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外周听觉改变致听皮质突触N-甲基D-天冬氨酸受体亚基表达变化
目的 观察听觉剥夺后重塑模型中听皮质突触N-甲基D-天冬氨酸受体亚基(N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2B,NR2B)表达变化.方法 采用清洁级SD大鼠90只,分成听觉剥夺组、听觉剥夺后重塑组及对照组,Optiprep沉降梯度超速离心从初级听皮质提取高度纯化的突触体后,采用Western blotting蛋白质印迹检测技术对生后听觉剥夺14天组、28天组、42天组、听觉剥夺7天后再给予纯声暴露的各实验组听皮质突触体NR2B表达进行比较.结果 听觉剥夺使生后14天组和28天组动物听皮层NR2B表达水平明显下降(P<0.05),听觉剥夺7天后再给予纯声暴露则又使NR2B表达水平明显提高(P<0.05),呈现双向调节趋势.听觉剥夺和纯声暴露对生后42夭组成熟大鼠听皮层NR2B表达不再产生明显调节作用(P>0.05).结论 在大鼠生后发育关键期,听觉剥夺、可改变听皮层NMDA受体NR2B蛋白表达水平;为研究感觉功能发育可塑性机制提供了重要实验资料.
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N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基基因重组腺病毒镇痛疫苗的构建
目的 构建携带N-甲基-D-天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)基因的重组腺病毒镇痛疫苗.方法 以携带NR2B基因的腺病毒穿梭质粒pDC515-NR2B和腺病毒骨架质粒pBHGfrt(del)E1,3FLP共转染腺病毒包装细胞293细胞,连续观察细胞的形态学.取形成病毒空斑的293细胞,分别采用PCR、RT-PCR及Western blotting的方法从基因水平、转录水平和蛋白水平对病毒空斑筛选和鉴定,对鉴定正确的病毒空斑进行扩增和纯化.结果 转染后12 d可观察到细胞病变效应,15 d后形成病毒空斑.NR2B基因不仅正确插入重组腺病毒载体,而且可在293细胞正确表达NR2B蛋白.鉴定正确的病毒空斑命名为NR2B基因重组腺病毒5型镇痛疫苗,滴度为5×1011 VP/ml,纯度100%.结论 成功地构建了NR2B基因重组腺病毒镇痛疫苗,可用于疫苗镇痛的研究.
关键词： 受体 N-甲基-D天冬氨酸 腺病毒科 疫苗 镇痛 -
rAd5/NR2B镇痛疫苗对神经病理性痛大鼠认知功能的影响
目的 评价N-甲基-D天冬氨酸受体2B亚基(NR2B)基因重组腺病毒(rAd5/NR2B)对神经病理性痛大鼠认知功能的影响.方法 雌性SD大鼠40只,体重180～200 g,随机分为4组(n=10):对照组(C组)、rAd5/NR2B镇痛免疫组(rAd5/NR2B组)、神经病理性痛组(SP组)和rAd5/NR2B镇痛疫苗+神经病理性痛组(rAd5/NR2B+SP组).C组和rAd5/NR2B组分别胃内灌注生理盐水0.1 ml和rAd5/NR2B镇痛疫苗1×10~8 PFU,2周后重复灌注.SP组制备神经病理性痛模型,1周后腹腔注射生理盐水0.1 ml.rAd5/NR2B+SP组胃内灌注rAd5/NR2B镇痛疫苗1×10~8 PFU,2周后重复灌注,再1周后制备神经病理性痛模型.测定大鼠机械缩爪阈值(MWT).行Morris水迷宫实验测定大鼠认知功能,记录潜伏期和游泳速度.采用免疫组织化学法检测大鼠海马NR2B的表达水平.结果 (1)与C组比较,rAd5/NR2B组MWT差异无统计学意义(P＞0.05),SP组和rAd5/NR2B+SP组MWT降低(P＜0.05);与SP组比较,rAd5/NR2B+SP组MWT升高(P＜0.05).(2)各组游泳速度比较差异无统计学意义(P＞0.05);与C组比较,rAd5/NR2B组潜伏期差异无统计学意义(P＞0.05),SP组和rAd5/NR2B+SP组潜伏期延长(P＜0.05);与SP组比较,rAd5/NR2B+SP组潜伏期差异无统计学意义(P＞0.05).(3)与C组比较,rAd5/NR2B组和rAd5/NR2B+SP组海马NR2B表达差异无统计学意义(P＞0.05),SP组海马NR2B表达上调(P＜0.05);与SP组比较,rAd5/NR2B+SP组海马NR2B表达下调(P＜0.05).结论 rAd5/NR2B疼痛疫苗对神经病理性痛大鼠认知功能无明显影响.
