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λ-卡拉胶寡糖对人脐静脉内皮细胞的增殖抑制作用及凋亡相关基因表达
为了探讨λ-卡拉胶寡糖(λ-carrageenan oligosaccharides,λ-CO)在体外抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖作用及其分子机制,采用MTT法检测λ-CO对HUVEC存活率的影响,通过流式细胞技术检测λ-CO对HUVEC增殖周期的影响,测定细胞凋亡率,检测用药前后活性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的变化.同时采用半定量RT-PCR方法检测凋亡相关基因mRNA的表达情况.MTT检测结果显示,λ-CO在高浓度(1 mg·mL-1)能明显抑制细胞增殖.流式细胞仪检测到λ-CO作用HUVEC后,出现早期凋亡细胞,且凋亡呈浓度和时间依赖性;对细胞增殖周期的检测结果显示,与对照组相比,λ-CO作用后G1期细胞比例减少,S期比例增加,并出现凋亡峰;活化的caspase-3比例亦随用药浓度的加大而增加.RT-PCR检测发现0.3 mg·mL-1 λ-CO作用人脐静脉内皮细胞12、24和36 h后,细胞TNFα、p53、caspase-8、caspase-3的mRNA表达上调.表明λ-CO能剂量依赖性地诱导HUVEC胞凋亡,并引起HUVEC的S期阻滞,其机制可能与促进TNFα、p53、caspase-8、caspase-3等基因的转录,使细胞内活化的caspase-3水平增加有关.
