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ECRG2基因对人类纤维肉瘤HT1080细胞侵袭迁移能力的影响
目的 探讨ECRG2基因在人类纤维肉瘤侵袭和转移过程中的作用.方法 应用RNA干扰技术抑制内源性ECRG2基因在人类纤维肉瘤HT1080细胞中的表达,建立ECRG2基因在该细胞中的可诱导表达系统,Western blotting方法观察细胞ECRG2蛋白表达水平的变化,细胞划痕实验和Transwell侵袭实验观察HT1080细胞迁移、侵袭能力的变化.结果 Western blotting检测筛选得到敲除内源性ECRG2基因的佳Tet-on可诱导表达克隆.细胞划痕实验和Transwell侵袭实验发现,敲除内源性ECRG2基因明显促进HT1080细胞的侵袭迁移能力,而表达外源ECRG2基因的HT1080细胞侵袭、迁移能力显著下降.结论 ECRG2基因与人类纤维肉瘤的侵袭转移潜能相关,外源ECRG2基因的表达可明显抑制人类纤维肉瘤HT1080细胞的侵袭、迁移能力.
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土槿乙酸对人HT1080细胞系增殖抑制的体外研究
目的:研究土槿乙酸(PAB)对人成纤维肉瘤(HT1080)细胞系生长的抑制效应,并探讨其作用机制.方法:用不同浓度的PAB加入体外培养HT1080细胞中,观察加药后细胞生长数量及其形态的变化;用MTT法检测PAB的细胞毒作用;用Hoechest 33342和PI双荧光染色法检测细胞凋亡.结果:PAB明显抑制HT1080细胞生长,IC 50值为5μmol/L,其抑制率与药物浓度呈剂量依赖关系,凋亡细胞的比例与药物浓度及作用时间呈正相关.结论:PAB能有效抑制HT1080细胞的增殖.
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苦参碱对人HT1080细胞系增殖抑制的体外研究
目的:研究苦参碱(Matrine)对人成纤维肉瘤(HT1080)细胞系生长的抑制效应,并探讨其作用机制.方法:用不同浓度的Mat加入体外培养HT1080细胞中,观察加药后细胞生长数量及其形态的变化;用MTT法检测Mat的细胞毒作用.结果:Mat明显抑制HT1080细胞生长;IC50值为350μg/ml;其抑制率与药物浓度呈剂量依赖关系.结论:Mat能有效抑制HT1080细胞的增殖.
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五倍子酸对人纤维肉瘤 HT1080细胞增殖和凋亡的影响
目的：研究五倍子酸（ GA）对人纤维肉瘤HT1080细胞增殖和凋亡的影响。方法：分别用3．125、6．250、12．500、25．000、50．000和100．000 mg／L的GA处理HT1080细胞48 h后，应用MTT法检测细胞的抑制率；分别以6．250、12．500和25．000 mg／L的GA作用HT1080细胞48 h后，应用流式细胞仪检测细胞凋亡情况，应用免疫细胞化学方法检测GA对HT1080细胞中Bcl－2和Bax蛋白表达的影响。结果：GA对HT1080细胞以剂量依赖的方式抑制其增殖（F＝71．214，P＜0．001）、诱导其凋亡（F＝52．217，P＜0．001），并能上调Bax蛋白的表达（F＝11．024，P＜0．001）、下调Bcl－2蛋白的表达（F＝8．741， P＜0．001）。结论：GA可能通过上调Bax蛋白的表达和下调Bcl－2蛋白的表达来抑制HT1080细胞增殖和诱导其凋亡。
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人Endostatin cDNA的克隆及其在HT1080细胞中的表达
目的:构建能表达人Endostatin的真核表达质粒.方法:设计引物从成人肝cDNA文库中通过PCR扩增到Endostatin cDNA,并在5′端融合编码人胰岛素信号肽序列,经测序证实后连接到真核表达载体pcDNA3.1(-)中.将携带基因的真核表达载体质粒pcDNA3.1(-)/SEND转染HT1080细胞后用G418筛选获得克隆,采用RT-PCR和Western-blot检测Endostatin的表达.结果:测序结果表明克隆的人Endostatin cDNA完全正确,并且在其5′端融合编码人胰岛素信号肽序列;RT-PCR显示转染后的HT1080细胞可以有效地转录Endostatin mRNA;Western-blot检测到转染后的HT1080细胞上清有相应的蛋白质,大小为20kD左右.结论:含有人胰岛素信号肽序列的人Endostatin cDNA重组质粒pcDNA3.1(-)/SEND转染HT1080细胞后可以有效的表达目的蛋白并能分泌到细胞外,本研究为Endostatin的功能研究及应用于基因治疗提供基础.
关键词： endostatin 血管形成抑制因子 HT1080细胞 -
喹诺酮类化合物H25抗肿瘤侵袭活性体外研究
目的 研究喹诺酮类化合物H25抗肿瘤细胞侵袭转移的活性,初步探讨其作用机制.方法 明胶酶谱法验证H25对Ⅳ型胶原酶的竞争性抑制作用.MTT法检测H25对HT1080细胞的生长抑制作用.TranswellTM侵袭小室试验检测H25对HT1080细胞侵袭转移的抑制作用.明胶酶谱法和RT-PCR法检测H25对MMP-2、MMP-9表达水平的影响.细胞粘附试验观察H25对HT1080细胞粘附作用的影响.结果 H25能竞争性抑制Ⅳ型胶原酶的水解酶活性.5h和48h药物处理条件下,H25对HT1080细胞生长抑制作用的IC50分别为13.51和1.311μmol/L.TranswellTM侵袭小室试验中,H25对HT1080细胞侵袭Matrigel的抑制率分别为49.1%(1μmol/L,5h)、25.9%(0.1μmol/L,5h)、69.4%(0.1μmol/L,48h)、39.6%(0.01μmol/L,48h),其有效抑制浓度低于细胞生长抑制浓度.明胶酶谱分析证明,H25处理过的HT1080细胞培养上清中Ⅳ型胶原酶活性明显降低.但RT-PCR分析未检测到MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平的变化.另外,1μmol/L的H25能抑制HT1080细胞的异质粘附作用.结论 H25能有效抑制HT1080细胞的侵袭,不仅因为H25是Ⅳ型胶原酶的竞争性抑制剂,而且可能与其对MMP-2、MMP-9表达的转录后抑制和异质粘附抑制相关.
