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高脂饮食诱导肠腺瘤恶变机制研究
目的 肠癌是消化道常见恶性肿瘤之一,越来越多的流行病学研究及动物实验表明高脂饮食(high fat diet,HFD)是肠癌发生的重要危险因素之一.本研究探讨HFD促进肠腺瘤恶变可能的分子机制.方法 4周龄Apcmin/+小鼠分为HFD组和对照组(常规饮食).12周后处死,观察各组小鼠肠道腺瘤数目、大小及分布.采用HE染色评价腺瘤病理类型及癌变情况,Ki-67免疫组织化学染色评价肿瘤细胞增殖水平,脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法评价细胞凋亡.Real-time PCR和免疫组织化学染色评价单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant pro-tein-1,MCP-1)及其受体CC趋化因子受体2(CC chemokine receptor 2,CCR2)的mRNA和蛋白表达.免疫荧光双染法检测肠道肿瘤组织中巨噬细胞表面分子F4/80、M1型及M2型肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)表面分子的表达.结果 HFD组肠道腺瘤总数较对照组明显增加(26.60±1.03 vs 10.20±0.92,t=11.90,P＜0.001),HFD组60％远段小肠和结肠腺瘤发生粘膜内癌,而对照组腺瘤未见癌变.HFD可增加肠道肿瘤Ki-67阳性细胞百分比[(70.80±7.57)％vs (30.80±5.77)％,t=4.20,P＜0.01],降低肿瘤细胞凋亡百分比[(13.00±1.14)％vs(42.60士1.50)％,t=15.69,P＜0.001].HFD组肠道肿瘤组织MCP-1和CCR2 mRNA的表达水平增高,MCP-1及CCR2阳性细胞百分比较对照组明显增加[(73.80±7.02)％vs (36.80±4.68)％,t=4.38,P＜0.01;(63.20±2.15)％vs (26.80±2.22)％,t=11.76,P＜0.001].免疫荧光双染提示HFD组肠道巨噬细胞表面分子F4/80和M2型TAMs表面分子MR阳性表达明显增加,M1型TAMs表面分子iNOS阳性表达明显减少.结论 高脂饮食可活化MCP-1/CCR2信号通路促进TAMs募集及M2型TAMs极化进而促进Apcmin/+小鼠肠道腺瘤发展成为肠癌.
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胆酸通过诱导肠道低度炎性反应激活IL-6/STAT3通路在肠腺瘤癌变中的作用
目的 探讨胆酸对APCMin/+小鼠肠道瘤癌变的影响及分子机制.方法 将18只SPF级APCMin/+小鼠随机分为实验组和对照组各9只.对照组给予常规饮食,实验组在常规饲料中加0.5g胆酸.喂养12 w后断髓处死,观察肠道肿瘤数目和大小;苏木素-伊红(HE)染色评价肿瘤病理类型,Ki-67免疫组化染色检测肿瘤细胞增殖情况;qRT-PCR检测肠道炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α mRNA表达水平.培养永生化结肠上皮细胞系(IMCE),Western印迹检测IL-6/信号转导和转录激活因子(STAT)3蛋白及其下游细胞周期蛋白表达水平.结果 实验组小鼠肠道腺瘤总数、小肠腺瘤数、结肠息肉数均明显多于对照组(P<0.01),肠道腺瘤直径明显大于对照组(P<0.05),肠道肿瘤组织中 Ki-67阳性细胞率明显高于对照组(P<0.05).HE染色未见小鼠肠道组织中存在明显炎性细胞浸润,但qRT-PCR检测显示,实验组小鼠肠道IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA相对表达量明显高于对照组(P<0.01).胆酸可显著上调IMCE磷酸化的STAT3蛋白表达水平和下游细胞周期蛋白表达水平,胆酸刺激组磷酸化STAT3(Tyr816)和细胞周期调节蛋白的相对表达量均明显高于对照组(P<0.01).结论 胆酸可通过诱导肠道低度炎性反应激活IL-6/STAT3通路促进肿瘤细胞增殖,诱发APCMin/+小鼠肠道瘤癌变.
