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γ-羟基丁酸受体在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用
研究γ-羟基丁酸(gamma-hydroxybutyric acid,GHB)受体在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用及其机制.选用GHB受体选择性激动剂NCS-356和特异性拮抗剂NCS-382作为工具药,采用改良的Longa法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型.缺血2 h再灌注2 h后,动物进行Longa法行为功能评分;再灌注24 h后,部分动物用TTC染色法测定大鼠脑梗死体积;部分动物应用流式细胞仪测定神经细胞内游离钙离子浓度;分光光度法测定缺血侧大脑皮质中总一氧化氮合酶(tNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性和一氧化氮(NO)含量;放射免疫法测定大鼠缺血侧大脑皮层环磷酸鸟苷(cGMP)含量.Isc/R组大鼠行为功能评分、脑梗死体积、神经细胞内游离Ca2+浓度、cGMP和NO含量、tNOS及iNOS活性均显著高于假手术组;NCS-356 160 μg·kg-1(N1)、NCS-356 320 μg·kg-1(N2)、 NCS-356 640 μg·kg-1(N3)和尼莫地平600 μg·kg-1(Nim)组的上述各指标均不同程度地低于Isc/R组,而NCS-382 640 μg·kg-1+NCS-356 640 μg·kg-1 (NCS-382+N3)组则能显著对抗N3组的作用.激动GHB受体对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与降低神经细胞内游离Ca2+浓度,减少NO及cGMP含量有关.
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侧脑室或鞘内注射NCS-382对七氟烷催眠及镇痛作用的影响
目的:探讨γ-羟基丁酸(GHB)受体与七氟烷(sevoflurane)催眠及镇痛作用的关系.方法:①催醒实验:小鼠ip七氟烷5.5ml·kg-1催眠后,icv给予NCS-382 0.05,0.25和1.25 mg·kg-1,检测翻正反射消失时间.②镇痛实验:小鼠分为ip七氛烷2.0ml·kg-1镇痛和生理盐水2大组,每组再分为ith人工脑脊液(aCSF),NCS-382 0.05,0.25和1.25mg·kg-1亚组,热板检测热板疼痛指数(HPPT).③扭体实验:小鼠分为sc七氟烷5.5ml·kg-1镇痛和生理盐水2大组,再分为ith给予aCSF,NCS-382 0.05,0.25和1.25mg·kg-1,亚组,检测扭体次数.结果:与七氟烷模型组相比,小鼠七氟烷催眠后,icv给予NCS-382 0.05,0.25和1.25mg·kg-1,可明显缩短翻正反射消失时间,分别提前50,52和78min(P<0.01).热板法中,ith给予NCS-382对清醒小鼠HPPT无明显影响,但能使麻醉小鼠的HPPT分别降低4.4,5.7和4.4s(P<0.01).扭体实验中,与正常对照组相比,sc给予七氟烷可使小鼠的扭体次数减少14次(P<0.01),但ith给予NCS-382对清醒及麻醉小鼠扭体次数无明显影响.结论:GHB可能是七氟烷催眠作用和杭热刺激伤害的靶位之一,但与其抗化学刺激和炎症刺激作用可能无关.
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NCS-382对异氟烷催眠镇痛作用的影响
目的 探讨NCS-382(γ-羟基丁酸受体阻断剂)对异氟烷(Iso)催眠、镇痛作用的影响.方法 催醒实验中,建立小鼠Ios催眠模型,分为对照组和不同浓度NCS-382组,观察侧脑室注射NCS-382对小鼠睡眠时间(ST)的影响;热板、扭体实验中,分清醒组和Iso镇痛组,每组再分为对照亚组和不同浓度NCS-382亚组,观察鞘内注射NCS-382对小鼠热板法痛阈(HTTP)和扭体次数的影响.结果 催醒实验中,侧脑室注射115、23、4.6、2.3、1.15 μg NCS-382能够缩短异氟烷催眠小鼠的ST(P值均＜0.01),0.92、0.184、0.036 8 μgNCS-382对异氟烷催眠小鼠的ST影响不大;热板、扭体实验中,115、4.6、0.184μg NCS-382对清醒小鼠和异氟烷镇痛小鼠的HTTP、扭体次数均无明显影响(P值均＞0.05).结论 γ-羟基丁酸受体可能是Iso催眠作用的靶位之一,而非镇痛作用的主要靶位.
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γ-羟基丁酸受体及其可能的脑内信号转导机制
γ-羟基丁酸(GHB)是脑内天然存在的内源性代谢物,有高、低亲和力两种特异性受体.GHB通过GHB受体调节GABA、Ach、5-HT、多巴胺能神经功能、NOS活性、第二信使系统和离子的传导(Cgmp、PI水平及Ca2+、K+流动),从而在生理和病理情况下发挥重要作用.GHB是一种神经递质或神经调质,已被一些实验结果所支持.但GHB受体的信号转导机制目前仍未完全阐明,有待于进一步研究.
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异氟烷遗忘作用与γ-羟基丁酸受体的关系
目的 分析异氟烷遗忘作用与γ-羟基丁酸受体(GHBAR)的关系.方法 建立异氟烷小鼠遗忘模型,跳台、避暗实验分别观察侧脑室注射不同剂量GHBAR阻断剂NCS-382对模型鼠潜伏期和错误次数的影响.结果 NCS-382对异氟烷遗忘作用的影响无统计学意义(P＞0.05).结论 GHBAR并非异氟烷遗忘作用的主要靶位.
