±4.23 vs0.92±0.04,P＜0.01);直肠黏膜中IL-17 mRNA(7.79±1.45 vs 1.20±0.05)及IL-6 mRNA(6.10±1.17 vs 1.02±0.03)相对表达量均高于对照组(P均＜0.05).相关性分析显示,直肠黏膜中miR-155与IL-17 mRNA、IL-6 mRNA的表达呈正相关(r=0.934,P＜0.01;r =0.909,P＜0.01).活动期UC患者直肠黏膜免疫组化IL-17蛋白表达评分[(3.44±0.25)分vs(1.20±0.18)分]及IL-6蛋白[(3.12±0.28)分vs (0.80±0.17)分]高于对照组(P均＜0.01).相关分析显示,miR-155在活动期UC患者直肠黏膜及PBMC中的相对表达量,与患者疾病活动指数呈正相关(r =0.804,P＜0.01;r=0.813,P＜0.01);与患者年龄(r=0.067,P＞0.05;r =0.006,P＞0.05)及性别无关(r=0.151,P＞0.05;r =0.202,P＞0.05).结论miR-155可能参与了UC的发病,其机制可能与促进辅助性T细胞(Th) 17分泌的致炎因子IL-17和IL-6的表达有关,可为UC患者病情活动性及严重程度的评价提供参考.
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干扰MiRNA-155表达的寻常型银屑病患者CD4+T细胞分化观察
目的 观察干扰微小核糖核酸(miRNA)-155表达的寻常型银屑病患者外周血CD4+T细胞分化情况.方法 ①30例寻常型银屑病患者、30例健康志愿者,抽取两组空腹外周静脉血10 mL,免疫磁珠法分选CD4+T细胞,qPCR法检测外周血miRNA-155,流式细胞仪测算表达IL-17A的细胞比例,酶联免疫吸附试验检测外周血IL-17A.②另取寻常型银屑病患者外周血CD4+T细胞,诱导Th17分化后分为miRNA-155模拟物组、miRNA-155抑制物组、空白对照组,分别加入50 nmol/L miRNA-155模拟物(促进表达)、50 nmol/L miRNA-155抑制物(抑制表达)、含有Lipofectamine2000的DMEM高糖培养基,流式细胞仪测算表达IL-17A的CD4+T细胞比例,酶联免疫吸附试验检测IL-17A,qPCR法检测细胞miRNA-155、IL-17A和E26转录因子(Ets)-1mRNA.③取分离培养CD4+T细胞,IL-2刺激培养72 h,将细胞分为A、B、C组.A、B、C组分别加入50 nmol/L miRNA-155模拟物、50 nmol/L miRNA-155抑制物、含Lipofectamine2000的DMEM高糖培养基.A、B、C组再各自分为两个亚组,分别转染Ets-1 siRNA(促进表达)、Ets-1 siRNA阴性对照(空白质粒),培养48 h.荧光定量RT-PCR法检测各组IL-17A、Ets-1mRNA,Western blotting法检测各组细胞Ets-1蛋白.结果 寻常型银屑病外周血miRNA-155相对表达量、IL-17A细胞比例及IL-17A相对表达量均高于健康体检者(P均<0.05).模拟物组、抑制物组、空白对照组CD4+T细胞表达IL-17A细胞比例分别为34.56％ ±4.78％、19.21％ ±1.56％、21.23％ ±2.65％,组间两两比较,P均<0.05.模拟物组、抑制物组、空白对照组培养液IL-17A水平分别为(1486±137)(783±86)、(886±100)pg/mL,组间两两比较,P均<0.05.与空白对照组、抑制物组比较,模拟物组miRNA-155、IL-17A mRNA相对表达量均升高,Ets-1 mRNA相对表达量降低(P均<0.05).与本组Ets-siRNA阴性者比较,A、B、C组IL-17A mRNA相对表达量均升高,Ets-1 mRNA及蛋白相对表达量均降低(P均<0.05).结论 寻常型银屑病患者外周血CD4+T细胞miRNA-155表达升高、Ets-1表达降低.抑制miRNA-155表达可抑制寻常型银屑病患者CD4+T细胞分化为Th17细胞,其机制可能为抑制Ets-1 mRNA及蛋白表达.