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Pkhd1基因的缺失可促进ApcMin/+小鼠肠道肿瘤的发展演进
目的 确定人类常染色体隐性遗传性多囊肾病(ARPKD)致病基因Pkhd1在ApcMin/小鼠肠道肿瘤发生中的作用.方法 Pkhd1基因敲除小鼠模型(Pkhd1-/-)与肠道肿瘤模型ApcMin/+小鼠杂交后,比较不同月龄(1、3、6月)单一ApcMin/+小鼠与缺失Pkhd1的ApcMin/+小鼠(Pkhd1-/-;ApcMin)肠道肿瘤的数目及大小,并观察其肠道肿瘤组织病理的变化.结果 与单一的ApcMin/+小鼠相比,Pkhd1-/-;ApcMin/+小鼠在1月龄时,肠道肿瘤数目及大小均无显著差异.但该小鼠在3月龄和6月龄时肠道肿瘤数目及大小均显著增加(P=0.017、P=0.022).此外,在6月龄时,Pkhd1-/-;ApcMin/+小鼠病理表型有向恶性转化的明显趋势.结论 具有Pkhd1缺失的Apc Min/+小鼠与单一的ApcMin/小鼠相比能够显著促进肠道肿瘤的发生和发展,并具有促进其肿瘤恶性转化的趋势.
关键词： 肠道肿瘤 Apcmin/+小鼠 常染色体隐性遗传性多囊肾病 PKHD1 -
白细胞介素6/信号转导和转录激活因子3通路在胆酸诱导Apcmin/+小鼠肠腺瘤癌变中的作用
目的 探讨胆酸对A pcmin/小鼠肠道腺瘤癌变的影响及其作用机制.方法 将20只Apcmin/+小鼠分为对照组和胆酸组,每组10只.对照组常规饮食,胆酸组在常规饮食基础上添加0.4％胆酸.给药12周后处死,观察两组肠道肿瘤数目、大小和分布情况.HE染色评价肠道肿瘤病理类型,Ki-67免疫组织化学法评价肿瘤细胞增殖水平.实时荧光定量PCR检测肠道炎性细胞因子IL-1p、IL-6和TNF-α mRNA表达水平.通过免疫组织化学法评价胆酸对IL-6/信号转导和转录激活因子3(IL-6/STAT3)通路的激活情况.蛋白质印迹法进一步验证胆酸刺激对IL-6/STAT3及其下游靶基因细胞周期蛋白的影响.统计学分析采用独立样本t检验.结果 与对照组相比,胆酸可显著增加Apcmin/+小鼠肠道腺瘤数量[(22.80±0.93)个比(33.40±1.17)个]和Ki-67阳性细胞率[(31.60±2.14)％比(71.20±3.19)％],差异均有统计学意义(t=7.11、10.31,P均＜0.01).胆酸组HE染色未见明显炎性细胞浸润,炎性细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α相对表达量均高于对照组(分别为7.09±1.03比1.09±0.11,2.27±0.19比0.99±0.09,14.70±2.29比1.13±0.10),差异均有统计学意义(t=5.81、6.11、5.92,P均＜0.01).在小鼠肠道组织中胆酸可明显上调IL-6和磷酸化的STAT3 (Tyr705)的蛋白质表达水平,胆酸刺激永生化结肠上皮细胞系(IMCE)组磷酸化的STAT3 (Tyr705)表达水平约是对照组的5倍(5 517.00±81.50比863.50±9.13),细胞周期蛋白表达水平约是对照组的7倍(11 165.00±78.53比2 443.00±45.85),差异均有统计学意义(t=56.74、95.91,P均＜0.01).结论 胆酸可通过诱导肠道低度炎性反应激活IL-6/STAT3通路,促进肿瘤细胞增殖从而诱导Apcmin/+小鼠肠腺瘤癌变.
