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Avermectin B1a高效突变株的选育及发酵条件的优化
目的 筛选获得Avermectins B1a高效突变菌株.方法 通过离子注入诱变、紫外线与氯化锂复合诱变法处理阿维链霉菌出发菌株N-5-9.获得高效突变株,再对其进行发酵条件的优化,寻找适发酵培养条件.结果 筛选获得Avermectins高效突变菌株A-30-6,总效价达到6 988.2μg·ml-1,B1a含量达到79.4%,较出发菌株N-5-9的B1a组提高46.3%.结论 利用离子注入诱变、紫外线与氯化锂复合诱变方法,诱变效果显著,再进行发酵条件的优化,获得目的菌株.
关键词： Avermectins 离子注入 诱变育种 高效菌株 发酵条件优化 -
海洋Cellulophaga sp.QY201产生L-卡拉胶酶的发酵条件优化
目的:通过发酵条件优化,提高海洋Cellulophaga sp.QY201的L-卡拉胶酶产量.方法:采用正交试验分别时发酵条件、培养基配方进行优化.结果:该茵株适培养基配方为(w/v):3%NaCl、0.5%MgSO4·7H2O、0.02%CaCl2、0.01%KCl、0.002%FeSO4、0.25%CaSein、0.15%Na2HPO4,0.2%NaNO3、0.25%L-卡拉胶.佳培养条件为:培养基体积为70ml/250ml三角瓶,接种量为1%,25℃,90 r/min培养36 h.优化后酶活高可迭2.64 U/ml,较优化前提高了22倍.结论:QY201佳发酵条件的建立,为L-卡拉胶酶的大规模生产创造了条件.
关键词： 海洋Cellulophaga L-卡拉胶酶 发酵条件优化 -
海洋细菌Cellulophaga sp.QY201产内切纤维素酶发酵条件的研究
本文对海洋细菌Cellulophaga sp.QY201产内切纤维素酶的发酵条件进行了研究.研究结果表明,该菌株佳产酶的液体培养基组成为(w/v):CMCNa 0.5%,CaSein 0.3%,NaCl 3%,MgSO4·7H2O 0.3%,Na2HPO4 0.15%,NaH2PO4 0.1%,pH=7.0;佳培养条件为:500mL三角瓶装液150mL,温度为28℃,转速为100 r/min,发酵时间为36h.优化后发酵上清液的内切纤维素酶活力可达到7.85 U/mL,比优化前提高了2.5倍.该菌株产酶发酵条件的研究,为内切纤维素酶的大规模制备及应用奠定了基础.
关键词： 海洋细菌 Cellulophaga sp.QY201 内切纤维素酶 发酵条件优化 -
重组人内皮抑素工程菌发酵条件的优化
重组人内皮抑素(rhEndostatin)是人内皮抑素经过基因突变获得的新的蛋白质序列,是一种血管生成抑制剂类蛋白,具有抗肿瘤活性.实验对蛋白rhEndostatin产生菌E. coli BL21(DE3)的基本发酵条件进行了研究并用正交试验对培养基成分进行了优化,优化后的培养基组成为:蛋白胨1%,酵母粉0.5%,葡萄糖0.5%,NaC1 0.2%,Na2 HPO4·12H2O 1.5%,KH2PO4 0.2%,(NH4)2SO4 0.2%,MgSO4·7H2O 0.02%,VB15mg/L,VB2 1 mg/L,微量元素:CoCl2·6H2O 5 mg/L,MnCl2·4 H2O,H3BO3,Na2MoO4·2H2O,AICI3·6H2O,Ferric citrate均20 mg/L.优化后的培养基在发酵罐发酵,湿菌重达到45 g/L以上,目的蛋白产量达324 mg/L,为rhEndostatin的进一步研究开发打下了基础.
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高产胞外硫酸软骨素酶菌株的筛选、鉴定及发酵条件优化
目的 对从青岛胶东海岸潮间带淤泥中分离筛选高产胞外硫酸软骨素酶的菌株进行鉴定和发酵条件优化.方法 通过平板快速筛选法和摇瓶复筛,筛选到1株高产胞外硫酸软骨素裂解酶的菌株C26,根据形态学和16S rRNA基因序列分析对其鉴定,并采用单因素实验和响应面实验对发酵条件进行优化.结果 根据形态学和16S rRNA基因序列分析,鉴定菌株C26为不动杆菌属(Acinetobacter sp.),命名为Acinetobacter sp.C26.优化适发酵条件为:硫酸软骨素15 g/L,酵母粉7.69 g/L,培养温度23℃,在适条件下硫酸软骨素酶的活力可达11.96 U/mL,是优化前的4.82倍.结论 本研究筛选得到的菌株Acinetobacter sp.C26产酶活力高,发酵周期短,在生物化工及医药方面具有潜在应用价值.
