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银菘香合剂的体外抗病毒作用研究
目的：研究中药合剂“银菘香”的抗多种病毒活性及其潜在机制。方法检测该复方在体外对甲型流感病毒FM1株（HPR8株（H1N1亚型）、副流感病毒1型（PIV-1）、单纯疱疹病毒1型（HSV-1）、呼吸道合胞病毒（RSV）、柯萨奇病毒B族4型（CoxB4）的抗病毒作用，并通过液相蛋白芯片技术检测“银菘香”对流感病毒诱导的A549细胞的11种炎性因子释放的影响，分析其潜在作用机制。结果研究显示“银菘香”对上述5种病毒均具有一定的抑制作用；“银菘香”可显著降低流感病毒诱导的A549细胞多种细胞因子如IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-18、 TNF-α、IFN-g和GM-CSF的释放(P＜0.05，P＜0.01)。结论“银菘香”具抗一定病毒活性，其潜在机制可能与其抑制病毒诱导的多种炎症因子释放，减轻炎症损伤有关。
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Luminex液相蛋白芯片检测一氧化氮合酶抑制剂对骨关节炎患者软骨基质金属蛋白酶表达的影响
目的 应用Luminex液相蛋白芯片检测一氧化氮合酶(NOS)抑制剂对骨关节炎(OA)患者软骨基质金属蛋白酶(MMPs)表达的影响,以及NOS抑制剂改善OA代谢的途径.方法 研究经本院医学伦理委员会批准并获取患者的知情同意.无菌条件下,取15例重度OA需行关节置换术患者的关节软骨,置入体外培养系统.应用随机数目表法分为:①对照组:不加药物干预;②L-N6-亚氨乙基-赖氨酸(L-NIL)组:加入NOS抑制剂L-NIL干预.培养72 h后,通过检测硝酸盐和亚硝酸盐的含量来观察软骨一氧化氮(NO)的释放量和NOS的活性;应用Luminex液相蛋白芯片检测OA患者软骨中MMPs(MMP-1,MMP-2,MMP-3,MMP-9,MMP-13)表达量的变化.数据采用配对t检验作均数的显著性检验.结果 对照组软骨培养72 h后,在其上清液中可检测到高浓度NO[(216±47)μmol/L]和高活性的NOS[(5.7±1.3)U/ml],L-NIL组NO释放量[(55±20)μmol/L]较对照组明显减少,NOS活性[(1.7±0.7)U/m1]显著降低(P均<0.01).Luminex液相蛋白芯片显示对照组OA软骨中MMPs[(MMP-1 (10.8±5.4)ng/ml,MMP-2 (9.2±3.3)ng/ml,MMP-3(11.6±4.2)ng/ml,MMP-9(1.27±1.07)ng/ml,MMP-13(3.6±1.3)ng/ml)的表达异常,而L-NIL组OA软骨中MMPs表达量明显被抑制[分别为(3.6±1.8)ng/ml,(2.3±1.2)ng/ml,(3.6±1.4)ng/ml,(0.65±0.21)ng/ml,(1.8±0.5)ng/ml,P均<0.05].结论 Luminex液相蛋白芯片检测系统表明NOS 抑制剂通过减少NO的过度释放和降低NOS活性,进而抑制MMPs的过度表达来改善OA软骨的代谢.
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一氧化氮合酶抑制剂对白细胞介素1β诱导软骨细胞增殖和基质金属蛋白酶表达的影响
目的:研究表明,白细胞介素1β对鼠肾细胞、心肌细胞和神经上皮细胞发挥抗增殖作用,但其是否可抑制人的软骨细胞增殖?这种抗增殖作用是否可被一氧化氮合酶抑制剂抑制尚不清楚.实验拟验证一氧化氮合酶抑制剂对人骨关节炎软骨细胞增殖及基质金属蛋白酶的影响.方法:选择2006-05/12在南方医科大学附属南方医院脊梓骨病科住院的膝骨关节炎患者8例.所有患者均符合1986年美国风湿病学会关于骨关节炎的临床诊断标准或临床及放射学诊断标准,排除其他疾病(创伤性、风湿性及感染性)所导致的骨关节炎.所有患者均在术前告知,并签有试验知情同意书.分离培养关节软骨细胞,将不同浓度(0,1,10,100 μg/L,其中0 μg/L作为对照)白细胞介素1β作用于骨关节炎软骨细胞24,48,72 h,一氧化氮合酶抑制剂氨基胍作为干扰因素,与白细胞介素1β共同作用72 h,收集细胞上清液,一氧化氮的表达量通过一氧化氮试剂盒检测,并作为检测一氧化氮合酶抑制剂活性的手段;四甲基偶氮唑盐法检测软骨细胞的增殖;xMAP技术检测软骨细胞基质金属蛋白酶1,基质金属蛋白酶3和基质金属蛋白酶9的表达.结果:①不同时间点1,10,100 μg/L白细胞介素1β组作用后的吸光度值与对照组相比,差异显著(JP＜0.05,P＜0.01);相同浓度白细胞介素1β在24,72h的吸光度值相比较,差异显著(P＜0.01).②白细胞介素1β和氨基胍(100 μmol/L)共同作用软骨细胞72 h后,各浓度组吸光度与白细胞介素1β组相比,差异显著(P＜0.01).③白细胞介素1β可促进软骨细胞一氧化氮的表达,并呈剂量依赖关系.④白细胞介素1β促进基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3的表达,与对照组相比,差异有显著性意义(P＜0.01),而软骨细胞基质金属蛋白酶9的表达在本实验中没有检测到.结论:白细胞介素1β可抑制软骨细胞增殖,诱导基质金属蛋白酶表达,这些影响可被氨基胍抑制,白细胞介素1β和氨基胍对软骨细胞的影响可能是通过一氧化氮途径发挥作用.
