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黄曲霉毒素B1对肝癌细胞株SMMC-7721的作用研究
目的 通过用黄曲霉毒素B1(AFB1)处理人肝癌细胞株SMMC-7721研究AFB1对SMMC-7721细胞生长的影响.方法 ①首先应用96孔板培养细胞,选择适宜的细胞接种密度进行实验.②应用不同浓度的黄曲霉毒素B1 20g/ml、10g/ml、5g/ml、2g/ml、1.0g/ml、0.1g/ml、0.01g/ml处理人肝癌细胞株SMMC-7721,MTT法绘制细胞生长曲线,观察黄曲霉毒素B1对肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响.结果 不同浓度的AFB1对肝癌细胞株SMMC-7721的影响不同,AFB120.0g/ml、AFB110.0g/ml、AFB15.0g/ml表现为细胞毒性,呈浓度依赖性;AFB11.0g/ml、AFB10.1s/ml、AFB10.01g/ml对肝癌细胞株SMMC-7721的增殖活性具有促进作用,以AFB11.0ug/ml浓度显著,AFB10.1g/ml、AFB10.01g/ml作用渐减弱.结论 黄曲霉毒素B11.0g/ml具有增强人肝癌细胞株SMMC-7721增殖活性的作用.
关键词： 人肝癌细胞株SMMC-7721 黄曲霉毒素B. -
镉对人肝癌细胞增殖及凋亡影响
目的 研究镉对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响及其作用机制.方法 体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721分别以0、40、80、160 μmol/L的CdCl2处理0～48 h,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞相对存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,分光光度法检测半胱天冬酶Caspase-3酶活性的变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(western blot)法测Caspase-3 mRNA和蛋白表达的变化.结果 随着镉处理浓度的增加,氯化镉对细胞活力的抑制作用明显增强,40、80、160 μmol/L氯化镉处理SMMC-7721细胞,其抑制率分别为33.94％、48.04％和68.54％,均明显高于0 μmol/L氯化镉处理组,差异均有统计学意义(P＜0.01);40、80、160 μmol/L镉处理组细胞的凋亡百分率分别为(25.77±4.66)％、(34.97±9.25)％和(55.14±5.67)％,与0 μmol/L镉处理组比较明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.01);镉处理SMMC-7721细胞24和48 h,Caspase-3相对酶活性均随着镉浓度的增加而明显增强;40 μmol/L镉处理SMMC-7721细胞,12、24和48 h可明显上调细胞中Caspase-3基因及蛋白的表达,Caspase-3基因mRNA表达水平分别为对照组的4.1、3.7和3.9倍,Caspase-3蛋白表达分别为对照组的5.8、6.0和7.2倍.结论 镉能明显抑制人肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,Caspase-3基因在镉诱导SMMC-7721细胞凋亡过程中起着重要的作用.
关键词： 镉 人肝癌细胞株SMMC-7721 凋亡 基因表达 -
氯化锌和N-乙酰半胱氨酸对镉诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响研究
目的 研究氯化锌( ZnCl2)和N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)对氯化镉(CdC12)致人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响.方法 体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721分别以O、20、40、80、160和320 μmol/L的CdCl2处理3、6、12、24、48 h,ZnCl2预处理和NAC预处理组在CdCl2处理前分别以100 μmol/L的ZnCl2和5 mmol/L的NAC预处理24 h,应用MTT法检测细胞相对存活率,流式细胞仪Annexin V-PI双标法检测细胞凋亡百分率.结果 随着镉处理浓度的增高和时间的延长,SMMC-7721细胞存活率逐渐降低；SMMC-7721细胞凋亡率随着CdCl2浓度的增加而逐渐增加,40 μmol/L及以上镉处理组与对照组相比,凋亡率显著增加,P＜0.01；与相同剂量的单纯Cd处理组相比,Zn预处理组细胞凋亡率差异无统计学意义,P＞0.05,与40、80 μmol/L镉处理组相比,相同剂量的NAC预处理组细胞凋亡百分率显著下降,P＜0.05,其余镉处理剂量的NAC预处理组细胞凋亡百分率差异无统计学意义,P＞0.05.结论 一定剂量的ZnCl2预处理不能显著降低镉诱导的SMMC-7721细胞凋亡,而NAC预处理可在一定程度上显著降低镉诱导的肝癌细胞凋亡百分率.