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p-CREB在激动GHB受体对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用中的变化
目的:研究磷酸化环磷酸腺苷反应蛋白结合元件(p-CREB)在激动γ-羟基西酸(GHB)受体对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用中的变化.方法:SD大鼠随机分为Sham组,I/R组,NCS-356 160、320、640 μg/kg组.采用改良的Longa线栓法缺血2 h/再灌2 h建立I/R模型.分别于缺血前30 min和再灌前icv给予药物;5分制评分法评价大鼠神经功能.再灌24 h后免疫组织化学法测定p-CREB的表达.结果:I/R组大鼠行为学评分为3.2±0.7,明显高于Sham组(n=8,P＜0.01);NCS-356 640 μg/kg组的行为学评分则明显低于I/R组(n=8,P＜0.05).I/R组大鼠缺血区脑皮层细胞核内p-CREB的表达为96.3±6.0,明显高于Sham组(n=8,P＜0.01);NCS-356 320 μg/kg组和NCS-356640 μg/kg组脑缺血皮层细胞核内p-CREB的表达与I/R组比较明显降低(n=8,P＜0.01).结论:激动GHB受体对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,且缺血组织p-CREB的表达在此保护作用中降低.
关键词： γ-羟基丁酸受体 大鼠 脑缺血再灌注 磷酸化环磷酸腺苷反应蛋白结合元件 -
羟丁酸钠在大鼠海马脑片缺氧/复氧损伤中的保护作用机制
目的:研究羟丁酸钠(SO)在大鼠海马脑片缺氧/复氧(H/R)损伤中的保护作用,揭示SO在缺血性脑损伤中的保护作用机制.方法:采用大鼠海马脑片H/R损伤模型.设正常对照组,H/R组,SO 1、10、100 μmol/L 组,NCS-382 100 μmol/L+SO 100 μmol/L(NCS-382+SO)组、NCS-356 100 μmol/L (NCS-356)组.测定脑片孵育液中乳酸脱氢酶(LDH)释放率,γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)含量;脑片进行TTC染色计算组织损伤百分率;HE染色观察组织病理形态学变化,流式细胞仪测定细胞内钙;酶组织化学法检测一氧化氮合酶(NOS)的表达.结果:SO明显降低H/R海马脑片LDH释放率(P＜0.01),提高TTC染色的A490值,降低组织损伤百分率(P＜0.01),升高GABA/Glu比值(P＜0.01),减轻H/R所致的组织病理损伤.H/R组脑片细胞内钙荧光强度和NOS阳性神经元明显高于正常对照组(P＜0.01);SO 100 μmol/L 组、NCS-356组细胞内钙荧光强度较H/R组显著减弱(P＜0.01),NOS阳性神经元的数目明显减少(P＜0.01).用γ-羟基丁酸(GHB)受体选择性阻断剂 NCS-382后再使用SO,细胞内钙荧光强度、NOS阳性神经元的数目均接近H/R组.结论:SO对大鼠海马脑片H/R损伤有明显的保护作用,其机制可能与升高GABA/Glu比值,激动GHB受体抑制细胞内钙的增高及NOS的表达有关.
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激动γ-羟基丁酸受体对大鼠局灶性脑缺血/再灌注神经细胞凋亡的影响
目的 研究γ-羟基丁酸受体(gamma-hydroxybutyrate receptor,GHBR)对大鼠局灶性脑缺血/再灌注神经细胞凋亡的影响.方法 成年♂ SD大鼠,分为假手术组(Sham),缺血/再灌注(Isc/R),NCS-356 160、320、640μg·kg-1组(N1、N2、N3),NCS-382 640+NCS-356 640 μg·kg-1组(NCS-382+N3),尼莫地平600 μg·kg-1组(Nim).采用改良的Longa法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型.再灌24 h后,一部分动物应用免疫组织化学染色法测定大鼠缺血侧大脑皮质Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白的表达,另一部分动物应用流式细胞仪测定神经细胞凋亡率.结果 NCS-356 160、320、640μg·kg-1及Nim增加缺血神经细胞的Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值,降低Bax、Caspase-3阳性细胞数和细胞凋亡百分率,上述作用可被NCS-382拮抗.结论 激动GHBR可抑制大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤引起的细胞凋亡.
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γ-羟基丁酸受体-Gi蛋白信号通路在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用
目的:研究γ-羟基丁酸受体(GHBR)在大鼠局灶性脑缺血再灌注(I/R)损伤中的作用及其作用机制.方法:采用改良的Longa线栓法缺血2 h/再灌2h建立I/R模型.分别于缺血前30 min和再灌前经侧脑室(icv)给予药物；5分制评分法评价大鼠神经功能.再灌注24 h后,放免法测定大鼠脑缺血皮层神经元的cAMP含量；Western-blot测定蛋白激酶A(PKA)四聚体水平.结果:I/R组大鼠行为学评分明显高于假手术组；NCS-356 640组的行为学评分则明显低于I/R组.I/R组大鼠脑缺血区皮层细胞cAMP含量明显高于假手术组；NCS-356 320和NCS-356 640组大鼠的脑缺血皮层细胞cAMP的含量显著低于I/R组.I/R组大鼠脑缺血皮层细胞浆内PKA四聚体水平明显低于假手术组；NCS-356 320和NCS-356 640组的PKA四聚体的水平较I/R组升高.结论:激动GHBR对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,其机制可能与Gi蛋白、cAMP、PKA信号分子有关.
