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Reis-Bücklers角膜营养不良家系的TGFBl基因序列分析
目的：应用基因测序的方法，对一个常染色体显性遗传的角膜营养不良家系进行基因筛查，确定该家系的基因缺陷。方法收集一个中国人Reis-Bücklers地图状角膜营养不良家系，共4代30人，其中患者12人。对所有家系患病成员及正常同胞进行详细的临床检查及TGFBI基因编码序列分析，包括TGFBI基因的全部17个外显子，5＇及3＇端与外显子拼接的内含子序列。结果对TGFBI基因直接测序显示家系中所有患者在TGFBI基因的第4外显子存在杂合性突变，mRNA第371位碱基出现G→T的杂合性碱基改变，导致了野生型基因编码的Arg被Leu替代，使第124编码子发生了R124L的突变，并且该突变与疾病表型共分离。结论经序列分析确定该家系角膜营养不良患者均存在TGFBI基因第4外显子的R124L突变。
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卵巢上皮性癌TGFBI基因启动子甲基化与CyclinD1蛋白表达的关系
目的:研究TGFBI基因启动子甲基化与CyelinD1蛋白表达在卵巢上皮性癌组织中关系,探讨TGFBI基因启动子甲基化在卵巢上皮性癌形成过程中的影响及意义.方法:用甲基化PCR的方法对20例正常卵巢上皮性组织(A组),20例良性卵巢上皮性肿瘤组织(B组),30例卵巢上皮性癌组织(C组)中TGFBI基因启动子甲基化进行检测,用免疫组化SP方法检测上述标本中CyclinDl蛋白的表达的情况.结果:1)C组TGFBI基因启动子甲基化频率高于B组及A组(P<0.05);2)CyclinD1蛋白在卵巢上皮组织中的表达为:C组>B组>A组,各组之间差异均有统计学意义(P<0.016 7);3)卵巢上皮性癌组织中CyclinD1蛋白表达增高与TGFBI基因启动子发生甲基化有关(r=0.505,P<0.05).结论:TGFBI基因DNA启动子发生甲基化可能上调CyclinD1蛋白的表达,刺激细胞异常增殖.该机制可能参与卵巢上皮性癌的发生发展.
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角膜营养不良患者TGFBI基因突变特点及基因型-表型关系
目的 分析TGFBI基因相关角膜营养不良患者的基因突变特点及基因型-表型关系.方法 系列病例研究.应用聚合酶链式反应(PCR)技术对63例角膜营养不良患者基因组DNA进行TGFBI基因扩增并直接测序,所有患者进行详细的眼科检查,包括佳矫正视力(BCVA)、眼前节检查,部分患者行角膜激光共聚焦显微镜(HRT)检查.结果 63例患者中有48例检测到9种TGFBI基因杂合错义突变,包括8种已报道过的致病突变[c.371G＞A (p.R124H)、c.370C ＞T(p.R124C)、c.371G＞T(p.R124L)、c.1663C＞T(p.R555W)、c.1664G＞A (p.R555Q)、c.1514T＞A(p.V505D)、c.1859C＞A (p.A620D)、c.1877A＞G(p.H626R)]和1种新突变[c.1694T＞A (p.L565H)],突变主要分布于第4号外显子,突变频次为37次,其中携带c.371G＞A (p.R 124H)突变的Avellino角膜营养不良患者所占比例大(28/48).48例阳性患者平均发病年龄为(31.3±16.8)岁,裂隙灯显微镜检查患者双眼可见角膜上皮至基质层均混浊,不同突变导致患者角膜沉积物形态各异.结论 本研究新发现的c.1694T＞A (p.L565H)突变,拓展了角膜营养不良TGFBI基因突变谱.并再次证实371G＞A(p.R124H)是亚洲TGFBI基因突变相关角膜营养不良常见的突变形式.角膜营养不良患者存在表型异质性,角膜沉积物特征与其携带的基因突变明显相关,以分子遗传学为基础的角膜营养不良分类方法可以提高临床诊断的准确性.
