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趋化因子受体CXCR4反义RNA重组表达载体的构建及其在真核细胞中的表达
目的:构建趋化因子受体CXCR4反义 RNA真核表达载体并获取重组假病毒颗粒以用于抗HIV-1研究.方法:用RT-PCR法从健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中获得目的基因,并以正、反两个方向定向插入到逆转录病毒载体pLXSN.重组载体用脂质体转染剂 (lipofectAMINE)转染PA317包装细胞,抗G418克隆的细胞上清经逆转录后用荧光定量PCR(fluorogenic-quantitative PCR,FQ-PCR)测定假病毒滴度,进一步感染NIH/3T3 细胞. 结果: CXCR4正、反义RNA 的真核表达载体,经PA317细胞包装形成的假病毒颗粒已成功地感染NIH/3T3细胞,目的基因在该细胞中得到整合与表达.结论:从PBMCs中获得的目的基因通过逆转录病毒载体可转移至真核细胞中并得到表达,为进一步研究CXCR4反义RNA的抗HIV-1作用奠定了基础.
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趋化因子受体CCR3在乳腺癌中的表达及意义
目的 研究趋化因子受体CCR3在人乳腺癌中的表达情况,并分析其与乳腺癌相关临床病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测在150例乳腺癌及相应癌旁正常乳腺组织中CCR3的表达.分析乳腺癌中CCR3表达与患者年龄、临床分期、肿瘤大小、淋巴结转移状况、雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)、人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)等临床病理特征的相关性.结果 (1) CCR3在乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中均有表达,150例乳腺癌组织中CCR3的阳性表达率为86.7％,在相应癌旁正常组织中的阳性表达率为14.0％;CCR3在乳腺癌组织的表达明显高于癌旁正常乳腺组织,差异有统计学意义(P ＜0.001);(2) CCR3的表达与患者的年龄、肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移与否、ER、PR及HER-2的表达等临床病理特征无关(P＞0.05).结论 CCR3可能对乳腺癌的发展有一定的作用,CCR3在乳腺癌中表达的高低与发生淋巴结转移无明显的相关性,CCR3能否作为预测淋巴结转移的指标有待于进一步的研究.
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趋化因子CXCL12及其受体CXCR4在喉咽癌的表达及意义的研究
目的 探讨趋化因子12 (CXCL12)和趋化因子受体4(CXCR4)在喉咽癌中的表达及其在该病发生、发展、浸润和转移中的临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测35例喉咽癌组织(观察组)及28例手术切除的癌旁非肿瘤组织(对照组)中CXCL12和CXCR4的表达.结果 CX-CL12和CXCR4在喉咽癌组织中的表达均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).且两者在喉咽癌中的表达呈正相关(P＜0.01).两者在喉咽癌有颈淋巴结转移组中表达均明显高于无颈淋巴结转移组,其差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CXCL12和CXCR4均参与喉咽癌发生、发展、浸润和转移过程,并且二者之间存在正反馈调节机制,在喉咽癌的发生、发展、浸润和转移过程中起协同作用.
关键词： 趋化因子CXCL12/代谢 受体 趋化因子/代谢 咽肿瘤/代谢 喉肿瘤/代谢 -
寻常型银屑病T细胞CCR7表达的报告基因分析
目的 构建人外周血T细胞CCR7报告基因载体并初步验证IL-18对其作用的影响.方法 提取健康献血员全基因组DNA,克隆包含人CCR7上游启动子的基因序列,酶切、连接形成重组质粒后转化感受态细菌,酶切及测序后构建报告基因质粒,瞬时转染真核细胞COS,荧光素酶报告基因分析.结果 pGL3-basic报告基因质粒与空白对照相比可以检测到荧光素酶基因表达0.024±0.008;含有启动子基因的荧光素酶活性明显高于pGL3-basic(P＜0.01);IL-18作用后报告基因荧光素酶基因的表达明显增加比单独使用pGL3-2233或pGL3-1037质粒DNA转染COS时明显增加(P＜0.01).结论 成功构建包含有人CCR7启动子的报告基因载体,并且初步验证IL-18可以直接激活CCR7基因上游调控区的启动子,激活CCR7基因表达,从基因水平直接找到IL-18对CCR7表达调控的证据.
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白藜芦醇影响肺腺癌患者癌组织细胞增殖及CXCR4表达
目的：通过使用白藜芦醇作用于肺腺癌患者癌组织A549细胞，研究其对癌细胞细胞周期及趋化因子受体CXCR4的影响。方法：对使用白藜芦醇的处理的癌组织细胞应用噻唑蓝比色其对A549细胞周期的影响；免疫印迹法检测白藜芦醇对A549细胞CXCR4表达的影响。结果：白藜芦醇确可显著抑制肺腺癌A549细胞的增殖和CXCR4的表达，而且抑制效果都有时间和浓度依赖性。结论：白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞的增殖和CXCR4的表达有明显的抑制作用，而且主要是通过抑制DNA合成前期G1期来实现的。
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脑胶质瘤60例CXCR4与EGFR的表达及意义
目的:探讨CXCR4和EGFR在脑胶质瘤中的表达状况及其与肿瘤发生、发展和侵袭性生长的关系.方法:采用免疫组织化学SP法,检测60例脑胶质瘤、5例正常脑组织中CXCR4和EGFR的表达.用统计学方法分析其表达及与胶质瘤病理分级的关系.结果:60例胶质瘤患者中分别有39例表达CXCR4和EGFR.CXCR4在Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ级胶质瘤中阳性表达率分别为38.10%、73.91%、87.50%;EGFR在Ⅱ、Ⅲ及Ⅳ级胶质瘤中阳性表达率分别为52.38%、60.87%、87.50%.正常脑组织均不表达CXCR4、EGFR.CXCR4、EGFR在不同级别胶质瘤间的表达有显著性差异(P<0.05),两者随着胶质瘤病理分级增高而表达增强(rs=0.426,P <0.05).结论:CXCR4与EGFR表达呈正相关,均与胶质瘤的病理分级有关.