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液相蛋白芯片与酶免疫法检测4种肿瘤标志物的比较
目的:建立液相蛋白芯片测定AFP、CEA、CA19-9、CA125等肿瘤标志物的方法,讨论其应用于临床检验的可行性.方法:分别用液相蛋白芯片法检测微粒子酶免分析法(MEIA)检测的阳性标本AFP 60例、CEA 42例、CA19-9 65例、CA125 50例及上述项目阴性样本33例.结果:液相蛋白芯片法检测的样品浓度范围比MEIA法的范围更大,在共同的样品浓度范围内,两者检测定性和定量结果基本是一致的.而液相蛋白芯片的方法可以同时进行多指标的检测,体现出高通量的概念,可以节省临床上检测的时间和人力需求.结论:液相蛋白芯片法检测肿瘤标志物,可应用于临床检测.
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5种重要虫媒病毒液相蛋白芯片多重检测方法的建立及应用
目的 建立森林脑炎、乙型脑炎、登革热、基孔肯雅和刚果-克里米亚出血热5种虫媒病毒的液相蛋白芯片检测方法,为虫媒病毒的筛查检测提供一种新方法.方法 将病毒抗原包被微球,采用间接法原理,利用病毒抗体和阳性血清建立并优化5种虫媒病毒液相蛋白芯片检测方法.对临床样本进行检测,评价液相蛋白芯片方法的敏感性、准确性.结果 以病毒抗体和阳性血清建立的5种虫媒病毒液相蛋白芯片检测方法,病毒抗体及生物素标记二抗的孵育时间均为lh,生物素标记羊抗兔/鼠/人IgG的佳稀释度为1:100,能对5种虫媒病毒进行准确检测.该方法具有高通量、快速、敏感、特异等特点.结论 本研究所建立的5种虫媒病毒液相蛋白芯片检测方法,可用于这5种虫媒病毒的同时筛查检测,适用于国境口岸对虫媒病毒进行筛查检测,能提高检测的效率,满足口岸检疫中快速检验的要求.
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不同治则方药对快速老化小鼠脑组织细胞因子表达的影响
目的 观察不同治则方药对痴呆动物模型脑组织细胞因子表达的影响.方法 7月龄快速老化亚系SAMP8小鼠分为痴呆模型组、阳性对照药脑复康组、六味地黄汤组、四君子汤组、归脾汤组、当归芍药散组等6个组;抗快速老化亚系SAMR1作为正常对照组.给药4周后,用液相蛋白芯片(Luminex)技术同时测定脑组织中的10种细胞因子(GM-CSF,IFN-γ,TNF-α,IL-1β,IL-2,L-4,IL-5,IL-6,IL-10,IL-12)含量.结果 8月龄SAMP8小鼠脑组织中某些细胞因子表达发生异常改变;当归芍药散、四君子汤能分别提高模型小鼠海马中的IL-4和IFN-γ的水平(P <0.05),而六味地黄汤组则能使模型小鼠海马中的10种细胞因子指标恢复到正常水平(P<0.05, P<0.01).结论 六味地黄汤、当归芍药散、四君子汤则能在一定程度上调节SAMP8小鼠的异常免疫反应,其中六味地黄汤的作用效果较好.
