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甘草内生菌的鉴定及总黄酮 总皂苷的含量测定
目的 对甘草内生菌进行形态学及分子生物学鉴定, 并建立甘草内生菌代谢产物中总黄酮和总皂苷含量测定方法, 对其含量进行测定.方法 根据甘草内生菌的菌落、菌体形态进行初步鉴定, 进一步采用16SrDNA、ITS测序进行分子生物学鉴定.采用紫外分光光度法, 以甘草苷、甘草酸铵为对照品, 在波长334、250nm处测定, 计算甘草内生菌代谢产物中总黄酮和总皂苷的含量.结果 16株内生菌中, 14株为内生细菌, 2株为内生真菌.分子生物学鉴定结果表明, 13株甘草内生细菌属于芽孢杆菌属, 1株内生细菌属于乳杆菌目气球菌科, 2株内生真菌属于曲霉菌科曲霉属.16株甘草内生菌代谢物中总黄酮和总皂苷含量存在差异, 总黄酮含量在1.13～2.24mg·g-1, 总皂苷含量在50.15～71.34mg·g-1.结论 紫外分光光度法测定甘草内生菌代谢产物中总黄酮、总皂苷含量的方法稳定、重复性好、可靠性高.
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甘草内生菌的鉴定与药理作用和活性成分研究进展
甘草内生菌在演变过程中可发生基因重组,获得与宿主相同或相似的药理作用及活性成分.对甘草内生菌的研究有利用解决甘草资源匮乏的现状,为发现甘草药用资源提供新思路.本文从多样性、鉴定、药理作用、活性成分等方面综述了甘草内生菌相关研究进展.
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甘草内生菌发酵物对痰浊阻肺大鼠炎症相关因子、水通道蛋白的影响
目的:筛选具有祛痰作用的甘草内生菌菌株发酵物.方法:Wistar大鼠90只,雌雄各半,随机分为9组(n=10):即空白组、模型组、阳性对照组、甘草水煎液组、甘草内生菌发酵物5组(JTZB005、JTZB006、JTZB043、JTZB060、JTZB063).采用SO2烟薰30 min、低温兼冷风刺激10 min诱导痰浊阻肺大鼠模型,每天2次,连续10 d.造模10 d后,空白组、模型组给予生理盐水10 ml/kg灌胃,阳性组给予复方贝母氯化铵片0.08 g/ks灌胃,水煎液组给予甘草水煎液0.95 g/kg,内生菌各组给予甘草内生菌发酵液蒸干粉末0.95 g/kg,每天灌胃给药1次,连续7d,观察大鼠一般情况.第7天,灌胃给药2h后,断颈处死大鼠,取右肺上叶,4％戊二醛固定,HE染色切片,光镜下观察肺组织病理形态学变化,免疫组化染色切片,检测水通道蛋白1、5(AQP1、AQP5)的分布及表达.硝酸还原酶法测定肺组织一氧化氮(NO)含量,ELISA检测大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的含量及环氧化酶-2(COX-2)的浓度.结果:与空白组比较,模型组大鼠肺组织中NO、TNF-α、ICAM-1的含量及COX-2的浓度显著升高,而水通道蛋白AQP1、AQP5的表达显著降低(P＜0.01).与模型组比较,水煎液组、JTZB005、JTZB006、JTZB063组肺组织NO、TNF-α、ICAM-1的含量及COX-2的浓度均显著降低,AQP1、AQP5的表达水平显著升高(P＜0.05,P＜0.01).结论:筛选出JTZB005、JTZB006、JTZB063等3株具有祛痰作用的甘草内生菌有效菌株.
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甘草内生菌对痰浊阻肺模型大鼠炎症因子、Na+-K+-ATP酶、AQP1、AQP5表达的影响
目的:比较甘草内生菌与宿主甘草对痰浊阻肺模型大鼠的祛痰作用,筛选甘草内生菌有效菌株.方法:将Wistar大鼠70只随机分为7组,即正常对照组、模型组、复方贝母氯化铵阳性对照组、野生甘草水煎液组及甘草内生菌各组(JTYF023、JTYB006、JTYB029).采用502烟薰、低温及冷风刺激诱导痰浊阻肺大鼠模型.造模10 d后,给予各组大鼠相应药物灌胃,连续7d.进行证候学观察,检测酚红排泌量、肺功能指标4项、炎症相关因子(TNF-α、ICAM-1、COX-2)的含量、肺组织Na+-K+-ATP酶活性,并以免疫组化法测定水通道蛋白AQP1、AQP5的分布及表达,探讨药物的祛痰机制.结果:与正常对照组比较,模型组大鼠酚红排泌量增加,肺功能4项指标显著降低,炎症各相关因子的含量显著升高,Na+-K+-ATP酶活性及水通道蛋白AQP1、AQP5表达显著降低(P＜0.01).与模型组比较,水煎液组、JTYB029组酚红排泌量显著降低,肺功能4项指标显著升高,炎症各相关因子的含量显著降低,Na+-K+-ATP酶活性及水通道蛋白AQP1、AQP5表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01).结论:筛选出1株(JTYB029)与野生甘草水煎液祛痰作用相当的内生菌.
关键词： 甘草内生菌 祛痰 炎症因子 Na+-K+-ATP酶 水通道蛋白
