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UPLC-Q-TOF-MS分析姜黄乙酸乙酯提取物抑制表皮生长因子受体活性的成分
目的:应用均相时间分辨荧光(homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF)技术,筛选发现具有抑制表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)活性的姜黄提取物,同时采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术(ultra-performance liquid chromatography/quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC/Q-TOF-MS)对其活性部位进行分析和鉴别.方法:药材经石油醚渗滤、乙醇提取、乙酸乙酯萃取和水煎煮后,得到4个提取部位.采用HTRF法检测姜黄乙酸乙酯提取物对ERFR的抑制作用,计算提取物对EFFR的抑制率.采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,以0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,200～ 400 nm扫描,使用ESI离子源,在正离子模式下采集数据.结果:姜黄的乙酸乙酯部位显示较强的EGFR抑制活性,并从其活性部位中分析鉴定出9个化学物,主要成分为姜黄素类化合物,其中6个分别是香豆酸、姜黄酮、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素、1-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1,6-庚二烯-3,5-二酮,3个未知成分.结论:研究发现姜黄乙酸乙酯提取部位具有较强的EGFR抑制活性,IC50为3.621μg· mL-1,根据Q-TOF-MS测定的相对分子质量及正离子信息,鉴定了姜黄乙酸乙酯提取物主要为姜黄素类成分,其中以姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素为主要活性成分,说明姜黄素类化合物为抑制EGFR活性的主要成分,为其在抗癌方面的应用提供理论依据,同时为进一步跟踪分离活性成分奠定基础.
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血管内皮生长因子受体-2抑制剂高通量筛选模型的建立和应用
目的 利用均相时间分辨荧光(HTRF)技术建立血管内皮生长因子受体-2抑制剂高通量药物筛选模型,从化合物样品库中寻找小分子抑制剂.方法 使用20μL检测体系,384低容量白板,采用均相时间分辨荧光技术对反应体系中的酶活性进行荧光检测,进而评价待测样品的抑制活性.模型建立的体系优化包括如下实验步骤:酶浓度及反应时间优化,ATP和底物米氏常数测定,质控实验包括反应体系信噪比实验、抑制剂SU5416的IC5o测定,Z′因子的测定.在建立稳定模型检测体系之后,对本中心化合物库提供的10 560个样品进行活性筛选,并对部分活性化合物进行IC50的测定.结果 在血管内皮生长因子受体-2活性体系优化实验中求得血管内皮生长因子受体-2激酶适反应酶浓度为0.10 ng·μL-1,适反应时间为15min,ATP Km=0.75 mol·L-,底物Km=94.90 nmol·L-1,信噪比底物:SA =2:1,Z'值为0.85,阳性药IC50=1.03μmol·L-1.通过部分初筛活性样品进行复筛研究,得到3个活性化合物S2-14,S2-16、S2-38 IC50分剐为1.01×10-4,6.04×10-5,7.23×10-6 mol·L-1.结论 利用均相时间分辨荧光技术成功建立了血管内皮生长因子受体-2激酶高通量筛选模型,并进行了一定量的定向筛选研究,发现了若干先导化合物.本实验体系方法可靠,结果稳定,可作为抗血管新生天然产物筛选体系进行应用推广.
关键词： 均相时间分辨荧光 血管内皮生长因子受体-2 血管新生 高通量筛选 -
UPLC-Q-TOF-MS分析鸡血藤乙酸乙酯提取物中抑制表皮生长因子受体活性成分
目的 应用均相时间分辨荧光(HTRF)技术,筛选发现具有抑制表皮生长因子受体(EGFR)活性的鸡血藤提取物,同时采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS)对其活性部位进行分析和鉴别.方法 药材经石油醚渗滤、乙醇提取、乙酸乙酯萃取和水煎煮后,得到4个提取部位.采用HTRF法检测鸡血藤乙酸乙酯提取物对EGFR的抑制作用,计算提取物对EGFR的抑制率.采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,以0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相梯度洗脱,200～400 nm扫描,使用ESI离子源,在正离子模式下采集数据.结果 首次发现鸡血藤的乙酸乙酯部位显示较强的EGFR抑制活性,IC50为2.277 mg/L,并从其活性部位中分析鉴定出15个化学物,主要成分为黄酮类化合物,其中10个分别是儿茶素-儿茶素,阿福豆素-儿茶素,杨梅素-3’-O-β-D吡喃木糖苷,芒柄花苷,芒柄花黄素,Afrormosin,表没食子儿茶素,催吐萝芙木醇-9-O-木糖-(1→6)葡萄糖苷,木犀草苷,没食子儿茶素-儿茶素;5个未知成分.儿茶素、表没食子儿茶素、芒柄花黄素为主要活性成分.结论 鸡血藤乙酸乙酯提取物所含的黄酮类成分为抑制EGFR活性的主要成分,本研究以期为其在抗癌方面的应用提供理论依据,同时为进一步跟踪分离活性成分奠定基础.
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五倍子抑制表皮生长因子受体活性及活性部位的UPLC/Q-TOF-MS分析
目的 应用均相时间分辨荧光(HTRF)技术,筛选发现具有抑制表皮生长因子受体(EGFR)活性的五倍子提取物,同时采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术(UPLC/Q-TOF-MS)对其活性部位进行分析和鉴别.方法 药材经石油醚渗滤、乙醇提取、醋酸乙酯萃取和水煎煮后,得到4个提取部位.采用HTRF法检测五倍子醋酸乙酯提取物对EGFR的抑制作用,并计算抑制率.采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱,以0.1％甲酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,200～400 nm扫描,使用ESI离子源,在正离子模式下采集数据.结果 五倍子的醋酸乙酯部位显示较强的EGFR抑制活性,并从其活性部位中分析鉴定出14个化合物,主要成分为鞣质类化合物,其中11个分别为石榴皮鞣素、香草醛、六羟基二苯酰胺葡萄糖、鞣花鞣质、杨梅苷、原儿茶素、五倍子鞣质倍酰葡萄糖、五倍子鞣质、鞣花酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、monogalloyl-glucose,另外3个为未知成分.结论 本研究首次发现五倍子醋酸乙酯提取部位具有较强的EGFR抑制活性,IC50为5.528 μg/mL,Q-TOF-MS测定的相对分子质量及正离子信息鉴定表明五倍子醋酸乙酯提取物中主要为鞣质类成分,其中五倍子鞣质、鞣花酸、鞣花鞣质为主要成分.五倍子中含有的鞣质类成分为抑制EGFR活性的主要成分,为其在抗癌方面的应用提供理论依据,同时为进一步跟踪分离活性成分奠定基础.
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HIV-1衣壳蛋白抑制剂体外筛选方法研究进展
HIV-1的感染高度依赖其圆锥形的"富勒烯"型衣壳.衣壳由大约1500个衣壳蛋白组装而成.近年来,衣壳蛋白已成为设计和筛选抗HIV-1药物的理想靶点.目前,文献已报道了多种基于不同原理的HIV-1衣壳蛋白抑制剂的筛选方法,该文将对这些体外筛选方法进行综述.