关键词： 受体 N-甲基-D天冬氨酸 腺病毒科 神经痛 认知障碍 -
不同浓度利多卡因对大鼠脑海马锥体神经元钠、钙电流的影响
目的:观察不同浓度利多卡因对大鼠海马锥体神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体介导钙电流和钠电流的影响,初步探讨低浓度利多卡因对神经元缺氧保护的电生理基础.方法:实验于2001-06/2002-08在北大医院麻醉生理实验室进行.将已培养12～14 d的Wistar大鼠海马神经元按利多卡因浓度(10-5～10-1 mol/L)分成5组(n=6),以不含利多卡因组做对照,应用全细胞膜片钳方法,采用无间隙模式,采集记录各组大鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸介导钙电流、电压依赖性钠电流的变化及各组静息电位的情况.结果:①同对照组相比,利多卡因浓度为10-3,10-2,10-1 mol/L时明显抑制N-甲基-D-天冬氨酸介导钙电流,电流密度依次为5.2±1.9,3.0±0.5,33±1.0(P＜0.05或0.01),其余浓度对N-甲基天冬氨酸介导钙电流无明显作用.②利多卡因浓度为10-4,10-3 mol/L时,电压依赖性钠通道电流密度依次为160.9±19.2,68.2±6.5,同对照组相比明显减少,利多卡因浓度为10-2,10-1 mol/L时钠电流被完全抑制(P＜0.05或0.01).结论:利多卡因可浓度依赖性抑制N-甲基-D-天冬氨酸介导钙电流和钠电流,低浓度利多卡因的脑保护作用可能与此有关.
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COX-2抑制剂对NMDA损伤视网膜神经节细胞层神经元的保护机制研究
目的 探讨COX-2抑制剂NS398对N-甲基-D天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)诱导的大鼠视网膜损伤模型的神经保护作用.方法 25只大鼠随机分成5组:正常组、NMDA组、NMDA+不同剂量NS-398(1 ng·mL-1、10 ng· mL-1、100ng·mL-1)组.NMDA组于大鼠双眼玻璃体内注射5μL NMDA(40 nmol·L-1),NMDA+不同剂量NS-398组于大鼠双眼玻璃体内注射5 μL NMDA(40nmol· L-1)及NS-398(1 ng·mL-1,10ng·mL-1,100 ng·mL-1).7d后,取眼球组织,并对视网膜神经节细胞层(retinal ganglion cell layer,RGCL)神经元数目进行计数,采用TUNEL法和免疫组织化学染色分别测定RGCL神经元的凋亡以及视网膜组织中caspase-3、COX-2的表达.结果 NMDA组大鼠RGCL神经元数目为正常大鼠的(47±3)％,与NMDA组比较,NMDA+ NS-398组的RGCL神经元数目明显增多,低、中、高三种剂量组RGCL神经元数目依次为正常组的(63±5)％、(82±7)％、(73±3)％;NMDA组caspase-3的表达为正常组的(327±21)％,NMDA+ NS-398组caspase-3的表达显著下调,低、中、高三种剂量组caspase-3的表达依次为正常组的(223±14)％、(197±18)％、(261±16)％;NMDA组COX-2的表达为正常组的(315±11)％,NMDA+ NS-398组的表达显著下调,低、中、高三种剂量组COX-2的表达依次为正常组的(280±20)％、(233±16)％、(255±19)％.结论 抑制COX-2表达能够抑制NMDA导致的RGCL细胞凋亡,对视网膜产生保护作用.
关键词： 视网膜 N-甲基-D天冬氨酸 COX-2抑制剂 细胞凋亡 神经保护 -
氯胺酮对小鼠吗啡戒断症状和脊髓星形胶质细胞活性的影响
目的研究氯胺酮对小鼠吗啡戒断症状和脊髓星形胶质细胞活性的影响.方法昆明种小鼠30只,随机分为5组(n=6),A组:皮下剂量递增法给药建立吗啡依赖模型;B组:对照组,给予等容积的生理盐水;C、D、E3组:吗啡用药均同A组,后一次吗啡注射30 min后分别腹腔注射0、8、16 mg/kg氯胺酮.观察纳络酮催瘾后戒断症状的改变;用免疫组化方法测定各组脊髓星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫反应阳性产物的变化.结果与C组相比,D组可缓解吗啡戒断症状(P＜0.05),而E组则明显缓解(P＜0.01);D组和E组吗啡戒断所致的体重下降显著减轻(P＜0.01).脊髓GFAP免疫反应阳性产物表达相对面积,A组与B组比较,D、E组与C组比较差异均无显著性意义(均为P＞0.05).结论氯胺酮可缓解小鼠吗啡戒断症状,脊髓星形胶质细胞GFAP活性可能未参与介导吗啡依赖和戒断反应.
关键词： 星形胶质细胞 吗啡依赖 戒断症状 氯胺酮 N-甲基-D天冬氨酸
