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三溴丙酮酸抑制恶性转化的树突状细胞增殖的实验研究
目的 从阻滞糖代谢途径,探讨三溴丙酮酸(3-BrPA)抑制恶性转化的树突状细胞(DC)增殖的可能性.方法 采用髓源性小鼠DC与人脑胶质瘤干细胞(SU3细胞株)体外共培养的方法,诱导DC恶性转化,对恶性转化的DC单克隆,培养的细胞命名为胶质瘤干细胞诱导恶性转化的DC (GSPC-MTDCs).采用CCK-8法和细胞平板克隆形成实验检测SU3、正常DC、GSPC-MTDCs的增殖能力;采用Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力.将GSPC-MTDCs接种于20只无荧光裸小鼠皮下,接种后11d,选取致瘤均一的10只裸鼠分为干预组和对照组,每组5只.干预组给予3-BrPA(5 mg·kg-1·d-1)腹腔注射,对照组给予等体积的生理盐水腹腔注射,共干预24 d.比较两组的致瘤情况.结果 (1) GSPC-MTDCs具有永生化特征,与SU3相比,其增殖速度加快,克隆形成率明显增高[(38.1±1.9)％对比(30.2±2.7)％,P＜0.01];Transwell小室侵袭实验显示,GSPC-MTDCs侵袭能力强于SU3[(1 042±49)个对比(782 ±38)个,P＜0.01)].(2)GSPC-MTDCs接种于无荧光裸小鼠皮下和尾静脉后全部致瘤.3-BrPA干预后24 d,干预组和对照组肿瘤的重量分别为(1.5±0.6)g、(3.3±1.0)g,差异有统计学意义(P =0.0107).病理学观察显示,相较于干预组,对照组细胞核异形明显、核分裂象多、血管丰富、炎症细胞浸润明显、c-myc阳性细胞比例高.结论 胶质瘤干细胞具有诱导DC恶变的潜能;3-BrPA具有抑制GSPC-MTDCs增值的作用.
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三溴丙酮酸对结肠癌HCT-8/V细胞增殖及其mdr1基因、P-gp蛋白表达的影响
目的 探讨三溴丙酮酸(3-BrPA)对结肠癌HCT-8/V耐药细胞株细胞增殖及mdr1基因和P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达的影响.方法 取结肠癌HCT-8/V耐药细胞株、HCT-8细胞株,设置为对照组,10、20、40、80 mg/L长春新碱组及50、75、100、125μmol/L 3-BrPA组,对照组加入PBS,10、20、40、80 mg/L长春新碱组分别加入10、20、40、80 mg/L长春新碱,50、75、100、125μmol/L 3-BrPA组分别加入50、75、100、125μmol/L 3-BrPA.应用MTT法测算3-BrPA及长春新碱干预后HCT-8/V、HCT-8细胞存活率.应用RT-PCR及Western blotting技术检测3-BrPA作用HCT-8/V细胞后mdr1基因及P-gp蛋白表达.结果 24 h后,长春新碱组与对照组相比,HCT-8、HCT-8/V细胞存活率降低(P均<0.01);3-BrPA组与对照组相比,细胞存活率均降低(P均<0.01).HCT-8、HCT-8/V mdr1基因相对表达量分别为1.000±0.000、10.539±1.814,P<0.01.HCT-8/V细胞经0、75、125μmol/L 3-BrPA处理24 h后,mdr1基因相对表达量分别为1.000±0.000、0.733±0.058、0.542±0.103,不同浓度3-BrPA作用后mdr1基因的相对表达量比较,P均<0.01.HCT-8、HCT-8/V细胞P-gp相对表达量分别为0.044±0.036、1.665±0.188,P<0.01.HCT-8/V细胞经0、75、125μmol/L 3-BrPA处理24 h后,P-gp相对表达量分别为1.441±0.259、1.140±0.252、0.618±0.274,0、125μmol/L 3-BrPA处理后P-gp表达比较,P<0.01.结论 3-BrPA可抑制结肠癌HCT-8/V细胞增殖,降低mdr1基因及P-gp蛋白表达.
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三溴丙酮酸对MCF-7细胞增殖、侵袭的影响及其机制研究
目的 探讨三溴丙酮酸(3-BrPA)对MCF-7细胞增殖、侵袭,以及对真核转录起始因子5A2(eIF5A2)、c-myc基因、转移相关蛋白1(MTA1)表达的影响.方法 实验分为5组:加入等量PBS的对照组,75、100、125和150μmol/L 3-BrPA组.分别将3-BrPA作用于MCF-7细胞24、48和72 h,利用MTT、Transwell法检测3-BrPA对MCF-7细胞存活率和侵袭的影响.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测eIF5A2、c-myc、MTA1基因和蛋白的变化.结果 与对照组比较,3-BrPA作用于乳腺癌MCF-7细胞后,细胞存活率降低(P<0.05),并且具有时间和剂量依赖性.Transwell结果显示,3-BrPA作用于MCF-7细胞24 h后,与对照组相比,穿过小室的细胞数减少(P<0.05).RT-PCR和Western blot检测结果提示,eIF5A2、c-myc、MTA1基因和蛋白表达水平随着药物浓度的增加而降低(P<0.05).结论 3-BrPA可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖及侵袭,其作用机制可能与降低eIF5A2、c-myc、MTA1基因和蛋白的表达有关.
