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氯丙烯处理后大鼠大脑、脊髓和坐骨神经Gq/11α蛋白含量的变化
目的探讨氯丙烯引起周围神经病的机制.方法 Wistar雄性大鼠sc氯丙烯3个月后,用Western印迹方法分析测定大鼠大脑、脊髓、坐骨神经组织匀浆沉淀中Gq/11α蛋白含量的变化.结果在大脑沉淀中,75 mg*kg-1氯丙烯组使Gq/11α蛋白含量降低20%,150 mg*kg-1组降低25%(P<0.01);在脊髓沉淀中,75 mg*kg-1氯丙烯组使Gq/11α蛋白含量降低27%,150 mg*kg-1组降低63%(P<0.01);在坐骨神经沉淀中,未检测到Gq/11α蛋白.结论氯丙烯亚慢性中毒可导致大脑、脊髓神经细胞膜的Gq/11α蛋白相对含量减少,下调Gq-磷脂酶C信号传导通路.
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不同配体对m5乙酰胆碱受体-G蛋白亚单位G11融合蛋白表达和功能的影响
目的制备毒蕈碱乙酰胆碱受体m5亚型与G-蛋白亚单位G11(m5AChR-G11)融合蛋白,探索m5AChR与G11之间的耦联功能、相互作用及其影响因素.方法两步PCR法建立m5AChR与G11融合cDNAs,并在Sf9细胞内表达.[3H]QNB和[35S]GTPγS结合实验检测m5AChR与G11融合蛋白的功能.结果m5AChR-G11融合蛋白的表达水平为(60.4±2.0)nmol·g-1膜蛋白.不同配体存在使融合蛋白中G11与GDP的亲和力发生变化.乙酰胆碱(ACh)、卡巴胆碱、毛果芸香碱、异丙铵、异丙嗪及阿托品存在时,GDP的IC50值分别为135,63,182,4.1,8.9和5.9 μmol·L-1,无配体存在时,GDP的IC50值为23.4 μmol·L-1.结论杆状病毒Sf9细胞系统表达的m5AChR-G11融合蛋白具备m受体配体结合特性和组分间耦联的功能.m5AChR-G11融合蛋白对GDP亲和力取决于m受体配体的性质,分析GDP的亲和力的变化有利于筛选和鉴别m5受体亚型特异性配体.
