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染料木黄酮、拟雌内酯及槲皮素对孕烷X受体介导的CYP3A4转录的调节作用
目的研究植物雌激素中的染料木黄酮(GST)、拟雌内酯(COM)及槲皮素(QU)能否通过活化人孕烷X受体(PXR)诱导CYP3A4的转录表达.方法用PXR依赖的瞬时转染报告基因试验检测3种植物雌激素的诱导作用.结果 GST, COM和QU均能通过活化PXR诱导HepG2细胞CYP3A4基因的转录表达,大诱导倍数(相对于用浓度为0.1%的DMSO处理的细胞)在本实验中分别为11.97(P<0.01),2.98(P<0.01)和3.28(P<0.01).结论 GST,COM和QU均能诱导CYP3A4的转录表达,其作用机制通过活化PXR.GST,COM和QU的摄入可能影响其他CYP3A4底物尤其是药物在体内的代谢.
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某自来水厂水源水有机提取物的雌激素样活性研究
[目的]了解某自来水厂水源水有机提取物的雌激素样活性.[方法]用固相萃取法富集水样,分低、中、高剂量染毒组(体外试验为每毫升染毒量分别相当于10、100、1 000mL水源水中有机提取物的剂量;体内试验为每千克体重灌胃量相当于2、5、10、25L水源水中有机提取物的剂量)、阴性对照组和雌二醇阳性对照组,通过体外人乳腺癌(MCF-7)细胞增殖试验、报告基因试验和初断乳大鼠子宫增重试验对水源水有机提取物的雌激素样活性进行研究.[结果]体外细胞增殖试验中,高剂量组较阴性对照组出现细胞增殖效应(P＜0.05),细胞增殖率为(130.85±13.68)%;而报告基因试验中,中剂量组检测到荧光强度增加(P＜0.05),相对荧光强度为(207.67±12.40)%.子宫增重试验中,相当于低、中、高剂量染毒组大鼠子宫湿重和黏液重脏器系数与阴性对照组相比差异无统计学意义.[结论]体外试验表明水源水中含有雌激素样活性物质,但体内试验尚不能确定该水源水具有明确的雌激素样活性.
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筛选维甲酸样内分泌干扰物报告基因方法的建立
[目的]建立应用荧光素酶报告基因筛检干扰维甲酸功能的环境化学物的方法.[方法]利用基因重组方法将3个重复序列RXR/RXR反应元件和2个重复序列RAR/RXR反应元件插入含荧光素酶报告基因的pGL4质粒上游,再将该质粒转染表达维甲酸受体的MLE-12细胞,加入全反式维甲酸或雌二醇后,检测荧光素酶活性.[结果]构建的RARE-TATA-pGL4报告基因质粒经限制性内切酶和DNA测序证实构建成功.经报告基因试验证实,与阴性对照组相比,维甲酸能使pGL4质粒的荧光素酶相对活性增加30.28倍,而雌二醇仅为1.4倍,说明雌二醇没有干扰作用.[结论]RARE-TATA-pGL4报告基因质粒可用于筛检环境中维甲酸样干扰物.
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雌激素受体亚型介导的荧光素酶报告基因试验方法的建立及应用
目的 建立人源性雌激素受体(hERα/β)介导的荧光素酶报告基因试验方法,比较不同雌激素受体亚型介导的报告基因试验的反应性和灵敏度,为检测内分泌干扰物拟雌激素活性提供研究工具.方法 以恒河猴肾细胞(LLC-MK2)为转染细胞,以萤火虫荧光素酶基因(Luc)为报告基因,利用瞬时转染的方法,将表达hERα/hERβ的质粒与重组Luc报告基因质粒pERE-minP-Luc2P、内对照质粒pGL4.74共转染LLC-MK2细胞,建立由hERα/β介导的Luc报告基因试验方法.以雌二醇(E2)、己烯雌酚(DES)作为阳性受试物,以10 s mol/L雌激素拮抗剂(ICI 182,780)和不同浓度的E2共同染毒,观察Luc表达的变化.用双酚A(BPA)和染料木黄酮(GS)对方法的有效性进行检验并比较雌激素受体两亚型反应性、灵敏度和特异性.结果 hERα报告基因系统对E2的低检测限为1.9×10-11 mol/L,在10-8 mol/L处获得高诱导倍数,是对照组的30.7倍.hERp报告基因系统对E2的低检测限为2.2×10-11 mol/L,在10-8 mol/L处获得高诱导倍数,是对照组的14.4倍.ICI 182,780在10-5 mol/L浓度下能显著抑制两个报告基因系统E2的雌激素活性.未转染受体表达载体hER-pcDNA3.1的LLC-MK2细胞用不同浓度E2诱导,两个报告基因系统均与E2无明显反应.BPA和GS在以上两个不同的报告基因系统中均能诱导Luc表达,但同一受试物在不同雌激素亚型介导的报告基因系统中表达倍数不同.结论 本研究建立ER不同亚型的报告基因试验有较高的灵敏度和重复性.hERα介导的报告基因试验灵敏度高于hERβ,在hERα系统中BPA雌激素活性强于GS,在hERβ系统中GS雌激素活性强于BPA.