关键词： 氯化镉 氯化锌 N-乙酰半胱氨酸 人肝癌细胞株SMMC-7721 凋亡 -
青龙衣提取物对人肝癌细胞株抑制作用的实验研究
目的：通过青龙衣提取物对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用，筛选出其抑瘤活性成分并探讨其机制。方法：青龙衣抑瘤活性成分胡桃醌与氟尿嘧啶、奥沙利铂、亚砷酸注射液分别作用于人肝癌细胞株SMMC-7721，分别于24h、48h、72h收集细胞，采用MTT法比较胡桃醌与其他组药物的抑瘤率，借助电镜观察胡桃醌作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后细胞微细结构的形态变化，于激光共聚焦显微镜下检测细胞内Ca2＋浓度变化。结果：MTT结果显示胡桃醌抑瘤具有剂量依赖性；0．01mg／mL剂量24、48 hMTT结果显示胡桃醌的抑瘤强度高于亚砷酸注射液，与氟尿嘧啶相当，低于奥沙利铂；电镜结果显示肝癌细胞染色质凝聚，核固缩，游离核糖体减少，出现大溶酶体颗粒，线粒体数量增多形成髓样变，部分细胞坏死；激光共聚焦显微镜检测结果显示胡桃醌作用于肝癌细胞SMMC-7721后细胞内Ca2＋浓度增加。结论：青龙衣提取物抑瘤活性成分为化合物胡桃醌；胡桃醌对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用可能是直接杀伤肿瘤细胞。
关键词： 青龙衣/胡桃醌 人肝癌细胞株SMMC-7721 抑瘤率 -
秦皮乙素的制备及对人肝癌细胞SMMC-7721体外增殖的影响
目的 制备秦皮乙素并探讨其对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响.方法 采用聚酰胺柱层析法分离纯化秦皮乙素,采用薄层色谱法进行定性鉴别,高效液相色谱法进行纯度检测.采用MTT比色法观察秦皮乙素对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响.采用流式细胞仪分析秦皮乙素对SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响.结果 高效液相色谱法检测秦皮乙素的纯度为95%.MTT结果显示,IC50为2.24 mmol·L-1,并呈现时间-剂量依赖关系.流式细胞仪(FCM)检测表明,G2/M期细胞的比例减少,S期细胞的比例增加,与对照组相比差异显著(P<0.05).结论 秦皮乙素可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖,阻滞于S期,诱导肝癌细胞凋亡.
关键词： 秦皮乙素 人肝癌细胞株SMMC-7721 细胞周期 细胞凋亡 -
美洲大蠊提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及作用机制
目的 探讨美洲大蠊提取物对人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡的影响并探讨其相关机制.方法 取对数生长期状态良好的SMMC-7721细胞分为三组,观察组常规培养24h后加入美洲大蠊提取物,使终浓度分别为300、100、33.3 μg/mL,顺铂组加入顺铂20 μg/mL作用细胞48 h,对照组不做任何处理.采用MTT比色法检测细胞增殖抑制率；采用流式细胞仪分析细胞凋亡率；JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位变化；分光光度法检测Caspase-3活性变化.结果 观察组和顺铂组细胞抑制率明显高于对照组,IC50为100 μg/mL,并呈现时间一剂量依赖关系(P＜0.05)；观察组和顺铂组细胞凋亡率明显高于对照组,呈现剂量依赖性(P＜0.05).凋亡过程中线粒体膜电位下降,Caspase-3活性升高(P＜0.05).结论 美洲大蠊提取物具有抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖并诱导其凋亡作用,线粒体途径可能是其诱导肝癌细胞凋亡的主要机制之一.
关键词： 美洲大蠊 人肝癌细胞株SMMC-7721 细胞凋亡 -
白茅根水提物对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响
目的 研究白茅根水提物对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖抑制率、细胞周期及细胞凋亡的影响.方法 采用MTT法研究白茅根水提物对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制率及抑制率与时间剂量关系;并通过PI染色法和Annexin V-EGFP/PI双染法研究白茅根水提物作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后细胞周期DNA含量变化及对细胞凋亡率的影响.结果 不同浓度的白茅根水提物处理肝癌SMMC-7721细胞24,48,72,96 h后,均呈现出显著的细胞增殖抑制作用,抑制作用具有明显的时间-剂量-效应关系,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞周期与细胞凋亡实验结果显示不同浓度的白茅根水提物处理肝癌SMMC-7721细胞46 h后可显著增加肝癌细胞凋亡率,差异有统计学意义(P ＜0.001),作用36 h后,可增加S期比例同时降低G2/M期细胞比例,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 白茅根水提物对人肝癌细胞株SMMC-7721具有明显的增殖抑制作用并可诱导其凋亡,该作用是通过抑制C2/M期细胞比例,将细胞周期阻滞在S期实现的.
关键词： 白茅根水提物 MTT法 流式细胞技术 人肝癌细胞株SMMC-7721 -
四味肝泰软胶囊对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期及凋亡影响的初步研究
目的:初步探讨不同浓度四味肝泰软胶囊对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期及凋亡的影响.方法:采用流式细胞仪PI染色法和Annexin V-EGFP/PI双染法研究不同浓度四味肝泰软胶囊作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后细胞周期DNA含量变化及对细胞凋亡率的影响.结果:各浓度四味肝泰软胶囊均可以调节G1/S转换,使肿瘤细胞发生S期阻滞,造成S期细胞堆积,阻断细胞的DNA合成和复制,阻滞肿瘤细胞进入G2/M期,从而起到抑制肿瘤细胞的增殖,诱导SMMC-7721细胞凋亡,且这种诱导效应具有明显的时间-剂量-效应关系.结论:四味肝泰软胶囊对人肝癌细胞株SMMC-7721具有明显的抑制作用,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞DNA的合成和诱导细胞凋亡有关.