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格子状角膜营养不良一家系的 TGFBI基因突变研究
目的：对我国鄂西北地区一格子状角膜营养不良家系进行研究，探讨这一格子状角膜营养不良类型与TGFBI 基因突变的关系。方法选取该家系共18例，包括第三代患者及配偶13例，第四代患者2例及无临床症状者3例。收集该家系所有研究对象外周血，提取基因组DNA，PCR扩增TGFBI基因4、11、12、14号外显子片段并进行直接测序，证实其突变位点。以家系内无近亲关系配偶5人和1名健康者为阴性对照。结果该家系基本符合常染色体显性遗传模式的特征，为LCD I /IIIA型。 TGFBI基因编码区进行基因直接测序，发现10例患者和2例无症状者携带者共同突变点为H626R。结论该家系为格子状角膜营养不良LCD I /IIIA型家系，该家系角膜混浊的直接原因是TGFBI基因H626R突变。
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Avellino型角膜营养不良一家系基因研究
目的 对Avellino角膜营养不良一家系进行分子遗传学分析及分类,了解其转化生长因子β诱导(TGFBI)基因突变的类型.方法 收集 1个Avellino角膜营养不良家系中的4例患者,2例表型正常成员和100例正常对照者的外周血5 ml,提取DNA后利用TGFBI基因所有17个外显子的特异性引物,进行聚合酶链反应(PCR)扩增,并对PCR产物行DNA测序分析.结果 该家系4例患者的TGFBI基因第4号外显子存在CGC>CAC(R124H)杂合突变,而家系表现正常成员无此基因位点突变.同时4例患病家庭成员存在同义单核苷酸多态性 (SNP):第 11外显子杂合性的CTC>CTT(L472L),第 12外显子杂合性的 TTT>TTC (F540F) 结论 Avellino角膜营养不良家系存在TGFBI基因突变,为R124H杂合突变类型.
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颗粒状角膜营养不良II型家系的TGFBI基因筛查
目的：对颗粒状角膜营养不良II型（GCD2）的家系进行TGFBI基因筛查，寻找患病原因。方法对GCD2家系患者TGFBI基因的所有外显子进行突变检测，以GCD2家系中的健康成员和100例无亲缘关系的正常志愿者DNA样本作为对照。结果 GCD2家系所有患者TGFBI基因4号外显子的第370位碱基发生纯合或杂合的G＞A突变，导致TGFBI基因编码的蛋白质的第124位氨基酸R变为H。结论错义纯合和杂合R124H突变是导致GCD2家系角膜营养不良不同临床表型的主要病因。
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一个Reis-Bücklers角膜营养不良家系的TGFBI基因突变分析
目的 分析一个Reis-Bücklers角膜营养不良家系的临床特征及其TGFBI基因突变类型.方法 收集该家系4代53名成员(其中患者9例)外周血,提取基因组DNA,应用聚合酶链反应和DNA直接测序技术,对TGFBI基因全部17个外显子及外显子内含子拼接部,进行基因变异的检测及分析.并对所有家系成员进行详细的临床检查.结果 家系中所有患者成员TGFBI基因第4外显子存在R124L杂合性突变,正常成员未发现此突变,突变与疾病表型共分离.该家系呈现常染色体显性遗传,结合患者的临床特征,确诊为典型的地图型Reis-Bücklers角膜营养不良.结论 该Reis-Bücklers角膜营养不良家系存在TGFBI突变,为R124L杂合性突变.基因分析为疾病明确诊断提供了可靠依据.
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中国人圆锥角膜患者的TGFBI基因编码区点突变及多态性的检测和分析
目的 检测中国人圆锥角膜患者TGFBI基因编码区点突变及单核苷酸多态性特点,探讨TGFBI基因与圆锥角膜的关系.方法 应用聚合酶链反应-单链构象多态性和DNA直接测序技术,对30例圆锥角膜患者、30名正常对照外周血TGFBI基因编码区的17个外显子,进行了点突变和单核苷酸多态性的检测和分析.结果 共发现2种TGFBI基因碱基变异,位于第12外显子,均为杂合性.1例圆锥角膜患者在TGFBI基因密码子535位点发生GGA→TGA置换,引起甘氨酸突变为终止密码(G535X),在对照组中未检出此突变;2例圆锥角膜患者和1名健康对照者在TGFBI基因密码子540位点发生TTT→TTC置换,不引起编码的苯丙氨酸改变(F540F),系TGFBI基因的多态性改变.结论 中国圆锥角膜人群存在着TGFBI基因变异,提示TGFBI基因在圆锥角膜的发病中可能起一定的作用.