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产硫酸软骨素酶菌株的筛选、鉴定及发酵条件优化
目的 从土壤中分离筛选产硫酸软骨素酶活性较高的菌株,对目标菌株进行鉴定及发酵条件优化,分析其酶解产物.方法 通过初筛及复筛筛选出1株高产硫酸软骨素酶菌株LHYM225,经形态学观察及16SrDNA序列测定并进行系统发育分析对其进行鉴定.利用单因素实验及正交实验对发酵培养基组分及发酵条件进行了优化.通过质谱法检测该酶的酶解产物.结论 16SrDNA序列分析表明菌株LHYM225与节杆菌属菌株(Arthrobacter)亲缘关系近,将其初步鉴定为节杆菌属菌株(Arthrobacter sp.),该菌株的佳发酵培养基:硫酸软骨素0.8％,KH2 PO40.02％,酵母浸粉0.6％,MgSO4·7H2O 0.8％;佳发酵条件:25℃,初始pH为6,接种量1.5％,搅拌转速150 r/min,通气培养72 h,酶活力单位达3.981 U/mL,该酶水解硫酸软骨素产生二糖和单糖.
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重组人表皮生长因子融合蛋白发酵条件优化
目的:优化GST-hEGF融合蛋白工程菌pGEX-EGF/BL21STAR(DE3)pLysS30L发酵罐培养及表达条件.方法:上罐发酵采用M9-YT-Glu发酵培养基,IPTG诱导;通过还原SDS-PAGE法测定目标蛋白表达量、落计数法测定质粒丢失率,以确定表达温度、时间以及IPTG添加量等参数.结果与讨论:hEGF重组菌诱导温度为30℃、加入终浓度0.2M IPTG诱导,维持诱导时间4hr,目的蛋白表达量占菌体蛋白总量的30％左右,为后续rEGF融合蛋白纯化奠定了基础.
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毕赤酵母表达Q8008发酵条件的优化研究
目的：对表达巴斯德毕赤酵母的发酵条件进行优化，确定佳的发酵控制条件，以获得重组textilinin‐1（Q8008）高表达量。方法通过多因素正交实验确定 Q8008发酵培养的适发酵条件。结果表达温度在22℃，pH 值为7．0，加入甲醇量为5 g／L 时为优发酵条件，诱导表达时间为84～108 h。结论优化巴斯德毕赤酵母的发酵条件，可提高 Q8008表达量，为开发抗纤溶酶止血药应用于临床具有重要意义。
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响应面法优化易变链霉菌Streptomyces mutabilis TRM45540产放线菌素D的发酵条件
目的 优化易变链霉菌Streptomyces mutabilis TRM 45540产放线菌素D的发酵条件,以期提高放线菌素D的产量.方法 在单因素试验的基础上通过Plackett-Burman试验设计、陡爬坡试验以及中心组合试验优化.结果 适培养基为燕麦片30.0 g/L,大豆粉15.0g/L,氯化钠19.0g/L,磷酸氢二钾1.5g/L,七水硫酸镁2.5g/L,碳酸钙1.0g/L;在摇床转速180r/min,初始pH 7.0,装液量150/500mL,接种量4％,温度28℃条件下发酵7d,TRM45540菌株产放线菌素D的产量为679.2mg/L.结论 优化后产量比优化前提高了6.5倍,用该菌株生产放线菌素D具有发酵原料经济、发酵时间短、收率高和杂质少的优点,S.mutabilis TRM45540可以作为生产放线菌素D的候选菌株.
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南极真菌青霉(Penicillium sp.)S-3-88摇瓶发酵条件的初步优化
目的 对南极来源的真菌青霉Penicillium sp.S-3-88进行细胞毒活性筛选及发酵条件优化.方法 对菌株进行小量发酵及代谢产物提取,检测其粗提物对6种肿瘤细胞株的抑制活性;通过对培养基、培养温度、摇床转速和发酵时间的筛选,以细胞毒活性和次级代谢产物产量为指标对该菌株的培养条件进行初步优化.结果 Penicillium sp.S-3-88对6种肿瘤细胞株具有不同程度的抑制活性,其中对MCF-7和SGC-7901细胞的抑制率高,分别达到78.79％和74.66％(初提物浓度为50μg/mL).初步优化后,优选的发酵条件为:PDB培养基,温度20℃,发酵时间14d,转速180r/min.在此条件下进行发酵,Penicillium sp.S-3-88的次级代谢产物量和细胞毒活性分别比优化前高203.57％、48.32％(A549)和44.92％(SW-1990).结论 获得了一株具有强细胞毒活性的真菌Penicillium sp.S-3-88,优化了该菌株的发酵条件,有助于后期的活性次级代谢产物的分离纯化.