关键词： 四味肝泰软胶囊 人肝癌细胞株SMMC-7721 细胞周期 原发性肝癌 -
水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721的影响
目的:研究水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响.方法:采用MTT法研究水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用及时效量效关系；并通过PI染色法和Annexin V-EGFP/PI双染法观察水红花子黄酮类成分作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后细胞周期DNA含量变化及细胞凋亡率.结果:水红花子黄酮类成分能调节SMMC-7721人肝癌细胞株Gl/S转换,使肿瘤细胞发生S期阻滞,造成S期细胞堆积,阻断细胞的DNA合成和复制,阻滞肿瘤细胞进入G2/M期,从而抑制肿瘤细胞的增殖,诱导SMMC-7721细胞凋亡,且具有明显的时效及量效关系.结论:水红花子黄酮类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721具有明显的抑制作用,且抑制作用和时间剂量成线性关系,其作用机制为抑制肿瘤细胞的增殖和诱导该细胞的凋亡.
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黄芩苷对肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤生长抑制作用及其机制
目的:以裸鼠人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤动物模型为研究对象,观察黄芩苷对移植瘤生长能力的影响,初步探讨黄芩苷对Cyclin D1和Caspase-3表达的影响.方法:BALB/c裸鼠右前腋部皮下接种人肝癌SMMC-7721细胞5×106个,建立人肝癌实体瘤模型.将20只成瘤裸小鼠随机分为空白对照组与黄芩苷组,每组10只.对照组腹腔注射生理盐水10ml/kg,黄芩苷组腹腔注射黄芩苷注射液100mg/kg,每2d 给药1次,间断给药8次后称体重、处死,瘤块离体称重,计算抑瘤率;用免疫组织化学方法检测实验组和对照组移植瘤中CyclinD1和Caspase-3的表达水平.结果:黄芩苷组100mg/kg对裸鼠肝癌SMMC-7721实体瘤的抑制率为30.8%,两组间肝脏与肾脏指数比较,P均大于0.05.黄芩苷处理组凋亡指数为(13.6±1.1)%,高于对照组的(2.2±1.9)%,(P<0.01).黄芩苷能够抑制CyclinD1表达及上调Caspase-3表达,(均P<0.05).结论:黄芩苷对人肝癌 SMMC-7721的裸鼠皮下移植瘤具有生长抑制作用,其抑瘤作用可能通过下调CyclinD1表达和上调Caspase-3表达来达到抑制瘤体增殖并有促进其凋亡的作用.在保护免疫器官功能方面,黄芩苷无明显优势.黄芩苷可能成为治疗原发性肝癌的有效手段之一,但是其在保护免疫器官方面还需要进一步研究.
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黄芩素诱导人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡作用的研究
目的:研究12-脂氧合酶(12-lipoxygenase,12-LOX)在人肝癌细胞株SMMC-7721中的表达,以及选择性12-LOX抑制剂黄芩素对人肝癌细胞SMMC-7721生长、凋亡的影响.方法:采用免疫细胞化学染色及RT-PCR检测12-LOX的蛋白质和mRNA在SMMC-7721中的表达.应用MTT、流式细胞术及TUNEL检测细胞生长及凋亡.蛋白印迹法检测分析Caspase-3,Bcl-2,Bax,phospho-ERK1/2,ERK1/2和β-actin蛋白质的表达.结果:免疫细胞化学技术显示12-LOX蛋白表达于SMMC-7721细胞质.RT-PCR检测到黄芩素呈浓度-时间依赖性地抑制12-LOX mRNA表达.采用黄芩素小同浓度或不同时间段干预细胞SMMC-7721,MTT法检测细胞增殖呈剂量、时问依赖性的下降.原位末端转移酶标记技术及流式细胞仪分析证实12-LOX抑制剂诱导细胞凋亡.蛋白印迹法检测显示,黄芩素干预后,Bcl-2蛋白表达明显下降和Bax蛋白轻微上升,细胞凋亡蛋白酶-3活性水平与黄芩素浓度正相关,黄芩素对细胞凋亡相关蛋白的影响被12 (S)-HETE逆转,12(5)-HETE可能激活ERK1/2磷酸化.结论:人肝癌细胞株SMMC-7721存在12-LOX的表达,12-LOX抑制剂黄芩素可抑制细胞生长和诱导细胞凋亡.
关键词： 人肝癌细胞株SMMC-7721 12-脂氧合酶 细胞凋亡