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不稳定型心绞痛患者CD4+T淋巴细胞微小核糖核酸155水平与冠状动脉病变的相关性
目的:研究外周血CD4+T淋巴细胞微小核糖核酸-155 (miRNA-155)表达与血清干扰素-γ(IFN-γ)浓度和冠状动脉(冠脉)病变严重程度的相关性.方法:经冠脉造影检查后,将64例疑似不稳定型心绞痛(UAP)患者分为UAP组(经造影确诊冠心病者32例)和对照组(经造影排除冠心病者32例).分别于冠脉造影前18～24 h采集新鲜外周血,免疫磁珠法分选出CD4+T淋巴细胞,荧光定量PCR检测miRNA-155表达,酶联免疫法检测血清IFN-γ表达.并根据造影结果对冠脉病变进行Gensini评分,分析外周血CD4+T淋巴细胞miRNA-155、血清IFN-γ水平与冠脉病变Gemini评分的相关性.结果:UAP组miRNA-155、IFN-γ水平较对照组明显升高,差异有统计学意义(均P＜0.05),miRNA-155和IFN-γ与冠脉病变Gensini评分呈正相关关系(r=0.534、0.713,均P＜0.05).miRNA-155和IFN-γ呈明显正相关关系(r=0.686,P＜0.05).结论:外周血CD4+T淋巴细胞miRNA-155和血清IFN-γ水平与冠脉病变程度密切相关.
关键词： 微小核糖核酸-155 干扰素-γ CD4+T淋巴细胞 冠状动脉病变 -
miRNA-155对调节性T细胞表型和功能的影响
目的：探讨微小核糖核酸（miRNA）-155对调节性T细胞（Treg）的两种亚型诱导性Treg（iTreg）和天然性Treg（nTreg）的影响。方法采用健康成人外周血分离获取的外周血单个核细胞（PBMC），利用磁性细胞分选法分别获取幼稚T细胞和nTreg。培养阶段将细胞分为3组：对照组（幼稚T细胞加入白细胞介素-2培养）、iTreg组（幼稚T细胞加入白细胞介素-2和转化生长因子-β培养）和nTreg组（nTreg加入白细胞介素-2培养）。每组再分为3个亚组：未处理亚组、scramble亚组和miRNA-155拮抗剂亚组（每亚组3个孔）。采用低密度芯片分析方法检测3组中的未处理亚组细胞中miRNA-155的基因表达水平。采用流式细胞术检测3组中各亚组细胞的表面标志物CD25、Foxp3、CD127水平。采用流式细胞术检测3组中各亚组细胞的CD4＋CD25＋Foxp3＋SOCS1＋Treg比例；采用流式细胞术检测3组中各亚组细胞的Treg抑制功能。结果与对照组和iTreg组比较，nTreg组细胞的miRNA-155表达水平明显降低，差异有统计学意义（均为P＜0.05）。与对照组和iTreg组比较，nTreg组的SOCS1表达水平明显升高，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。加入miRNA-155拮抗剂后并未导致Foxp3、CD127和CD25等Treg重要表面标志物发生明显的变化。与对照组和 iTreg组比较， nTreg组的SOCS1表达水平明显升高，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）。iTreg组中的未处理亚组细胞miRNA-155表达水平较低，而拮抗剂抑制其表达之后（miRNA-155拮抗剂亚组），能够使其SOCS1表达升高。iTreg组中，与未处理亚组比较，miRNA-155拮抗剂亚组的 Treg抑制功能在1∶8、1∶16、1∶32的比例时，显示出了更强的抑制功能（均为P＜0.05）。结论体外拮抗miRNA-155对nTreg的抑制功能无明显影响，但是能够增加iTreg的SOCS1表达水平和体外抑制功能。