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次级胆汁酸诱导Apcmin/+小鼠肠腺瘤癌变及其对肠道菌群的影响
目的 观察并分析次级胆汁酸诱导A pcmin/+小鼠肠道腺瘤癌变及其对肠道菌群的影响.方法 将20只4周龄Apcmin/+小鼠均分为A pcmin/+对照组、A pcmin/+脱氧胆酸组,将20只4周龄野生型C57BL/6J小鼠均分为野生型对照组、野生型脱氧胆酸组.对照组常规饮水,脱氧胆酸组饮用水中含0.2％脱氧胆酸.收集给药0周及12周A pcmin/+小鼠粪便,焦磷酸测序法分析肠道菌群变化.12周后处死,观察各组小鼠肠道腺瘤数目、大小及分布.采用HE染色评价腺瘤病理类型,采用免疫组织化学染色法检测增殖细胞核抗原(PCNA),采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.两组间计量资料的比较采用独立样本t检验.结果 所有野生型小鼠肠道均未出现肿瘤.Apcmin/+脱氧胆酸组小鼠肠道腺瘤总数较A pcmin/+对照组明显增加(57.00±3.07比21.50±4.69,t=20.03,P＜0.01),以大径为1～2 mm的腺瘤增加为显著(30.62±7.73比7.75±4.59,t=8.04,P＜0.05),腺瘤癌变率较Apcmin/+对照组也明显上升.Apcmin+脱氧胆酸组小鼠肠道肿瘤PCNA阳性细胞百分比较Apcmin/+对照组显著增加[(90.17±2.14)％比(41.97±4.26)％,t=31.97,P＜0.01)],肿瘤细胞凋亡百分比显著减少[(1.40±1.12)％比(7.50±0.65)％,t=14.90,P＜0.01].Apcmin/+脱氧胆酸组小鼠肠道菌群多样性明显降低,在菌门水平上厚壁菌门与拟杆菌门比值(0.586 7±0.148 4)较其对照组(0.387 3±0.013 6)明显升高(t=2.36,P＜0.05);在菌属及菌种水平上Apcmin/+脱氧胆酸组致病菌数量增多,益生菌数量明显降低.结论 脱氧胆酸能诱导Apcmin/+小鼠肠道菌群失衡,并可通过增加肠道肿瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡促使肠道腺瘤发展成为肠癌.
关键词： 脱氧胆酸 肠道菌群 癌变 Apcmin/+小鼠 -
PSGL-1在ApcMin/+小鼠肠道肿瘤发生中的作用
目的 研究P-选凝素糖蛋白配体1(P-selectin glycoprotein ligand 1,PSGL-1)在ApcMin/ +小鼠肠道肿瘤中的作用.方法 PSGL-1基因缺失的基因工程小鼠和肠道肿瘤模型ApcMin/ +小鼠杂交后,统计ApcMin/ +小鼠与(ApcMin/ +;PSGL-1-/-)杂交小鼠小肠及大肠肿瘤的数目和总负荷,观测其肠道肿瘤的发生变化.结果 相比ApcMin/ +小鼠,(ApcMin/ +;PSGL-1-/-)杂交小鼠在18周龄时肠道肿瘤数目与总负荷有明显增加.结论 PSGL-1的缺失促进了ApcMin/ +小鼠肠道肿瘤的发生,PSGL-1在人类肠道肿瘤中可能发挥着抑制肿瘤形成的作用.
关键词： 肠道肿瘤 PSGL-1 Apcmin/+小鼠 -
APCMin/+结直肠癌癌前病变小鼠模型的生物学特性
目的 研究C57BL/6J-APCMin/+小鼠肠道腺瘤的生物学特性.方法 记录APCMin/+小鼠的繁育情况,通过统计不同周龄小鼠小肠及大肠腺瘤的数目和总体积,观察其肠道腺瘤的发生、发展规律;通过病理组织学切片,观察腺瘤的病理学变化;通过免疫组织化学染色,观察WNT信号通路相关基因的表达情况.结果 APCMin/+小鼠9周龄时肠道开始有腺瘤发生,24周龄时多数小鼠出现死亡.从9～24周龄,腺瘤体积持续增大,但小肠腺瘤数目不再增加.免疫组化染色显示腺瘤中β-catenin入核,启动WNT信号通路下游原癌基因cyclinD1活化.结论 APCMin/+小鼠是良好的结直肠癌前病变动物模型.