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Luminex液相芯片技术测定人早孕滋养层细胞及蜕膜细胞中基质金属蛋白酶的表达
目的 研究人正常早孕滋养层细胞与蜕膜细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)的表达特点,探讨子宫内膜蜕膜化进程中MMPs的变化及对胚胎着床的影响.方法 收集正常妇女分泌期子宫内膜及人正常早孕绒毛和相应蜕膜标本各5例,分别进行离体培养,鉴定其纯度在98%以上后,收集培养上清液,利用Luminex(LumAvidin Beads)测定培养上清液中MMPs(MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MMP-12、MMP-13)蛋白表达的变化,分析MMPs在不同培养条件下的表达差异及表达之间的相关性.结果 ①在不同培养条件下,MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9均有表达,MMP-12及MMP-13分别在ESC及DSC中无表达,且MMP-8、MMP-12、MMP-13表达均低.②与子宫内膜细胞相比,MMP-1、MMP-3、MMP-7在DSC,EVCT中表达均降低,降低有显著性差异(P＜0.05),而MMP-2、MMP-8、MMP-9在DSC,EVCT中则显著升高,升高有显著性差异(P＜0.05).且在蜕膜细胞中,MMP-1、MMP-3、MMP-2、MMP-7高表达尤为显著.③与蜕膜细胞相比,MMP-1、MMP-3、MMP-7在EVCT中表达显著降低(P＜0.05).MMP-2、MMP-9、MMP-13在EVCT中升高有显著性(P＜0.05).且在滋养层细胞中,MMP-2、-9高表达尤为显著.④MMPs之间的相关性:MMP-2与MMP-9相关关系显著(P＜0.05),且关系较密切(r=0.6645).MMP-1,MMP-3,MMP-7两两间相关关系显著(P＜0.05),且关系密切(r＞0.7340).其他MMP之间相关关系不显著.结论 首次利用Luminex xMAP方法多通量的检测到子宫内膜间质细胞、早孕蜕膜细胞与滋养层细胞的多种MMPs的表达,它们均可分泌多种MMP,但是不同种类组织细胞的表达量不同;MMPs可能通过调控子宫内膜蜕膜化及母胎界面间MMPs的变化而影响胚胎着床,为成功妊娠创造条件.
关键词： 绒毛外细胞滋养层细胞 蜕膜细胞 子宫内膜 基质金属蛋白酶 液相蛋白芯片 -
液相蛋白芯片技术及其在中医药研究中的应用
以荧光微球为载体基质且有别于固相蛋白芯片的液相蛋白芯片技术,是美国纳斯达克上市公司Luminex于本世纪初研制出的后基因组时代的技术平台,通常用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析及蛋白质一蛋白质相互作用等研究,可广泛应用于生物医学包括中医药研究的各个领域.液相蛋白芯片具有灵活性好、灵敏度高、操作简单、通量大等特点,可进行细胞因子、激酶、肽类等的检测,并可用于中药复方和单体的药理学研究及有效方药和成分的筛选.
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森林脑炎、登革热和乙型脑炎病毒液相蛋白芯片多重检测方法的建立及应用
目的 建立森林脑炎、登革热和乙型脑炎病毒液相蛋白芯片检测方法.方法 将病毒抗原包被微球,利用病毒抗体和阳性血清建立并优化森林脑炎、登革热和乙型脑炎病毒液相蛋白芯片检测方法,评价方法的敏感性和准确性.结果 建立的液相蛋白芯片检测方法病毒抗体和生物素标记二抗的孵育时间均为1h,生物素标记羊抗兔IgG和羊抗人IgG佳稀释度分别为1∶200和1∶100,能对3种病毒单一和混合感染准确检测.对295份临床样本的检测结果表明,该方法具有高通量、快速、敏感、特异的特点.结论 本方法能对3种虫媒病毒同时进行快速检测,为虫媒病毒的筛查检测提供一种新方法.
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液相与固相蛋白芯片检测多肿瘤标记物的应用比较
[目的]比较液相与固相蛋白芯片检测多肿瘤标记物的临床应用效果,并探讨液相蛋白芯片应用于临床检验的可行性.[方法]分别用液相与固相蛋白芯片方法检测45例临床送检样本的AFP、CA125、CA242及CEA,对两种方法的操作步骤、有效检测范围、参考临界值及检测结果进行比较.[结果]与固相蛋白芯片相比,液相蛋白芯片检测多肿瘤标记物的操作至少节省1 h,标本用置节省80 μl,线性范围至少增大1 倍;两种方法检测AFP、CA125、CA242及CEA的参考临界值相同,阴阳性判断结果的符合率分别为97.78%(44/45)、86.67%(39/45)、88.89%(40/45)、86.67%(39/45).统计学分析表明两种方法检测的阴阳性结果无明显差异.[结论]液相蛋白芯片检测多肿瘤标志物具有操作简便、标本用量少、线性范围广、准确度高的优点,可推广应用于临床检验.
关键词： 液相蛋白芯片 固相蛋白芯片肿瘤标记物
