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消减免疫法制备抗人肝癌凋亡细胞抗体
目的分析原发性肝细胞癌(简称肝癌 )细胞凋亡过程中凋亡相关抗原的表达情况,探讨制备抗凋亡细胞抗体的方法.方法用6%乙醇作用6h诱导肝癌细胞系HCC-9204细胞凋亡,透射电镜观察其形态学变化,流式细胞仪分析细胞DNA含量.消减免疫法免疫10只Balb/c小鼠.分别于初次免疫后第1 4d、21d、和28d取鼠尾血.免疫细胞化学法检测抗体产生情况及其特异性.结果透射电镜可见大部分细胞出现凋亡形态学变化.流式细胞仪分析可见明显的亚二倍体凋亡峰.初次免疫后第28d,有2只鼠的尾血在凋亡细胞呈强阳性,而与非凋亡细胞的反应很弱.结论肝癌细胞凋亡过程中有凋亡相关抗原的表达升高或新抗原的产生.消减免疫法有助于制备抗在凋亡细胞高表达,而在非凋亡细胞低表达或不表达的凋亡相关抗原的抗体.
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单克隆抗体研究新进展
单克隆抗体技术是现代生命科学研究的重要工具,在基因和蛋白质的结构和功能研究方面有着不可或缺的作用.本文全面综述了单克隆抗体研究新进展.通过构建真核表达载体,采用DNA免疫、细胞免疫、消减免疫和多位点重复免疫等现代分子免疫学方法,快速制备高亲合力的单克隆抗体,改进常规方法制备单抗费时费力且亲合力低的弱点,对后基因时代蛋白质组学等基础研究领域的研究具有巨大的推动作用;同时在生物芯片、临床医学和疾病的诊断与治疗以及空间生命科学等应用领域有着广阔的应用前景.
关键词： 单克隆抗体 DNA免疫 细胞免疫 消减免疫 多位点重复免疫(RIMMS) -
应用环磷酰胺消减免疫筛选纯系小鼠抗人肝癌脾细胞库
目的:环磷酰胺消减免疫以筛选纯系小鼠抗人肝癌脾细胞库.方法:应用环磷酰胺消减免疫法免疫BALB/C小鼠,免疫组化法检测小鼠血清与正常成人肝组织、肝癌组织的反应性,获取纯系小鼠脾细胞库.结果:免疫组化显示消减免疫后小鼠血清未与正常肝组织发生反应,而肝癌组织染色明显,胞浆与胞核均着色.结论:应用环磷酰胺作为消减免疫的药物能筛选较好的抗人肝癌小鼠细胞库,为相关的试验研究奠定了基础.
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消减免疫法制备克伦特罗单克隆抗体
目的:制备克伦特罗(CL)单克隆抗体.方法:重氮化法制备克伦特罗完全抗原,消减免疫法免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术制备抗克伦特罗单克隆抗体.结果:消减免疫法使小鼠获得了对BSA的耐受,单抗筛选过程中获得了高达8.2%的阳性率.后得到了针对CL的特异性抗体.结论:用消减免疫法制备针对小分子污染物的单克隆抗体,可减少在制备单克隆抗体时筛选的工作量,可增加获得预期抗体的机会.
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消减免疫法制备抗HL60、HL60/ADR表面抗原差异抗体
目的:建立可特异识别HL60和HL60/ADR细胞膜表面差异蛋白的抗体库,制备单克隆抗体并研究其生物学活性.方法:通过Cp诱导的消减免疫法免疫BALB/c小鼠,采用传统杂交瘤技术制备可特异识别两种细胞差异膜蛋白的单克隆抗体;采用FACS和激光共聚焦显微镜鉴定其和两种靶细胞结合的特异性和差异性.结果:获得51株候选的差异抗体,成功筛选并纯化其中一株单抗(5F6).5F6与可特异稳定的识别HL60/ADR细胞,结合率扣除本底为68.2%,而该抗体与HL60细胞的结合率为17%.结论:SI结合差异筛选的方法是制备差异抗体便捷可行的方法,所获得的单克隆抗体与HL60和HL60/ADR细胞膜蛋白结合有特异性和差异性,实验中所获得的单抗是寻找肿瘤耐药的新靶点和发现肿瘤耐药新机制的工具,为研究这些问题开拓了新思路.
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应用消减免疫法制备抗肝癌单克隆抗体
1材料和方法1.1 材料①实验动物:BALB/c雌性小鼠8 wk龄,体质量18～20 g,购自本校实验动物中心;②组织细胞:正常成人新鲜肝组织,肝癌组织取自本校外科手术标本,部分组织以中性福尔马林固定,低温石蜡包埋切片,4℃保存备用.