关键词： 结直肠肿瘤 Apcmin/+小鼠 腺瘤 病理变化 -
脱氧胆酸促进Apcmin/+小鼠肠道息肉恶变的机制研究
目的 探讨脱氧胆酸(DOC)对肠道息肉恶变的影响及可能的分子机制.方法 将24只4周龄Apcmin/+小鼠(该小鼠可自发形成肠道腺瘤)随机分为对照组(常规饮用水)及DOC组(含0.2％ DOC饮用水),12周后处死,观察各组小鼠肠道息肉数目、大小及分布.HE染色评价息肉病理类型,免疫组织化学染色法检测细胞增殖标记物(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及Wnt通路关键分子β-catenin和cyclin D1的表达.结果 DOC组肠道息肉总数较对照组增加165％ (57.00 ±3.07 vs 21.50 ±4.69,P＜0.001),其中小肠中段和远段的息肉数量分别增加了153％和371％.DOC组小肠息肉大、中、小直径(＞2 mm、1～2 mm和＜1mm)息肉数量与对照组对比分别增加89％ (10.38 ±4.41 vs 5.50 ±2.93,P＜0.05)、295％(30.62 ±7.73 vs7.75 ±4.59,P＜0.001)和112％(13.50±5.78 vs 6.38 ±2.45,P＜0.01).HE染色示DOC组75％远段小肠和近段结肠发生黏膜内癌,余25％为中-高级别上皮内瘤变,而对照组仅为腺瘤未见癌变.免疫组织化学染色示DOC组PCNA阳性细胞数较对照组增加81％ (90.83±2.60 vs50.10 ±4.51,P＜0.001),β-catenin由胞膜向胞质和胞核移位,cyclin D1胞核内表达增加(β-catenin:87.75±4.35 vs 56.30±4.29,P ＜0.001;cyclin D1:71.93±4.01 vs 35.40 ±3.02,P＜0.001).结论 DOC可能通过干预Wnt通路促进Apcmin/+小鼠肠道息肉细胞增殖,促使肠道腺瘤发展成为肠癌.
关键词： 脱氧胆酸 肠道肿瘤 Wnt信号通路 Apcmin/+小鼠 -
p110δ突变失活的 ApcMin／＋结直肠癌癌前病变小鼠模型的建立
目的：建立p110δ突变失活的ApcMin/＋结直肠癌癌前病变小鼠模型，为研究p110δ在小鼠结直肠癌癌前病变中的作用提供实验模型。方法：将C57BL/6J背景的ApcMin/＋结直肠癌癌前病变小鼠与p110δ突变失活小鼠（p110δD910A/D910A）进行杂交建系，通过PCR技术鉴定子代小鼠基因型，获得p110δ突变失活的ApcMin/＋小鼠。对适龄小鼠进行肠道取材，亚甲蓝染色后，观察肠道结构，对腺瘤和微腺瘤进行统计。肠道组织进行石蜡包埋、切片，做HE染色进行进一步观察。结果：获得p110δ突变失活的ApcMin/＋杂交鼠（ ApcMin/＋；p110δD910A/D910A ）并得以稳定传代。 ApcMin/＋；p110δD910A/D910A杂交小鼠的肠道组织中，腺瘤数目和体积比ApcMin/＋结直肠癌癌前病变小鼠均有减少。结论：成功建立p110δ突变失活的ApcMin/＋结直肠癌癌前病变小鼠模型，并得到小鼠肠道肿瘤的初步表型，为进一步研究p110δ在肠道肿瘤发生发展中的作用提供重要的工具动物。
关键词： 转基因小鼠 P110δ Apcmin/+小鼠