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一个非典型Reis-Bückler角膜营养不良家系的TGFBI基因突变研究
目的 通过基因突变分析,确定一个非典型Reis-Bückler角膜营养不良家系突变基因型和表现型之间的关系.方法 采集家系中的4例患者及2名健康成员和100名正常对照的外周血10 mL,提取白细胞DNA,应用聚合酶链反应分别扩增TGFBI基因的第4、11、12、14外显子,并对扩增产物进行直接测序分析.结果 发现TGFBI基因第623密码子第2个碱基呈杂合性点突变G→A,导致甘氨酸突变为天冬氨酸(p.G623D),家系中健康成员和正常对照均未检测到此突变存在.结论 这一由TGFBI基因G623D突变引起的角膜营养不良为非典型的Reis-Buckler角膜营养不良,这在我国属首次报告.
关键词： Reis-Bückler角膜营养不良 TGFBI基因 杂合子 突变 -
格子状角膜营养不良一家系TGFBI基因的突变研究
目的 研究一个格子状角膜营养不良家系的临床特征及TGFBI基因的突变类型.方法 收集该家系4代35名成员(其中患者11例)的外周血样,提取基因组DNA,应用PCR和DNA直接测序技术,对TGFBI基因17个外显子及外显子内含子拼接部进行基因变异的检测;用生物信息学软件分析基因变异对蛋白质结构和功能的影响.并对家系成员进行详细的临床检查.结果 家系中所有患者TGFBI基因第4外显子存在p.R124C杂合性变异,正常成员未发现此变异,生物信息学分析p.R124C变异为已报道的TGFBI基因突变类型,该突变对蛋白质结构和功能为致病性.该家系中p.R124C突变与疾病表型共分离,呈常染色体显性遗传,结合患者的临床特征,确诊为典型格子状Ⅰ型角膜营养不良.结论 该格子状Ⅰ型角膜营养不良家系存在TGFBI突变,为致病性p.R124C杂合性突变.基因分析为疾病明确诊断提供了可靠的依据.
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三个角膜营养不良家系的TGFBI基因突变
目的 筛查3个角膜营养不良家系患者TGFBI基因突变.方法 采集患者外周静脉血,提取基因组DNA,采用直接测序对TGFBI基因全部17个外显子以及外显子内含子拼接部进行序列分析.结果 3个家系中两个家系表型为格子样角膜营养不良1型(1attice corneal dystrophy type I,LCD I)和格子样角膜营养不良3A型(lattice corneal dystrophy type ⅢA,LCDⅢA),另外1个家系为Avellino角膜营养不良(avellino corneal dystrophy,ACD).在两个LCD家系中分别检出编码子R124C和H626R突变,而在ACD家系中检出R124H突变.结论 TGFBI基因是引起角膜营养不良的致病基因.R124和H626是角膜营养不良的突变热点.
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角膜营养不良家系的TGFBI基因突变研究
目的确定中国角膜营养不良患者所存在的TGFBI基因突变类型. 方法对3个角膜基质营养不良家系和1个Thiel-Behnke角膜营养不良家系进行分析,其中1个家系成员是蒙古族人,另3个家系则是汉族人.利用合成的TGFBI基因13个外显子的特异性引物,应用聚合酶链反应进行扩增,并直接测序分析. 结果 1个颗粒状角膜营养不良家系患者中检测到R555W突变;1个Thiel-Behnke角膜营养不良家系患者为R555Q突变;另外2个Avellino 角膜营养不良家系患者中发现 R124H突变,这3种突变均为杂合子. 结论研究表明R555和R124密码子在中国人常染色体显性遗传性角膜营养不良的发病机理中起重要作用.Thiel-Behnke角膜营养不良患者为R555Q突变,在我国属首次报告.
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上皮基底膜角膜营养不良家系的TGFBI基因突变1例研究
目的:检测1例中国上皮基底膜角膜营养不良家系TGFBI基因突变类型.方法:经过详细的病史采集及临床检查后,提取先证者及其家系内其他2例患者和4例有血缘关系的正常家系成员的静脉血白细胞DNA,应用PCR直接测序法对TGFBI的17个外显子进行候选基因的突变检测.结果:在该家系患者的TGFBI基因4号外显子发现了c.417C>T,导致了杂合突变R124C.家系中正常成员及对照组均未检测到该突变.结论:本研究首次报道了TGFBI基因的R124C杂合突变导致了上皮基底膜角膜营养不良,拓宽了角膜营养不良的基因型与表现型关系,为进一步的分子遗传学研究奠定了基础.
关键词： TGFBI基因 上皮基底膜角膜营养不良 基因突变