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四羟基环孢菌素衍生物转化菌株发酵条件优化
目的 对四羟基环孢菌素衍生物([γ-HyMeLeu4]CyA)转化菌Nonomuraea dietziae的发酵条件进行优化.方法 采用均匀设计对发酵培养基进行优化,考察糊精、黄豆饼粉、葡萄糖、酵母粉和蛋白胨对发酵单位的影响,同时对底物环孢菌素A的添加时间、添加量和发酵培养时间进行了摸索.结果 得到了优培养基配方为:糊精1.2％、葡萄糖3.0％、酵母粉0.9％、蛋白胨0.5％、黄豆饼粉1.5％;底物添加佳时间是36h,添加量是400μg/mL,佳放瓶时间是96h.在优化后的培养条件下,[γ-HyMeLeu4]CyA的产量提高了63％左右.结论 优化后的发酵条件更适合转化菌的生长,有利于目的产物产量的提高,该发酵条件的优化为[γ-HyMeLeu4]CyA的工业化生产奠定了基础.
关键词： [γ-HyMeLeu4]CyA 发酵条件优化 均匀设计 -
纳他霉素产生菌的诱变育种及其发酵条件的优化
目的 以纳塔尔链霉菌(Streptomyces natalensis)SIPI-NHF-09为出发菌株进行诱变选育和培养条件优化,以提高其纳他霉素的产量.方法 采用紫外和微波结合对纳塔尔链霉菌SIPI-NHF-09进行诱变选育,并对获得的高产突变株SIPI-UW-10-22的发酵条件进行了初步优化.结果 经过连续3轮的紫外和微波诱变,获得高产突变株SIPI-UW-10-22,其纳他霉素(Natamycin)产量达到3.15g/L,是出发菌株的3.5倍,且该菌株经多次传代,遗传性能稳定.对SIPI-UW-10-22发酵条件优化后获得其发酵条件为:以5.5％玉米淀粉加0.5％葡萄糖为碳源,2％黄豆饼粉加1％酵母粉为氮源,种龄46h,初始pH7.0,接种量8％,摇床转速220r/min,28℃培养126h.此条件下,纳他霉素的产量达到4.07g/L,较优化前提高了1.29倍.结论 紫外与微波诱变相结合的方法简便有效,所获得高产菌株遗传性状稳定.
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含双噁唑环的大环双内酯化合物FW-04-806发酵条件优化
目的 对链霉菌FIM-04-806的次级代谢产物,含双噁唑环的大环双内酯化合物FW-04-806进行发酵条件研究.方法采用单因素试验进行培养基优化,探讨装液量、初始pH值等发酵参数的影响,同时逐级放大进行中试验证.结果 确定了佳培养条件:种子培养基为葡萄糖3％,蔗糖3％,玉米浆粉2％,CaCO30.75％,pH7.5;发酵培养基为可溶性淀粉3％,葡萄糖2％,黄豆粉1％,玉米浆粉2％,CaCO30.7％,pH7.5,接种量10％.优化后的摇瓶效价较初始水平提高了7倍以上,并在100L自动发酵罐及1.5吨发酵罐上得到验证.结论FW-04-806优化的发酵条件为其工业化生产奠定了基础.
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人参内生菌B69菌株抑菌活性物质产生条件的优化
目的 探索人参内生菌B69菌株对根腐病的抑制作用,优化人参病害拮抗菌株B69的发酵条件,提高发酵液的活菌含量和抗菌活性.方法 以B69发酵液对病原菌根腐病的抑制作用为活性指标,采用正交试验和单因素试验方法对菌株的适发酵培养基成分及发酵条件进行优化.结果 在佳发酵培养基和培养条件下,经检测发酵液的活菌数含量为8.25×108 cfu/mL,较优化前的活菌含量1.82×108cfu/mL增幅达到了显著差异(P<0.05),此含量达到了农业部微生物肥料的技术标准(有效活菌数≥2.0亿/mL).发酵液对人参根腐病的抑菌圈也由优化前的18mm增加到35mm.结论 佳培养基配方为蔗糖2.0％、淀粉1.0％、牛肉浸膏0.5％、酵母粉0.5％、蛋白胨0.2％和NaCl0.5％;初始pH7.0;适装液量为100 m L/250 m L;培养条件为35℃、170r/min振荡培养;接种量5％,发酵时间为48h.
