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高效液相色谱法同时测定人全血中阿糖胞苷及其代谢物阿糖尿苷的浓度
目的 建立同时测定人全血中阿糖胞苷及其代谢产物阿糖尿苷的高效液相色谱法.方法 用蛋白沉淀法处理全血样品.色谱柱:Cosmosil Cholester (4.6 mm ×250 mm,5μm),流动相:甲醇-0.01 mol·L-1磷酸盐缓冲液=3∶97,柱温:25℃,流速:1.0 mL·min-,检测波长:280 nm.结果 标准曲线方程:阿糖胞苷为y=16417.59x-14511.01(r =0.998 5),在1.55 ～198.00μg·mL-线性关系良好;阿糖尿苷为y =4468.72x-1521.15(r =0.997 8),在1.34～171.00μg·mL-1线性关系良好.阿糖胞苷的低检测浓度为0.47 μg·mL-1,提取回收率74.84％ ～ 87.74％;阿糖尿苷低检测限为0.40 μg·mL-1,回收率77.76％ ～ 88.92％,日内精密度RSD均≤15％,高、中浓度点日间RSD均≤15％,低浓度日间RSD＜ 20％.结论 本方法快速、准确、灵敏,可用于测定人全血中阿糖胞苷及其代谢产物阿糖尿苷的浓度.
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固定化细胞转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷
采用聚乙烯醇、卡拉胶和聚丙烯酰胺为混合载体固定化埃希菌AEM0812细胞.以8.0％聚乙烯醇、1.0％卡拉胶和10％聚丙烯酰胺作为载体,菌体浓度为30％,在pH 7.0、含4.0％氯化钾的饱和硼酸溶液(成型剂)中处理36h,得相对酶活力为98.17％且较稳定的颗粒型固定化细胞,用来催化转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷,在54℃、pH 6.5和缓冲液离子浓度120 mmol/L的适条件下,阿糖尿苷的转化率为68％.固定化细胞连续5次反应的平均转化率约54.3％.
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埃希菌全细胞转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷
利用选择培养基从土壤中筛选到具有高核苷磷酸化酶活性的AEM0812菌株,通过16S rDNA鉴定,初步确定为埃希菌(Escherichia sp.).该菌株的适生长温度与产酶温度均为37℃,适产酶pH为7.5～8.0,通气培养佳产酶的发酵时间为8～9 h.利用该菌全细胞建立了以阿糖尿苷为底物酶促合成阿糖腺苷的反应体系,成功得到阿糖腺苷.优化反应条件,并进行了100 L放大试验,结果阿糖尿苷转化率为78.17%,反应液中阿糖腺苷浓度为9.38 g/L.
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HPLC法测定血浆中阿糖胞苷及阿糖尿苷浓度
目的:建立同时测定血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷浓度的高效液相色谱法,并用于1例急性非淋巴细胞白血病患儿的血药浓度监测.方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱:XTerra C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:0.01 mol·L-1的磷酸盐缓冲液(pH=6.0);检测波长:280 nm;流速:0.95 mL·min-1;柱温:30℃.结果:阿糖胞苷血药浓度在0.25～21.74 mg·L-1范围内线性关系良好(r=0.999 6),检测限为0.1 mg·L-1,日内、日间RSD小于5.0%和8.0%;阿糖尿苷血药浓度在0.99～86.96 mg·L-1范围内线性关系良好(r=0.999 3),检测限为0.4 mg·L-1,日内、日间RSD小于5.0% 和8.0%.阿糖胞苷及阿糖尿苷平均提取回收率高于96.0%.结论:本方法简单、快速、准确,适用于临床上阿糖胞苷和阿糖尿苷的血药浓度监测及药动学研究.
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大剂量阿糖胞苷治疗时血浆阿糖胞苷及阿糖尿苷的HPLC测定方法
目的 建立HPLC法测定大剂量阿糖胞苷治疗时血浆中阿糖胞苷(Ara-C)和阿糖尿苷(Ara-U)的浓度.方法 反相高效液相色谱法,色谱拄:Phenomenex Fusion(4.6×150mm,4μm),流动相:0.01M磷酸盐缓冲液(pH=7.2)柱温:30℃,流速:0.8mL·min-1,检测波长:Ara-C:280nm,Ara-U:262nm.结果 Ara-C血药浓度在0.5～20μg·mL-1范围内线性良好(R=0.99),回收率为96.1～105.3％,Ara-U血药浓度在1～40μg·mL-1范围内线性良好(R=0.99),回收率为97.2～104.7％,日间、日内RSD小于5％和10％.结论 本方法简便、快速,适合用于临床血药浓度监测和药动学研究.
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UPLC法同时测定盐酸阿糖胞苷原料药的含量和有关物质
目的:建立同时测定盐酸阿糖胞苷原料药的含量和有关物质的方法.方法:采用超高效液相色谱法.色谱柱为InertsilODS-3C18,流动相为磷酸盐缓冲液-甲醇(梯度洗脱),流速为0.8 ml/min,检测波长为254 nm,柱温为40℃,进样量为10 μl.结果:尿嘧啶、尿苷、阿糖尿苷、盐酸阿糖胞苷检测质量浓度分别在0.100 8～20.16、0.1～20.12、0.095 6～19.12、0.1～20.004 μg/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.999 9、0.999 8、0.999 9、0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤0.79％;尿嘧啶、尿苷、阿糖尿苷平均加样回收率为103.8％、102.2％、99.7％,RSD分别为2.44％、2.69％、3.16％(n=9).结论:该方法准确、灵敏度高、专属性强、重复性好,可用于盐酸阿糖胞苷原料药的质量控制.
